توصيل الفيروسات داخل القراب في نموذج الفأر لعلاج أمراض الجهاز العصبي المركزي

الملخص

المصدر: Li, D., et al. الحقن المباشر داخل القراب للفيروسات المؤتلفة المرتبطة بالغة في الفئران البالغة. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو إجراء الحقن داخل القراب للفيروسات المرتبطة بالغدة (AAV) في السائل النخاعي (CSF) للفأر المستيقظ ، ويغطي تحضير المحقنة ، ومحاذاة العمود الفقري ، وإدخال الإبرة بدقة. تتحقق هذه الطريقة من صحة توصيل الجينات المستهدفة ، مما يدعم إمكاناتها لعلاجات الجهاز العصبي المركزي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تحضير محلول مخزون هيدروكلوريد الليدوكائين بنسبة 20

٪

1. وزن 2 جم من هيدروكلوريد الليدوكائين. أضف 5-6 مل من الماء المعقم والدوامة برفق. قم بزيادة الحجم إلى 10 مل بالماء المعقم.
2. 1.2 قم بتصفية محلول المخزون من خلال مرشحات 0.2 ميكرون. Aliquot محلول المخزون ، 1 مل لكل أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل ، وأغلقه بغشاء مانع للتسرب. يحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية.

2. التوصيل المباشر داخل القراب في الفئران المستيقظة

1. امسح منطقة العمل باستخدام شاش معقم يحتوي على 70٪ من الإيثانول وقم بإعداد المستلزما....

المواد

< فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-ressize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات FVB / NJ الفئرانمختبرات تشارلز ريفر الصين ليدوكائين هيدروكلوريد أحادي الهيدراتHEOWNS73-78-9 AAVنواقل الفيروس الأساسية لمركز العلاج الجيني بجامعة كلية الطب بولاية ماساتشوستس 25 ميكرولتر حقنة هاميلتون / 27-30 جرام إبرةGASTIGHT1702 70٪ إيثانولWEN ZHI GauzeWei AN51711128 سم * 10 سم * 12 سم