التأثير التآزري لتوصيل الأدوية المسكنة داخل الجمجمة وداخل الصفاق على الاستجابة للألم الحراري في الفئران

الملخص

المصدر: Martinez، E.، et al. العلاج الدوائي داخل الجمجمة ومقايسات الألم في القوارض. J. Vis. Exp. (2019).

يوضح هذا الفيديو الإعطاء داخل الجمجمة لدواء مسكن في فأر مخدر باستخدام قنية توجيه مزروعة مسبقا في قشرة الفص الجبهي. يتم إعطاء دواء مسكن إضافي داخل الصفاق. بعد الشفاء ، يتم تقييم استجابة الألم الحراري للفئران باستخدام جهاز هارجريف ، حيث يتم قياس زمن انتقال سحب المخلب لتقييم التأثيرات المسكنة للأدوية المعطاة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. زرع قنية التجسيم

:

1. استخدم ذكور فئران Sprague-Dawley البالغة من العمر 10-12 أسبوعا.
2. تخدير ب 1.5-2٪ إيزوفلوران. بمجرد أن يصبح غير مستجيب لقرصة قوية بالملقط الحاد ، قم بإجراء الجراحة. تأكد من تعقيم جميع الأدوات ، واستخدام قفازات جراحية معقمة ، وإضافة مرهم للعيون إلى عيون لمنع التلف.
3. زرع قنيات توجيه ثنائية عيار 26 في قشرة الفص الجبهي (PFC) بزاوية 12.5 درجة مع إحداثيات أمامية خلفية (AP): +2.9 مم؛ الوسطي الوحشي (ML): +/−1.6 مم؛ الظهري البطني (DV): −2.1 مم. من أجل إدخال القنيات ، قم بحفر ثقوب في الجمجمة عند الإحداثيات المطلوبة ، بقطر ثقب وفقا لحجم القنيات المستخدمة.
   ملاحظة: هنا ، تمت دراسة PFC كهدف محتمل للغرسات داخل الجمجمة بسبب دورها المهم في معالجة الألم ، والذي تم إثباته في عدد من الدراسات السابقة. لدراسة وظيفة مناطق الدماغ المحددة الأخرى ، يمكن للباحثين استخدام إحداثيات مختلفة وفقا لأطلس الدماغ.
4. اسمح للفئران بالتعافي من الجراحة لمدة أسبوع واحد على الأقل. بعد الجراحة، قم بحقن السوائل تحت الجلد قبل التعافي للمساعدة في دعم متطلبات التمثيل الغذائي، وقم بتطبيق بوبيفاكائين الموضعي في الشق المغلق حديثا. ضع على وسادة دافئة حتى يستيقظ ، وراقب بعد العملية لمدة 3 أيام لضمان صحة جيدة وشفاء مناسب.
5. بمجرد أن تتعافى تماما من الجراحة ، ابدأ الحقن (الخطوة التالية).

2. الحقن داخل الجمجمة وداخل الصفاق

1. للحقن داخل الجمجمة ، استخدم أنابيب PE-50 متصلة في أحد طرفيها بمحاقن هاميلتون سعة 10 ميكرولتر مع قنية حاقن قياس 33 تمتد 1.0 مم إلى ما وراء الأدلة المزروعة.
2. حقن 0.5 ميكرولتر (أو أقل إذا رغبت في ذلك) من عقار الدراسة أو المحلول الملحي في PFC لهذه الفئران. نظرا لأن PFC هي منطقة أكبر في الفئران ، فلن تنتشر هذه الكمية إلى مناطق أخرى. ومع ذلك ، بالنسبة لمناطق الدماغ الأصغر أو للفئران ، استخدم حجما أصغر. ستعتمد الكمية المحقونة على منطقة الدماغ وأنواع.
   ملاحظة: يرجى ملاحظة أنه يجب استخدام المحلول الملحي كعنصر تحكم بدلا من ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) لأن DMSO سام للأعصاب. ومع ذلك ، قد تكون كمية صغيرة جدا من DMSO آمنة للتسريب ، حيث أظهرت الدراسات أن أقل من 50٪ DMSO (أي أقل من الحجم الإجمالي البالغ 0.3 ميكرولتر ، كما في هذه الحالة) قد لا يتداخل مع الدراسات السلوكية.
3. حقن الحجم ثنائيا على مدى 100 ثانية واحتفظ بقنيات الحاقن في مكانها لمدة 60 ثانية إضافية قبل الإزالة للسماح بالانتشار البطيء لهذا المحلول.
4. لدراسات التأثيرات الدوائية التآزرية ، شارك في إدارة دواء آخر من خلال الطرق الجهازية. في هذه الحالة ، قم بحقن الدواء المطلوب أو التحكم داخل الجمجمة وقم بإعطاء دواء إضافي داخل الصفاق بعد ذلك مباشرة. على سبيل المثال ، في هذه الدراسة ، درسنا التأثيرات المسكنة التآزرية للمورفين والأمباكين لاختبار التأثير المضاف. قمنا بحقن AMPAkine داخل الجمجمة ، بالاشتراك مع توصيل داخل الصفاق بمقدار 1 مجم / كجم من المورفين (جرعة جهازية آمنة).
   ملاحظة: يوصى بإجراء الحقن داخل الجمجمة أولا ، حيث يصعب إجراؤها من الحقن داخل الصفاق.

3. مقايسات وتقييم التسكين

1. لدراسة تأثير الحقن داخل الجمجمة على سلوك الألم الحاد في الفئران ، استخدم اختبار الأخمصي (اختبار هارجريفز) لحساب زمن انتقال الانسحاب استجابة للمنبهات الحرارية. يركز جهاز Hargreaves شعاع الأشعة تحت الحمراء من خلال مستوى زجاجي على قدم الفئران. الجرذ يقف ويتحرك بحرية فوق المستوى الزجاجي. عند إجراء اختبار هارجريفز ، ركز شعاع الأشعة تحت الحمراء أسفل المنطقة الأخمصية لقدم الفئران.
   1. ابدأ بإجراء اختبارات Hargreaves الأساسية قبل الحقن لتحديد قيمة أساسية للمقارنة.
2. لا تحقن أي دواء من أي نوع قبل تحديد قيمة خط الأساس. قم بإجراء خمس تجارب جيدة ، بفارق 5 دقائق. يشار إلى التجربة الجيدة من خلال الانسحاب الواضح ، أي عندما ينحني الجرذ ركبته ويرفع قدمه لأعلى وفي الجسم.
   ملاحظة: تأكد من أن التجارب تفصل بينها 5 دقائق لمنع تحسس الفئران. يسجل جهاز Hargreaves تلقائيا وقت الانسحاب ، بمجرد كسر شعاع الأشعة تحت الحمراء. نتيجة لذلك ، تأكد من استبعاد التجارب من الحركة ، وتغيير الوزن ، وما إلى ذلك. في حالة حدوث نسخة تجريبية مخفضة، انتظر 5 دقائق وكرر الإصدار التجريبي.
3. احسب عتبات الانسحاب عن طريق أخذ متوسط التجارب الخمس.
4. بعد الحصول على متوسط خط الأساس ، ابدأ التجربة للحصول على أوقات الانسحاب بعد ضخ الأدوية. يمكن إجراء اختبارات هارجريفز بعد 20-30 دقيقة من الحقن داخل الجمجمة ، على الرغم من أن التوقيت الدقيق قد يعتمد على الحركية الدوائية للعوامل المحددة. هذا للتأكد من أن الفئران قد امتصت الدواء وتعاني من آثاره. قم بإجراء هذه التجربة بنفس طريقة الخطوة 3.1.
5. احسب عتبات السحب كما هو مذكور في الخطوة 3.2.

المواد

< فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-resize'> قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات stanetaxic cannulaplasticsOne8I26GA8MMKIT حقنة رقميةهاميلتون8440 AMPAkineSigma AldrichC-271 ثنائي ميثيل سلفوكسيدجهاز سيجما ألدريتشD4540 هارجريفزأوغو باسيل37370 ذكور جرذان سبراج داولي مزارعتاكونيكNTac: قفازات جراحية معقمة SD Dynarex6535