تحليل مورفولوجيا الشجيرات عبر ذبابة الفاكهة طبقات وأعمدة النخاع

الملخص

المصدر: Ting، C.، et al.، تحليل مورفولوجيا الشجيرات في الأعمدة والطبقات. J. Vis. Exp. (2017)

يوضح هذا الفيديو إجراء إعداد ذبابة الفاكهة ، والتقاط مداخن الصور الأفقية والأمامية لتشعبات النخاع المسماة GFP تحت مجهر متحد البؤر ، وإنشاء إعادة بناء ثلاثية الأبعاد لتحليل مورفولوجيتها عبر الطبقات والأعمدة.

البروتوكول

1. اكتساب الصورة المزدوجة

ملاحظة: تم تصميم هذه الخطوة للحصول على مجموعتين من الصور العصبية ذات الأهمية في اتجاهين متعامدين (أفقي وأمامي).

1. تحضير أدمغة الذباب التي تحتوي على خلايا عصبية نخاعية ذات علامات ضئيلة (~ 10 خلايا / فص دماغ) بعلامة بروتين فلورسنت أخضر غشائي (GFP) (mCD8GFP). تلطخ الدماغ بالأرانب المضادة ل GFP (لتشعبات الخلايا العصبية النخاعي) والفأر mAb24B10 (للمحاور المستقبلة للضوء) ، والأجسام المضادة الأولية ، والأجسام المضادة الثانوية الفلورية (Alexa 488 المضادة للأرانب و Alexa 568 الأجسام المضادة للفأر). نظف الدماغ في 70٪ من الجلسرين في محلول ملحي مخزن بالفوسفات 1x (PBS).
2. لتركيب الدماغ في الاتجاه الأفقي (الأشكال 1 أ ، ب) ، انقل دماغ الذبابة الذي تم تطهيره بالجلسرين إلى قطرة 20 ميكرولتر من وسط التركيب المضاد للبهتان في وسط الشريحة.
3. قم بإرفاق بقع صغيرة من الطين في 4 زوايا من الغطاء لمنع الغطاء من سحق عينة الدماغ أثناء التركيب.
   ملاحظة: توفر بقع الطين توسيد لمنع الغطاء من سحق العينة. يجب أن يكون قطر كل رقعة طينية حوالي 1 مم.
4. تحت مجهر تشريح ، ضع الأدمغة في الوضع البطني لأعلى وضع الغطاء في الأعلى لتأمين الدماغ. استخدم السطح الظهري المحدب للدماغ كمعلم لتحديد اتجاه عينة الدماغ (الشكل 1 أ).
5. احصل على أول مكدس صور (عرض أفقي) باستخدام مجهر متحد البؤر. استخدم عدسة موضوعية عالية NA (مثل الجلسرين 63X 1.3 NA أو عدسة موضوعية بالغمر بالزيت) وتكبير/تصغير رقمي 2.5X (حجم البكسل 0.105 ميكرومتر لكل بكسل؛ متوسط الرقم هو 2). احصل على أكثر من 180 قسما بصريا (512 × 512 بكسل) لتغطية نيوروبيل النخاع بحجم خطوة 0.2 ميكرومتر.
6. أعد تركيب الدماغ، ولكن قم بمحاذاة الدماغ في الوضع الأمامي لأعلى (المنظر الأمامي).
7. احصل على حزمة الصور الثانية (العرض الأمامي) لنفس الخلايا العصبية.
   ملاحظة: قد يكون العثور على نفس الخلايا العصبية أمرا صعبا عندما يكون هناك العديد من الخلايا العصبية المسماة في الفص البصري. لتحديد نفس الخلايا العصبية من كلا الاتجاهين ، قد تكون هناك حاجة إلى مكدسات صور ذات تكبير أقل من كلا الطريقتين (على سبيل المثال ، استخدم تكبير/تصغير 0.7 ، وحجم خطوة 0.45 ميكرومتر للحصول على مكدسات صور منخفضة الدقة). إذا كانت الصورة أكبر من 512 × 512، فيجب اقتصاص الصورة إلى 512 × 512 قبل مجموعة الصور، ويجب الاحتفاظ بحجم البكسل عند 0.105 ميكرومتر لكل بكسل أثناء تصوير المجال الكبير. يعد فقدان الإشارة مشكلة محتملة للأنسجة العميقة. إذا كانت الإشارة ضعيفة ، فقم بتصوير النصف البطني من الدماغ. لتقليل التبييض الضوئي أثناء المسح الضوئي ، استخدم طاقة ليزر منخفضة قدر الإمكان. استخدم مؤشر النطاق للتحقق من التعريض المفرط قبل الحصول على مكدسات الصور. إذا أمكن ، استخدم مجهر متحد البؤر مزودا بكاشفات GaAsP.
8. تحديد وتسجيل موقع الخلايا العصبية ذات الأهمية فيما يتعلق بعصبية النخاع (اليمين / اليسار [R / L] والظهرية / البطنية [D / V]). تحقق مما إذا كانت العينة قد انتقلت أثناء الحصول على الصورة عن طريق فحص مكدس الصور.
   ملاحظة: غالبا ما يكون نقل العينة بسبب التركيب غير الصحيح. في حالة حدوث حركة عينة، لا يمكن استخدام مكدس الصور للتسجيل ويجب تجاهله. أعد تركيب العينة واحصل على مجموعات الصور من نفس الخلايا العصبية.

2. إزالة الالتفاف الصورة

ملاحظة: تستخدم خطوة الالتفاف برنامج إزالة الالتفاف للصور لاستعادة الصور المكتسبة التي تتدهورت بسبب التعتيم والضوضاء. في حين أن هذه الخطوة اختيارية ، إلا أنها تحسن جودة الصورة بشكل كبير.

1. ابدأ برنامج الالتفاف في الوضع التفاعلي. قم بتحميل مكدس الصور (بتنسيق lsm أو مجهري محدد) عن طريق اختيار القائمة: ملف/فتح (أو Ctrl-o) في النافذة الرئيسية.
2. انقر لتحديد مكدس الصور الذي تم تحميله واختر القائمة: العمليات لفتح نافذة تشغيل الصورة. استخدم خوارزمية تقدير الاحتمالية القصوى الكلاسيكية الافتراضية (CMLE).
3. في نافذة تشغيل الصورة ، انقر فوق علامة التبويب "المعلمات". أدخل المعلمات المناسبة لوسط غمر العدسة (على سبيل المثال ، الزيت ، والجلسرين ، وما إلى ذلك) ، ووسيط التضمين (على سبيل المثال ، زيت الغمر ، وما إلى ذلك) ، والفتحة العددية (NA ؛ هنا ، تم استخدام 1.3). تحقق من المعلمات المتبقية للتأكد من أنها تعكس ظروف التصوير بشكل صحيح. انقر فوق علامة التبويب "تعيين كل ما تم التحقق منه" لإنهاء إعدادات المعلمة.
4. في نافذة تشغيل الصورة ، انقر فوق علامة التبويب "عملية". قم بتعيين وجهة إخراج (على سبيل المثال ، ج). أدخل الأرقام المناسبة في "الإشارة/الضوضاء لكل قناة" (على سبيل المثال، "12 12 12 12" هي نقطة انطلاق جيدة، في حين أن الإعداد الافتراضي هو "20 20 20 20"). استخدم الإعدادات الافتراضية للمعلمات المتبقية.
5. انقر فوق علامة التبويب "تشغيل الأمر" لبدء فك الالتفاف في مكدس الصور ؛ اعتمادا على الكمبيوتر ، قد تستغرق هذه العملية ما يصل إلى عشرات الدقائق حتى تكتمل.
6. في النافذة الرئيسية ، انقر فوق مكدس الصور غير الملتوي وحدده. اختر Menu: Save As لحفظ الصورة غير الملتوية بتنسيق ملف صورة ICS (.ics و .ids).
   ملاحظة: تحتوي كل مكدس صور على ملفين: يحتوي ملف ICS على معلومات الرأس، n ويحتوي ملف ids على معلومات الصورة الأولية.
   1. أعد تسمية ملفات مكدس الصور وفقا لاتجاه التصوير (على سبيل المثال، قم بتسمية مكدسات الصور ذات العرض الأفقي H.ids and H.ics ومكدس الصور المنظر الأمامي F.ids و F.ics).

3. مجموعة الصور ذات العرض

المزدوج ملاحظة: تجمع هذه الخطوة بين مجموعتين من الصور لإنشاء صور ثلاثية الأبعاد عالية الدقة باستخدام برنامج MIPAV.

1. إنشاء مصفوفات لمجموعة الصور.
   1. ابدأ برنامج MIPAV. قم بتحميل مكدسات الصور H و F عن طريق اختيار القائمة: ملف/فتح الصورة (A) من القرص (أو Ctrl-f) /H.ids و F.ids; ستعرض النافذة صورتين.
   2. انقر فوق الصورة H واختر القائمة: الأدوات المساعدة / أدوات التحويل / RGB / Grays ؛ ستعرض النافذة صور GrayG و GrayB و GrayR.
   3. أغلق GrayR و GrayB ، مع الاحتفاظ ب GrayG فقط على النافذة.
   4. انقر فوق الصورة F واختر القائمة: الأدوات المساعدة / أدوات التحويل / RGB / الرمادي. ستعرض النافذة صور GrayG1 و GrayB1 و GrayR1.
   5. أغلق GrayR1 و GrayB1 واحتفظ ب GrayG1 فقط على النافذة. في هذه الخطوة ، يوجد فقط GrayG و GrayG1 على النافذة.
   6. حدد GrayG (تمييز) ، واختر القائمة: الخوارزميات / التسجيل / التسجيل التلقائي المحسن للصور ؛ سيظهر مربع الحوار "Optimized Automatic Image Registration 3D".
      1. في خيارات الإدخال، قم بتغيير "درجات الحرية" من "Affine-12" الافتراضي إلى "Specific rescale-9". في "التناورات"، أدخل من -105 إلى 105 في "نطاق أخذ عينات زاوية الدوران" (الإعداد الافتراضي: -30 إلى 30 درجة)، و10 في "زيادة الزاوية الخشنة" (الإعداد الافتراضي: 15 درجة)، و3 في "زيادة الزاوية الدقيقة" (الإعداد الافتراضي: 6 درجات).
   7. انقر فوق موافق. سيتم إنشاء المصفوفة الأولى ، "GrayG_To_GrayG1.mtx" ، وحفظها في مجلد الصور. أغلق جميع نوافذ الصور وانتقل إلى الخطوة التالية ، والتي ستستغرق 15 دقيقة على الأقل.
   8. قم بتحميل مكدسات الصور H و F عن طريق اختيار القائمة: ملف/فتح الصورة (A) من القرص (أو Ctrl-f) /H.ids و F.ids.
   9. حدد الصورة H بالنقر فوق الصورة واختر القائمة: الأدوات المساعدة / أدوات التحويل / RGB / Gray ؛ سيظهر مربع الحوار "RGB->Gray". انقر فوق موافق ؛ ستعرض النافذة صور "HGray". احتفظ ب HGray وأغلق صورة H.
   10. كرر الخطوة 3.1.9 للصورة F ؛ ستظهر صور "FGray" في النافذة. احتفظ ب FGray وأغلق الصورة F ؛ سيتم ترك HGray و FGray فقط على النافذة.
   11. حدد صورة HGray (تمييز) وانتقل إلى القائمة: الخوارزميات / أدوات التحويل / التحويل. سيظهر مربع الحوار "تحويل / إعادة تشكيل الصورة". انقر فوق علامة التبويب "إعادة العينة" وقم بتغيير إعادة التشكيل إلى حجم "HGray" إلى "FGray". بعد ذلك ، انقر فوق علامة التبويب "تحويل" وقم بتحميل "GrayG_To_GrayG1.mtx" عن طريق تحديد "قراءة المصفوفة من الملف". انقر فوق موافق ؛ ستعرض النافذة الصورة HGray_transform. أغلق صورة HGray بحيث يتبقى HGray_transform و FGray فقط على النافذة.
   12. حدد الصورة "HGray_transform" (تمييز) وانتقل إلى القائمة: الخوارزميات / التسجيل / التسجيل التلقائي المحسن للصور. سيظهر مربع الحوار "Optimized Automatic Image Registration 3D". في "التناورات"، أدخل من -5 إلى 5 في "نطاق أخذ عينات زاوية الدوران" (الإعداد الافتراضي: -30 إلى 30 درجة)، و3 في "زيادة الزاوية الخشنة" (الإعداد الافتراضي: 15 درجة)، و1 في "زيادة الزاوية الدقيقة" (الإعداد الافتراضي: 6 درجات). انقر فوق OK.
       ملاحظة: سيتم إنشاء Affine Matrix (HGray_transform_To_FGray.mtx) وحفظها في مجلد الصورة ، وستظهر الصورة "HGray_Transform_register" على النافذة. ستستغرق هذه الخطوة 40 دقيقة على الأقل.
   13. أغلق الصورة "HGray_transform" ؛ يجب ترك "HGray_Transform_register" و "FGray" فقط على النافذة.
   14. حدد الصورة "HGray_Transform_register" (تمييز) وانتقل إلى القائمة: الخوارزميات / التسجيل / التسجيل التلقائي B-Spline 2D / 3D. سيظهر مربع الحوار "B-Spline Automatic Registration-3D intensity". حدد "المربعات الصغرى" في وظيفة التكلفة (الإعداد الافتراضي هو نسبة الارتباط).
       1. انقر فوق "إجراء تسجيل ثنائي". في قسم Pass 1 ، أدخل 2 في "تصغير حجم الخطوة في Gradient Descent (وحدات العينة)" (الافتراضي هو 1) وأدخل 10 في "الحد الأقصى لعدد التكرارات:" (الافتراضي هو 10). في قسم Pass 2 ، أدخل 1 في "Gradient Descent Minimal Step Size (وحدات العينة)" (الافتراضي هو 0.5) وأدخل 2 في "الحد الأقصى لعدد التكرارات:" (الافتراضي هو 10).
          ملاحظة: سيتم حفظ مصفوفة NLT ، "HGray_transform_register.nlt" ، في مجلد الصورة ، وستظهر الصورة "HGray_transform_register_registered" على النافذة. ستستغرق هذه الخطوة 5 دقائق على الأقل.
   15. أغلق جميع الصور الموجودة على النافذة.
2. إنشاء الصورة المرجعية لمجموعة الصور.
   ملاحظة: تهدف هذه الخطوة إلى إنشاء صورة أفقية مسجلة للجمع.
   1. قم بتحميل مكدسات الصور H وF عن طريق اختيار القائمة: ملف/فتح الصورة (A) من القرص (أو Ctrl-f) /H.ids وF.ids؛ ستظهر صورتان على النافذة.
   2. حدد صورة H (تمييز) وانتقل إلى القائمة: الخوارزميات / أدوات التحويل / التحويل ؛ سيظهر مربع الحوار "تحويل / إعادة تشكيل الصورة". انقر فوق علامة التبويب "إعادة العينة" وقم بتغيير إعادة التشكيل من حجم "H" إلى "F". بعد ذلك ، انقر فوق علامة التبويب "تحويل" وقم بتحميل "GrayG_To_GrayG1.mtx" عن طريق تحديد "قراءة المصفوفة من الملف". انقر فوق موافق ؛ ستظهر الصورة H_transform على النافذة. أغلق الصورة H ولكن احتفظ ب H_transform و F في النافذة.
   3. حدد الصورة "H_transform" (تمييز) وانتقل إلى القائمة: الخوارزميات / أدوات التحويل / التحويل ؛ سيظهر مربع الحوار "تحويل / إعادة تشكيل الصورة". انقر فوق علامة التبويب "إعادة العينة" وقم بتغيير إعادة التشكيل من حجم "H_transform" إلى "F". بعد ذلك ، انقر فوق علامة التبويب "تحويل" وقم بتحميل "HGray_transform_To_FGray.mtx" عن طريق تحديد "قراءة المصفوفة من الملف". انقر فوق موافق ؛ ستظهر الصورة "H_transform_transform" على النافذة. أغلق الصورة H_transform ؛ في هذه المرحلة ، سيتم ترك H_transform_transform و F فقط على النافذة.
   4. حدد صورة "H_transform_transform" (تمييز) وانتقل إلى القائمة: الخوارزميات / أدوات التحويل / تحويل غير خطي ؛ سيظهر مربع الحوار "تحويل B-Spline غير الخطي". بعد ذلك ، قم بتحميل "HGray_transform_register.nlt" وانقر فوق "موافق" ؛ ستظهر الصورة "H_transform_transform_registered" على النافذة. احفظ الصورة كملف ICS. أغلق جميع الصور الموجودة على النافذة.
3. الجمع بين مكدسات الصور
   ملاحظة: تجمع هذه الخطوة بين مكدسين للصور تم الحصول عليهما في اتجاهين متعامدين (أفقي وأمامي) في مكدس واحد عالي الدقة.
   1. انتقل إلى القائمة: Plugins/Genereric/ذبابة الفاكهة Retinal Registrationl؛ سيظهر مربع الحوار "ذبابة الفاكهة تسجيل الشبكية v2.9". قم بتحميل "H.ics" في الصورة H ، و "H_transform_transform_registered" من الخطوة 3.2.4 في الصورة H ، و "F.ics" في الصورة F ، و "GrayG_To_GrayG1.mtx" من الخطوة 3.1.7 في التحويل 1-Green (اختياري) ، و "HGray_transform_To_FGray.mtx" من الخطوة 3.1.12 في التحويل 2-Affine ، و "HGray_transform_register.nlt" من الخطوة 3.1.14 في التحويل 3-غير خطي (اختياري).
      1. حدد SqRt (Intensity-H x Intensity-F) و No Rescale في "Rescale H إلى F". احتفظ بالخيارات الافتراضية للمعلمات المتبقية. انقر فوق موافق ؛ ستستغرق هذه الخطوة حوالي 3 دقائق.
         ملاحظة: بعد المعالجة ، سيتم إنشاء 3 مجموعات من الصور: combinedImage_sqrRt_trilinear_norescale_ignoreBG.ids (الصورة النهائية المعاد تجميعها) ، greenChannelsImage-Gxreg-Gy-Gcomp.IDS (القناة الخضراء ل H و F والصورة النهائية المعاد تجميعها) ، و redChannelsImage-Rxreg-Ry-Rcomp.ids (القناة الحمراء ل H و F والصورة النهائية المعاد تجميعها) ؛ سيتم تغيير حجم جميع ملفات الإخراج إلى 512 × 512 × 512.
   2. افتح "combinedImage_sqrRt_trilinear_norescale_ignoreBG.ids" ضمن برنامج تصور الصور. احفظ مكدس الصور بتنسيق ims وأعد تسمية الملف ؛ سيتم استخدام ملف الصورة المعاد تجميعه هذا لتتبع Neurite وتسجيله.

4. تتبع Neurite وتعيين النقطة المرجعية

ملاحظة: تتضمن هذه الخطوة تتبع الخلايا العصبية (4.1) وتعيين نقاط مرجعية للتسجيل (4.2) باستخدام برنامج تصور الصور.

1. تتبع الأعصاب
   1. ابدأ تشغيل برنامج تصور الصور. افتح ملف الصورة المعاد تجميعه. انتقل إلى القائمة: تحرير / إظهار ضبط العرض وإيقاف تشغيل قناة مستقبلات الضوء (أحمر).
   2. تصور الصورة في وضع "تجاوز". إذا كان الكمبيوتر مزودا بنظام مجسم ، فقم بتشغيل "ستيريو" واستخدم وضع "Quad Buffer" لتصور الصور ثلاثية الأبعاد.
   3. انتقل إلى القائمة: تجاوز / خيوط لإضافة خيوط جديدة. انقر فوق علامة التبويب "تخطي الإنشاء التلقائي ، التعديل يدويا".
   4. انقر فوق علامة التبويب "رسم" وحدد "العمق التلقائي".
   5. حدد "الإعدادات" ، وحدد "خط" ، وأدخل رقم بكسل مناسب للحصول على تصور أفضل (يتم استخدام خط 4 بكسل في هذا البروتوكول). حدد "إظهار التشعبات" و "نقطة البداية" و "نقاط التفرع". اضبط "جودة العرض" على 100٪.
   6. حدد علامة التبويب "رسم" وابدأ في تتبع الأعصاب. ابدأ بالمحور العصبي ثم انتقل إلى التشعبات (الشكل 1 د). من السهل التمييز بين المحور العصبي والتشعبات العصبية عبر النخاع.
      ملاحظة: تمد الخلايا العصبية Tm محورها العصبي من جسم الخلية وتمتد على طول الطريق إلى مركز المعالجة البصرية الأعلى ، الفصيص. سيقوم النظام تلقائيا بتعريف أول خيوط طويلة على أنها محور عصبي والخيوط القصيرة المتبقية على أنها تشعبات. احتفظ بنقطة البداية في بداية الفتيل (المحور العصبي) أثناء التتبع ، وتأكد من توصيل الخلايا العصبية التي تم تتبعها. افحص النقاط المتفرعة ونقطة البداية. إذا لم تكن التشعبات متصلة ، تحديد نقطة بداية جديدة في الفتيل غير المتصل.
   7. بعد التتبع ، ارجع إلى "الإعدادات" ، وقم بإلغاء تحديد "نقطة البداية" و "نقطة التفرع" ، وانتقل إلى القائمة: تجاوز / تصدير الكائنات المحددة. /. احفظ الفتيل كملف مخترع (*.iv).

النتائج

فئة الشكل = 'صورة image_resized image-style-align-center' style='display:table;margin-left:auto;margin-right:auto;width:75٪;'>

الشكل 1. إعداد عينة للتصوير ثنائي الرؤية وتماثل ذبابة الفاكهة مصفوفة أعمدة النخاع. (أ ، ب) تركيب عينة للتصوير مزدوج الرؤية. (أ) يظهر المنظر كما لو كان ينظر إلى الدماغ من خلال غطاء غطاء. (ب) مخططات تخطيط...

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-resize'> قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Software Huygens ProfessionalScientific Volume Imagingالإصدار 16.05لفك الالتفاف للصورة (https://svi.nl). البرمجيات التجاريةMIPAV الإصدار 7.3.0لإعادة تركيب الصور وتسجيلها (http://mipav.cit.nih.gov/.). البرنامج المساعدMIPAV المجاني: PlugInDrosophilaRetinalRegistration.class البرنامج المساعد MIPAVالمجاني: PlugInDrosophilaStandardColumnRegistration.class FreewareImarisBitplane لتتبع الخلايا العصبية وتعيين نقاط مرجعية لتسجيل الصور (http://www.bitplane.com). البرمجيات التجاريةVaa3D لتصور ملفات swc (https://github.com/Vaa3D/release/releases/). مجانيةMatlabMathworksR2014bللتحليل المورفومتري للتشعبات (http://www.mathworks.com). البرمجيات التجاريةMatlab toolbox: TREES1.14 v1.14لتحليل المعلمات المورفولوجية الشجيرية ( http://www.treestoolbox.org/download.html). برنامج مجانيMatlab toolbox: Dendritic_Tree_Toolbox v1.0لحساب المعلمات المورفومترية (https://science.nichd.nih.gov/confluence/display/snc/Data+collections+for+imagines+combination+and+standardize+column+registration). مجانيةعينة من الملفات SWC تعريف الملف http://www.neuronland.org/NLMorphologyConverter/MorphologyFormats/SWC/Spec.htmlالرموز ونماذج الملفات لدمج الصور وتسجيلها https://science.nichd.nih.gov/confluence/display/snc/Data+collections+for+imagines+combination+and+standardize+column+registrationمثال على النقطة المرجعيةhttps://science.nichd.nih.gov/confluence/download/attachments/117216914/points.csv?version=1&modificationDate=1471880596000&api=v2نظام الكمبيوتر MS Windows Windows 7 x64 أو Macintosh OS X 10.7 أو أحدث معالج رباعي النواة 3 جيجا هرتز 64 بت ، ذاكرة وصول عشوائي 16 جيجا (الحد الأدنى) اختياري: بطاقة رسومات Quadro4000 (أو أعلى)Nvidia للتصور المجسم للتشعبات.اختياري: NVIDIA 3D vision2Nvidia http://www.nvidia.com/object/3d-vision-main.htmlاختياري: شاشة LCD بتردد 120 هرتز لتقنية NVIDIA 3D vision2 http://www.nvidia.com/object/3d-vision-system-requirements.htmlكواشف التصوير 24B10 الجسم المضادللدراسات التنموية بنك الورم الهجين24B10 GFP العلامة الأجسام المضادةThermofisher ScientificG10362 الماعز المضاد للأرانب (H + L) ، Alexa Fluor 488Thermofisher ScientificA11034 الماعز المضاد للفأر (H + L) ، Alexa Fluor 568Thermofisher ScientificA21124 VECTASHIELD مضاد للتلاشي تصاعد مختبرات ناقلات متوسطةH-1000 تصاعد كلايفيشرS04179 70٪ جلسرين في نظارات غطاء 1X PBS ، عالية الأداء ، D = 0.17 ممZeiss474030-9000-000