الحقن العضلي على طول لوحات نهاية المحرك إلى مكوك المتتبعات مباشرة إلى الخلايا العصبية الحركية للفئران

الملخص

المصدر: Mohan، R.، et al. الحقن العضلي على طول لوحات نهاية الحركة: نهج طفيف التوغل لتتبع المكوك مباشرة في الخلايا العصبية الحركية. J. Vis. Exp. (2015)

يوضح هذا الفيديو التوصيل المستهدف لتتبع الخلايا العصبية الفلورية إلى الخلايا العصبية الحركية عن طريق الحقن العضلي في لوحات نهاية المحرك (MEPs). يحدد الخطوات المتبعة في تحضير الفئران ، وحقن التتبع ، وتقييم الخلايا العصبية الحركية المصنفة لإمكانات العلاج العصبي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. الحقن العضلي في ألواح نهاية المحرك

1. اسحب الماصات الدقيقة الزجاجية باستخدام مجتذب ماصات دقيقة (يوصى باستخدام الماصات الدقيقة المتدرجة مع الغطاسات). بمساعدة مجهر تشريح ، قم بكسر أطراف الماصات الدقيقة بزوج من الملقط بحيث يكون القطر الداخلي لتجويف الماصة الدقيقة حوالي 0.5 مم.
2. تأكد من أن جميع الأدوات الجراحية المستخدمة معقمة حديثا وأن منطقة الجراحة معقمة.
3. املأ الماصات الدقيقة بالفلورو جولد (5٪ في الماء المقطر).
4. تحفيز التخدير في باستخدام الأيزوفلوران (4٪ في O₂) في غرفة الحث. تحقق من منعكس التصحيح وتأكد من غيابه قبل إزالته من غرفة الحث. قم بتأمين مخروط الأنف فوق أنف الجرذ وقم بتوصيل الأيزوفلوران (2٪ في O₂) للحفاظ على التخدير. اقرص أصابع ولمس عين برفق للتأكد من غياب كل من سحب الدواسة وردود الفعل القرنية.
   ملاحظة: يمكن أيضا استخدام خليط من الكيتامين والزيلازين (80 و 10 مجم / كجم ، على التوالي ، يتم توصيله داخل الصفاق الكيتامين هو دواء مدرج في الجدول 8 ("خاضع للرقابة") ، ويجب الالتزام بالبروتوكولات الضرورية المرتبطة بشراء الدواء واستخدامه وتخزينه والتخلص منه.
5. ضع مادة تشحيم العين لمنع جفاف العينين أثناء العملية.
6. احلق الطرف المستهدف واستخدم الشاش لمسح المنطقة المحلوقة بثلاثة مقشرات متناوبة من الكلورهيكسيدين و 70٪ كحول. نقل إلى منطقة الجراحة.
7. ضع على وسادة سفلية نظيفة وضعها بشكل مناسب لضمان الوصول الجيد إلى العضلات (العضلات) المستهدفة.
8. استخدم زوجا من الملقط بمقابض الأسنان لرفع الجلد فوق العضلات المستهدفة بعيدا عن العضلات الأساسية وعمل شق في الجلد باستخدام المقص الجراحي. تأكد من أن الشق كبير بما يكفي لكشف العضلات (العضلات) المعنية تماما. تأكد من وجود الحد الأدنى من اضطراب اللفافة.
9. استخدم صور لوحة نهاية المحرك (MEP) لنقل موقع وشكل منطقة الهندسة الكهربائية والميكانيكية عقليا إلى العضلات (العضلات).
   ملاحظة: يمكن أن تساعد علامة اللباد الدقيقة في إعادة إنتاج منطقة الهندسة الكهربائية والميكانيكية من الصورة إلى العضلات (العضلات) التي تهمك.
10. إجراء حقن متعددة على طول منطقة الهندسة الكهربائية والميكانيكية (بالنسبة للفلورو جولد ، يجب أن تكون 3 إلى 4 حقن من 1-2 ميكرولتر كافية). امسح العضلات (العضلات) برفق لإزالة أي تسرب.
11. اقرب طرفي الجلد المقطوع من بعضهما البعض باستخدام ملقط غير حاد وأغلق الجرح بمشابك جراحية. تسلل 0.1 مل من بوبيفاكائين (0.5٪ في الماء) (أو مخدر موضعي آخر) على طول كامل الجرح.
12. قم بإيقاف تشغيل جهاز التخدير ومراقبة حتى يتعافى تماما من التخدير.
13. انتظر لمدة 14 يوما بين إعطاء الحقن العضلي ونضح.

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول' ><فئة الجدول = 'ck-table-resize'> قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Fluoro-GoldFluorochrome، LLCNilمخفف إلى 5٪ Drummond PCR Micropipets 1-10 ميكرولترDrummond Scientific5-000-1001-X10مصحوبة بالغطاساتIsothesiaProvetISOF001000 مجم / جم بخار استنشاق إيزوفلورانأوتوكليب 9 مم مقاطع الجرحتكساس إنسترومنتسيك إنسترومنتس، ذ م م205016