التصوير الحيوي للتلألؤ الحيوي لنموذج فأر ذو كفاءة مناعية للورم الأرومي الدبقي

الملخص

المصدر: Clark, A.J., et al. تصوير التلألؤ البيولوجي لنموذج حيواني ذو كفاءة مناعية للورم الأرومي الدبقي. J. Vis. Exp. (2016)

يوضح هذا الفيديو التصوير الحيوي لتتبع تطور الورم الأرومي الدبقي في نموذج فأر ذو كفاءة مناعية ، باستخدام الخلايا السرطانية التي تعبر عن لوسيفيراز ولوسيفيرين لتحديد نمو الورم بشكل غير جراحي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تصوير التلألؤ البيولوجي لنمو الورم GL261

1. رش كمية وفيرة من المطهر (محلول ثنائي ميثيل كلوريد الأمونيوم 0.05٪) على منشفة ورقية نظيفة. استخدم المنشفة الورقية المبللة بالمطهر لمسح الورقة السوداء ومخاريط الأنف والمقسم تماما داخل غرفة التصوير حيث ستكون على اتصال بالجهاز. امسح جميع الأسطح جيدا بمنشفة ورقية نظيفة وجافة. كرر هذا مرة أخرى وانتظر 5 دقائق.
2. تهيئة محطة التصوير.
3. قم بتخدير الفأر بخليط 300 ميكرولتر يحتوي على 200 ميكرولتر من الكيتامين / الزيلازين و 100 ميكرولتر من اللوسيفيرين (ملح البوتاسيوم D-Luciferin ، 150 مجم / كجم) عن طريق الحقن داخل الصفاق.
4. انتظر 10 دقائق بعد الحقن وتأكد مما إذا كانت الفئران تحت التخدير تماما عن طريق الضغط على الذيل. لإعداد نظام التصوير، حدد "Luminescent" و"Auto" لوقت التعرض و"Medium" binning. ضع الفئران على محطة التصوير وانقر فوق الزر "اكتساب" لبدء الصورة. تأكد من أن الوقت بعد الحقن يتوافق مع كل جلسة تصوير.
5. بعد الحصول على الصورة بنجاح ، يجب أن تظهر نافذة صورة ولوحة أدوات. انقر فوق منطقة الاهتمام (ROI) أو "أدوات عائد الاستثمار" وحدد "تلقائي" من أيقونة الدائرة. لتحديد عائد الاستثمار ، قم بتطويق منطقة الإشارة على الصورة ثم قم بأخذ قياسات عائد الاستثمار كوحدة فوتونات / ثانية / sr / cm2.
6. أخرج الفئران من غرفة التصوير وراقبها حتى تصبح متنقلة وتحتفظ بالنشاط الطبيعي. عادة ما يكون وقت الشفاء حوالي 15 دقيقة. لا تعيد الفئران إلى القفص مع الأخرى حتى تتعافى تماما من التخدير.
7. راقب نمو الورم عن طريق التصوير الحيوي مرتين في الأسبوع حتى تظهر على الأعراض التالية: فقدان الوزن (فقدان أكثر من 20٪ بالنسبة للوزن قبل الزرع) ، وعدم الشهية (فقدان الشهية الكامل لمدة 24 ساعة) ، وعدم الاستجابة الهادفة المستمرة للمنبهات اللطيفة (محاولة ضعيفة للاستيقاظ) ، وفي ذلك الوقت يجب القتل الرحيم.
8. تطبيع قيم التلألؤ لكل يوم مقابل القراءات المقابلة التي تم الحصول عليها في اليوم الأول من التصوير الحيوي (الشكل 1 أ).
9. للتحليل الإحصائي ، قم بإنشاء منحنيات البقاء على قيد الحياة باستخدام مقدر كابلان ماير وقارن الاختلافات بين منحنيات البقاء على قيد الحياة باستخدام اختبار رتبة اللوغاريتم.

النتائج

فئة الشكل = 'الصورة image_resized image-style-align-center' style='display:table;margin-left;auto;margin-right:auto;width:75٪;'>

الشكل 1. لا يؤثر تعبير لوسيفيراز على نمو الورم في الجسم الحي وبقاء. (أ) توضح مراقبة التلألؤ البيولوجي النمو التدريجي ل GL261 داخل الجمجمة. ورم لوك (خلايا الورم الأرومي الدبقي GL261 التي تعبر عن لوسيفيراز) في الفئران C57BL / 6. (ب) يوضح تحليل بقاء كابلان م...

المواد

< فئة الشكل = 'الجدول' >< فئة الجدول = 'ck-table-ressize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات D-Luciferin ، ملح البوتاسيومالذهب التكنولوجيا الحيويةLUCK-100تخزين بعيدا عن الضوءبرنامج الصور الحيةالفرجار علومالحياة الاتصال للحصول على اقتباسلا شيءXenogen LuminaCaliper علوم الحياةالاتصال للحصول على عرض أسعارلا شيءKetasetPfizerNDC 0856-2013-01مادة التحكمXylazineSigma-Aldrich23076-35-9لا شيء28 جرام إبرة (مع حقنة)فيشر22-004-270AKA وسادة تسخين حقنة الأنسولينDunlapHP950 PDI وسادات تحضير الكحولفيشر23-501-711