$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
1. زرع الورم الأولي داخل الجمجمة
- في المرحلة الأولى من الدراسة ، قم بحقن كل فأر داخل الجمجمة ب 100,000 خلية (خط خلايا الورم الدبقي الفأري GL261) معلقة في 4 ميكرولتر من المحلول الملحي المخزن بالفوسفات (1x PBS) على عمق 2.5 مم بعد التقرير المنشور سابقا.
- حدد إشارة الورم في كل فأر باستخدام نظام التصوير في الجسم الحي بعد 9 أيام من زرع الورم.
ملاحظة: إذا لزم الأمر ، قم بتقسيم الفئران إلى مجموعتين بناء على عبء الورم. في هذه الدراسة ، كانت المجموعتان هما: (1) الفئران ذات عبء الورم الصغير نسبيا (متوسط إشارة الإضاءة الحيوية = 5.5e + 006 ± 0.1e + 006 فوتون / ثانية ، ن = 10) و (2) الفئران ذات عبء الورم الكبير نسبيا (متوسط إشارة الإضاءة الحيوية = 1.69e + 007 ± 0.2e + 007 فوتون / ثانية ، ن = 10) ، (ص < 0.05 ، اختبار مان ويتني). - قسم كل مجموعة إلى مجموعتين فرعيتين متقارنتين.
>ملاحظة: في هذه الدراسة ، كانت المجموعتان الفرعيتان: الفئران غير المعالجة (ن = 5) والفئران المصابة بأورام تخضع لعملية استئصال جراحية باستخدام MIRS (ن = 5) ، (ص > 0.05 ، اختبار مان ويتني). - بدءا من يوم الاستئصال ، تتبع تطور الورم باستخدام نظام التصوير في الجسم الحي بتردد يعتمد على نمط نمو الورم.
ملاحظة: بالنسبة لخط خلايا GL261 ، تتبع تطور الورم في يوم الاستئصال ثم كل 3-6 أيام.
2. استئصال الورم باستخدام MIRS
- تخدير الفأر باستخدام خليط غاز الأيزوفلوران O2 في غرفة الحث أو الحقن داخل الصفاق لمحلول الزيلازين / الكيتامين.
- أدخل سلك الطاقة الموجود على اللوحة الخلفية في مقبس سلك الطاقة. قم بتشغيل الطاقة إلى النظام أو إيقاف تشغيلها عن طريق التبديل (1 = ON ، 0 = OFF).
- أدخل أحد طرفي خرطوم النيتروجين (المرفق مع وحدة التحكم) في التركيب الذكري على اللوحة الخلفية لوحدة التحكم. قم بتدوير صامولة التوصيل في اتجاه عقارب الساعة لتشديد الاتصال.
ملاحظة: يجب توصيل الطرف المقابل للخرطوم بمصدر النيتروجين. - قبل توصيل الخرطوم بمصدر النيتروجين ، تأكد من أن ضغط الإمداد لا يتجاوز 100 رطل لكل بوصة مربعة ، وهو ضغط إمداد الإدخال الموصى به لوحدة التحكم.
ملاحظة: ستولد وحدة التحكم طموحها الخاص عند تنشيطها بواسطة دواسة القدم بمجرد توفير النيتروجين إلى وحدة التحكم. - قم بتأمين غطاء منفذ التفريغ وإغلاقه لتجنب أي تسرب في نظام التفريغ. ستؤثر أي تسريبات في نظام الشفط على أداء وحدة تحكم MIRS.
- إذا كان الشفط أقل من 17 أثناء الإعداد أو التحضير ، فتحقق من ضبط مقبض الشفط الموجود في مقدمة وحدة التحكم على المستوى الأقصى (100) ، وتأكد من عدم وجود تسرب في نظام الشفط ، وتأكد من صحة ضغط إمداد إدخال النيتروجين.
- لتوصيل دواسة القدم بوحدة التحكم، أدخل موصل دواسة القدم الرمادية في الوعاء الرمادي الخاص بها حتى يسقط صورا ويتناسب مع موضعه.
ملاحظة: يتصل موصل دواسة القدم بوحدة التحكم في اتجاه واحد، ويتم إدخاله بإفتاحه. - لتوصيل القبضة بوحدة التحكم، أدخل موصل القبضة الأزرق في الوعاء الأزرق الخاص به حتى يسقط صوت ويتناسبه في موضعه.
ملاحظة: يتصل موصل القبضة بوحدة التحكم في اتجاه واحد، ويتم إدخاله بإفتاحه. - قم بتجهيز كل قبضة قبل استخدام النظام عن طريق شفط سائل معقم من وعاء صغير إلى الفتحة ، من خلال الأنبوب والقبضة ، ثم في العلبة للتأكد من تشحيم الجزء الداخلي من الأنبوب والقبضة لتقليل انسداد الأنسجة.
- استعد للشفط بمفرده أو الشفط بالقطع عن طريق تحديد الوضع المناسب على اللوحة الأمامية لوحدة التحكم. ابدأ باستخدام دواسة القدم.
- أدخل قنية MIRS 23 G في فتحة الأزيز على عمق 2.5 مم.
- ابدأ عملية الاستئصال عن طريق الضغط على دواسة القدم المتصلة بالقنية. قم بإجراء دورة كاملة واحدة (360 درجة) أو أكثر من الاستئصال باستخدام مقبض التحكم في المقاسة.
ملاحظة: كلما زاد عدد الدورات التي تم إجراؤها ، زاد حجم الأنسجة السرطانية التي تم استئصالها. - بمجرد اكتمال عملية الاستئصال ، اسحب قنية MIRS 23 G من فتحة الأزيز واستخدم 5 مل من 1x PBS لشطف الأنبوب وإخراج أي حطام متبقي.
- قم بإزالة الماوس من الإطار التجسيمي وأغلق الجرح باستخدام دباسة أو مادة خياطة 4-0 (انظر جدول المواد).
- ضع الماوس على وسادة تدفئة أو تحت ضوء دافئ أثناء التعافي من التخدير قبل إعادته إلى قفصه.
- بعد اكتمال التجربة ، قم بتطهير القنية عن طريق التنظيف. قم بالتناوب مع الوسائط المبردة والهواء "لدفع" كل الأنسجة المقطوعة مرة أخرى إلى علبة التجميع. قم بإزالة علبة التجميع من النظام وقم بتثبيتها بالغطاء المرفق.
- بعد الانتهاء من الخطوة 2.12 ، ضع الطرف البعيد للقنية في 3٪ H2O2 وقم بتطبيق الشفط عند 24-25 في الزئبق لملء خط الشفط مرة أخرى إلى علبة تجميع الشفط واتركه لمدة 60-90 ثانية.
- راقب الفئران بحثا عن أي علامات عصبية (حركات غير منتظمة أو نوبات صرعية) بعد الإجراء.
