توصيف الخلايا الجذعية الوسيطة المعدلة وراثيا لتطبيقات العلاج العصبي

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Sharma، A.D.، et.al. توصيف عالي الإنتاجية للخلايا الجذعية البالغة المصممة لإيصال العوامل العلاجية لاستراتيجيات الحماية العصبية. J. Vis. Exp. (2015)

يوضح هذا الفيديو عملية توصيف الخلايا الجذعية الوسيطة المعدلة وراثيا المصممة للتعبير عن العوامل العصبية العلاجية. يحدد الخطوات المتبعة في تثبيت الخلايا ونفاذيتها وتلطيخها بالأجسام المضادة الأولية والثانوية التي تستهدف علامة تكاثر الخلايا ، متبوعا بالتحليل باستخدام نظام فحص عالي المحتوى لالتقاط إشارات الفلورسنت في النوى. يؤكد التعبير المتزايد عن علامة الانتشار مدى ملاءمة الخلايا المعدلة وراثيا لتطبيقات العلاج العصبي.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات من والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

1. Ki67 مقايسة تكاثر الخلايا

Ki67 مقايسة تكاثر الخلايا (الكيمياء المناعية)

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

<فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-resize'>List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments 96 well plateGreiner Bio One65509096 لوحة بئر تم اختيارها للاستخدام في ألبومين مصل الأبقار ImageXpress(BSA)Sigma-Aldrich (سانت لويس ، ميزوري) A9647 Rabbit المضاد للجسم المضاد Ki67Abcam ( كامبريدج ، ماساتشوستس) Ab166671: 200 تخفيفDAPIInvitrogen (كارلسباد ، كاليفورنيا) D3571 الحمار المضاد للأرانب Cy3Jackson Immuno Res Lab (ويست جروف ، بنسلفانيا) 711-165-1521: 500 تخفيف الخلايا الجذعية الجذعية للفئران البالغة C57BL / 6تولين سنت للعلاج الجيني (نيو أورلينز ، لوس أنجلوس) معزولة من نخاع العظامالخلايا الجذعية المحورة وراثيا (GFP ، BDNF ، GDNF، BDNF / GDNF) تم الحصول على هذه الخلايا من دراستنا السابقة: Ye et al. (قيد التحضير) مصل الحمار العادي (NDS) مختبر جاكسون المناعي (ويست جروف ، بنسلفانيا) 017-000-121 بارافورمالدهيد (PFA) فيشر Scientific (هامبتون ، نيو هامبشاير) O40424٪ PFA في 0.1M PO4 عازلةمحلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) سيجما ألدريتش (سانت لويس ، ميزوري) P4417 Triton X-100Sigma-Aldrich (سانت لويس ، ميزوري) X100 ImageXpressالأجهزة الجزيئية الدقيقة (Sunnyvale ، CA) ImageXpress microنظام فحص المحتوى العاليMetaXpress 4.0الأجهزة الجزيئية (Sunnyvale ، CA) MetaXpress 4.0برنامج الحصول على الصور وتحليلهاKH₂PO ₄Fisher Scientific (هامبتون ، نيو هامبستر)P285للمخزن المؤقت PO₄K₂HPO₄Fisher Scientific (هامبتون ، نيو هامبشاير) P288للمخزن المؤقت PO₄

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission