تقييم العلاج بالبلازما بالضغط الجوي في خلايا الورم الأرومي العصبي المحروم من الجلوكوز

الملخص

المصدر: Yan، X.، وآخرون، تطبيق جديد لنفاثة البلازما ذات الضغط الجوي كعامل وقائي عصبي ضد الإصابة الناجمة عن الحرمان من الجلوكوز لخلايا SH-SY5Y. J. Vis. Exp. (2017)

يوضح الفيديو النشاط العصبي لمعالجة البلازما ذات الضغط الجوي بجرعة منخفضة في خلايا الورم الأرومي العصبي المحرومة من الجلوكوز عن طريق تعديل الإجهاد التأكسدي وتعزيز صلاحية الخلية.

البروتوكول

1. معالجة APPJ (نفاثة البلازما ذات الضغط الجوي) ل SH-SY5Y

1. اضبط المسافة بين فوهة أنبوب الكوارتز والمنصة حيث سيتم وضع لوحة 96 بئر إلى 3 سم. تأكد من أن الشعاع يمكن أن يلمس سطح وسط الاستزراع.
   ملاحظة: لا يتم قياس المسافة من أسفل اللوحة. يتم ضبطه أولا إلى 3 سم بين فوهة أنبوب الكوارتز والمنصة المستخدمة لوضع اللوحة المكونة من 96 بئرا.
2. قبل معالجة APPJ (نفاثة البلازما ذات الضغط الجوي) ، قم بتغيير وسط الثقافة في كل بئر باستثناء آبار التحكم إلى RPMI 1640 بدون وسط الجلوكوز.
3. ضع اللوحة أسفل فوهة APPJ وتأكد من أن النفاثات يمكن أن تطلق عموديا في كل بئر.
4. عالج الخلايا في آبار منفصلة باستخدام APPJ لمدة 0 ثانية و 1 ثانية و 2 ثانية و 4 ثوان و 8 ثوان و 12 ثانية < br / >ملاحظة: يتم إنشاء APPJ عن طريق الهيليوم المؤين (الشكل 1). يتم التعامل مع الخلايا المصابة بالحرمان من الجلوكوز بتدفق الهيليوم لمدة 4 ثوان و 8 ثوان للقضاء على تأثيرات الهيليوم على الخلايا. يجب إجراء جميع العلاجات في ثلاث نسخ.

2. فحص جدوى الخلية

ملاحظة: لا تقم بتغيير الوسيط في هذه الخطوة.

1. بعد علاج APPJ ، احتضان الخلايا لمدة 1 ساعة في حاضنة الخلية.
2. أضف 10 ميكرولتر من محلول Cell Counting Kit-8 (CCK-8) لكل بئر.
3. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات
   ملاحظة: خط خلايا SH-SY5Y حساس لظروف الحرمان من الجلوكوز. تنخفض صلاحية الخلية إلى ما يقرب من 50٪ بعد ساعة واحدة من الحرمان من الجلوكوز ، وهو الشرط الأمثل لبقاء الخلية لدراسات الديناميكا الدوائية. لا يحتوي CCK-8 على سمية خلوية للخلايا ، ويتم تحضين الخلايا بكاشف CCK-8 لمدة 4 ساعات أخرى في ظروف الحرمان من الجلوكوز بعد علاج APPJ للتحقق من صلاحية الخلية. بعد 8 ساعات من الحرمان من الجلوكوز وعلاج APPJ ، تم تقليل التأثير الوقائي ل APPJ بشكل كبير لأن المدة الطويلة للحرمان من الجلوكوز أدت إلى أضرار جسيمة لخلايا SH-SY5Y. لم يكن هناك دليل على وجود خلايا حية بعد 24 ساعة من الحرمان من الجلوكوز.
4. قم بقياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة دقيقة.

النتائج

فئة الشكل = 'صورة image_resized image-style-align-center' style='display:table;margin-left;auto;margin-right:auto;width:75٪;'>

الشكل 1: تفاعلات RNS النموذجية (أنواع النيتروجين التفاعلية) و ROS (أنواع الأكسجين التفاعلية) في انبعاثات APPJ (نفاثة البلازما ذات الضغط الجوي

).

المواد

< فئة الشكل = 'الجدول' ><فئة الجدول = 'ck-table-resize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات SH-SY5Y خط الخليةمركز الصين لمجموعة ثقافة النوع3111C0001CCC000026 RPMI 1640 21875091 علمي حراري متوسطمخزن عند 4 درجات مئويةRPMI 1640 متوسط بدون جلوكوزحراري 11879020 علميمخزن عند 4 درجات مئويةمصل ربلة الساق الجنينية16000044 علمي حراريمخزن في -20 درجة مئوية96 بئر لوحةكورنينج3599 مجموعة عد الخلايا -8 (CCK-8) مختبرات DojindoCK04مخزنة عند 4 درجات مئويةقارئ MicroplateTecanM200 Proلقياس الامتصاص عند 450 نانومترمضخم الطاقة عالي الجهدTrekPD06087لتضخيم وظيفةالطاقة مولد إشارةMaZe Electronics Science &Technology AT30120لتوفير إشارة محددةمسبار الجهد العاليTektronixP6015A للكشف عن راسم الذبذبات الرقمي عالي الجهدTektronixDPO4104Bلعرض الإشارة