مقالة منهجية

نقل الجينات بمساعدة التثقيب الكهربائي المضمن في الأغروز في أسلاف الخلايا العصبية القشرية للفأر

أغسطس 7, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Denaxa، M.، el al.، زرع أسلاف الخلايا العصبية القشرية المعدلة كيميائيا في أدمغة الفئران المبكرة بعد الولادة. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو إجراء حقن ناقل البلازميد الذي يحمل الجين محل الاهتمام في أسلاف الخلايا العصبية الداخلية في شريحة دماغية جنينية ، متبوعا بالتثقيب الكهربائي لدخول البلازميد والتعبير الجيني. يمكن استخدام هذه الأسلاف المعدلة لاحقا لعلاج اضطرابات الدماغ.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Focal DNA Injection
    1. قم بإعداد خليط من الحمض النووي الريبي منقوص الأكسجين (DNA) من نواقل التعبير: pCAGGs-IRES-GFP (ناقل التحكم) + pCAGGs-hM3D (Gq) -IRES-RFP ، بتركيز 1 ميكروغرام / ميكرولتر لكل ناقل. أضف محلول أخضر سريع (مخزون 25 مجم / مل) في تخفيف 1/10.
    2. املأ ماصة زجاجية مسحوبة (قطر داخلي 0.5 مم وقطر خارجي 1 مم) ب 10 ميكرولتر من خليط الحمض النووي وحقن كميات صغيرة (في نطاق 25-50 نانولتر) في المنطقة المحددة (العقدة الإنسية أو MGE / الذيلية العقدية أو CGE) من الشريحة (الشكل 1 والشكل 2).
  2. التثقيب الكهربائي الحاد
    ملاحظة: يجب إجراء التثقيب الكهربائي مباشرة بعد حقن الحمض النووي البؤري.
    1. ضع كتلة agarose الصغيرة على قطب طبق Petri وقم بتوصيل عمود agarose بقطب الغطاء المتحرك باستخدام ملعقة صغيرة مسطحة.
    2. انقل الشريحة مع غشاءها الداعم إلى كتلة الاغاروز وضع القطب العلوي مع عمود الاغاروز أعلى المنطقة المحددة (MGE / CGE) من الشريحة.
      ملاحظة: سينتج عن جهد الشحن البالغ 125 فولت (نبضتان من 5 مللي ثانية لكل منهما ، فاصل 500 مللي ثانية) تثقيبا كهربائيا ناجحا (الشكل 3).
  3. بعد التثقيب الكهربائي ، ضع الشريحة مع غشاءها الداعم في الطبق وانقلها إلى حاضنة زراعة أنسجة ثاني أكسيد الكربون2 عند 37 درجة مئوية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فئة الشكل = 'صورة image-style-align-center image_resized' style='display: table؛ margin-left: auto؛ margin-right: auto؛ width: 75٪;'>figure-results-1

الشكل 1: شرائح الدماغ التمثيلية المستخدمة في تجارب التثقيب الكهربائي الحاد. (أ-ج) تم الحصول على شرائح Telencephalic بثلاثة مستويات متسلسلة متميزة من الجذعي الوردي ، ملطخة ب 4 ′ ، 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI). LGE: مكانة العقدة الجانبية. MGE: المكانة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-ressize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Medium / Supplements Neurobasal mediumGIBCO (ThermoFisher Scientific)21103-049Neuron المعدات المتوسطة الأساسيةحاقن مولد BTX ECM 830 للشريحة الحادةEppendorfFemtoJet Microinjector Kite HandmanipulatorWPIKITE-M3-R Platinum Elecrode (I) Protech International Inc.CUY-700-1 Platinum Elecrode (II) Protech International Inc.CUY-700-2 لوحة قاعدة فولاذيةWPI5479 مواد أخرى الشعيرات الدموية الزجاجية للتثقيب الكهربائيVWR1B100-4 أطباق زراعة أنسجة الأعضاءBD Biosciences (Falcon)353037

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

DNA

مقالات ذات صلة