A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Research Article
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
يوضح هذا الفيديو إجراء حقن ناقل البلازميد الذي يحمل الجين محل الاهتمام في أسلاف الخلايا العصبية الداخلية في شريحة دماغية جنينية ، متبوعا بالتثقيب الكهربائي لدخول البلازميد والتعبير الجيني. يمكن استخدام هذه الأسلاف المعدلة لاحقا لعلاج اضطرابات الدماغ.
فئة الشكل = 'صورة image-style-align-center image_resized' style='display: table؛ margin-left: auto؛ margin-right: auto؛ width: 75٪;'>
الشكل 1: شرائح الدماغ التمثيلية المستخدمة في تجارب التثقيب الكهربائي الحاد. (أ-ج) تم الحصول على شرائح Telencephalic بثلاثة مستويات متسلسلة متميزة من الجذعي الوردي ، ملطخة ب 4 ′ ، 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI). LGE: مكانة العقدة الجانبية. MGE: المكانة العقدية الإنسية. CGE: مكانة العقدة الذيلية. أشرطة المقياس = 200 ميكرومتر. تشير العلامات النجمية الصفراء إلى موقع التثقيب الكهربائي في كل شريحة. يشير الخط الأبيض إلى حافة البروز العقدي.
<فئة الشكل = 'image image-style-align-center image_resized' style='display: table؛ margin-left؛ auto؛ margin-right: auto؛ width: 75٪؛ '>
الشكل 2: التمثيل التخطيطي لسير العمل التجريبي. (أ) يتم تزويد شرائح دماغ الفأر بالكهرباء بتركيبات مناسبة ، و (ب) بعد 12 ساعة ، يتم عزل سلائف الخلايا العصبية القشرية المعدلة (CI) و (ج) يتم زرعها في بليوم صغار الفئران حديثي الولادة (P0−P2). من أجل تعديل نشاط CIs غير الناضجة ، تم حقن صغار P14 الذين تلقوا عمليات زرع الخلايا باستخدام CNO أو مركبة لمدة أربعة أيام تأسيسية وفقا للبروتوكول المقدم. (أ) صورة لإعداد التثقيب الكهربائي لشريحة دماغ الفأر الحادة.
<فئة الشكل = 'image image-style-align-center image_resized' style = 'display: table ؛ margin-left: auto ؛ margin-right: auto ؛ width: 75٪ ؛ '>
الشكل 3: تجربة التثقيب الكهربائي للشريحة الحادة الناجحة التمثيلية. (أ) قسم إكليلي تمثيلي من دماغ جنين E14.5 تم نقله في CGE مع كل من pCAGGs-IRES-GFP (بروتين الفلورسنت الأخضر) و pCAGGs-hM3D (Gq) -IRES-RFP (بروتين الفلورسنت الأحمر) وتم زراعته لمدة 12 ساعة. تم تلطيخ القسم بالمناعة ل GFP (A ، B ، C) و RFP (A ، B ، D). يتم تكبير المنطقة المعبأة في اللوحة A لإظهار تعبير كل من مراسلي الفلورسنت (B) و GFP (C) و RFP فقط (D). يشير الخط الأبيض إلى حافة البروز العقدي. B-D: نفس الصورة أو قنوات مختلفة أو مزيج من القناتين المختلفتين. أشرطة المقياس = 200 ميكرومتر (A) ، 100 ميكرومتر (B-D).
