الحث البصري الوراثي للاكتئاب طويل الأمد لقمع سلوك البحث عن المخدرات في الفئران

الملخص

المصدر: Rich، M. T.، et al. استخدام البصريات الوراثية لعكس المرونة العصبية وتثبيط البحث عن الكوكايين في الفئران. J. Vis. Exp. (2021)

يوضح هذا الفيديو استخدام علم البصريات الوراثي للحث على الاكتئاب طويل الأمد (LTD) في النواة الركبية الإنسية إلى نقاط الاشتباك العصبي اللوزة الجانبية (MGN-LA) ، مما يضعف سلوك البحث عن المخدرات الناجم عن الإشارة في نموذج الفئران. يخضع الجرذ ، الذي تم زرعه جراحيا بالألياف الضوئية ويتم نقله فيروسيا للتعبير عن القنوات الأيونية الحساسة للضوء ، لتحفيز بصري وراثي بنبضات بصرية منخفضة التردد ، مما يؤدي إلى إطلاق الناقل العصبي وإضعاف متشابك. تقلل هذه العملية من انتقال MGN-LA المشبكي من خلال استيعاب مستقبلات الناقل العصبي ، مما يؤدي في النهاية إلى تعطيل الارتباط بين الإشارات وسلوك البحث عن المخدرات.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. القسطرة الوريدية للقوارض ، وتوصيل الفيروسات ، وزرع الألياف البصرية

1. تحضير للجراحة.
   1. تخدير الفئران بالكامل بالتخدير المفضل بناء على المبادئ التوجيهية المؤسسية. أحد الخيارات هو هيدروكلوريد الكيتامين (87.5-100 مجم / كجم ، عضليا [i.m.]) وزيلازين هيدروكلوريد (5 مجم / كجم ، i.m.). تأكد من تخدير الجرذ بالكامل عن طريق التحقق من عدم وجود منعكس قرصة إصبع القدم.
      تنبيه: الكيتامين مادة خاضعة للرقابة يجب التعامل معها وفقا للإرشادات المؤسسية.
      ملاحظة: يتم استخد....

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-ressize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 0.9٪ SalineFisher ScientificNC0291799 A.M.P.I. عازل التحفيزIso-Flex AAV5.hSyn.oChIEF.tdTomatoDuke Viral Vector Core (عبر Roger Tsien) # 268 AAV5.hSyn.tdطماطم (مراقبة)ديوك الفيروسي ناقل التحكم الأساسي الدموع الاصطناعية (مرهم البصريات)Covetrus70349 BetadineButler Schein38250 Cocaine HClNIDA Drug Supply Center9041-001 جهاز التحكم في درجة الحرارة ثنائي القناةWarner InstrumentsTC-344C الإيثانولجامعة بيتسبرغ كيمياء Stockroom200C5000 أغطية غبار الطويقThor LabsCAPLأغطية غبار بلاستيكية بيضاء ل 1.25 مم الحلقاتالطويق التزاوج الأكمامعدسات دوريكF210-3011Sleeve_BR_1.25 ، برونز ، 1.25 مم معرفالحلقاتمنتجات الألياف الدقيقةMM-FER2007C-2300Ø1.25 مم Multimode LC / PC الطويق السيراميك ، Ø230 ميكرومتر حجم ثقبالألياف البصريةThorLabs FP200URT200 ميكرومتر ألياف أساسية متعددة الأوضاع (0.5 NA) الألياف البصرية الدوارة المشتركةPrizmatix (مطلوبة من أمازون) قطر 18 مم ، موصل FC-FCلأداة تجريد الأليافThor LabsT12S21 GentamicinHenry Schein6913 حقنة هاميلتونهاميلتون80085حجم 10 ميكرولتر ، مقياس 26 ، 2 بوصة ، نمط نقطة 3مسدس حراريمتحالف للإلكترونيات972-6966250 فولت ، 750-800 درجة فهرنهايتمنتجات أليافالايبوكسي الدقيقة القابلة للشفاء بالحرارةPFP-353ND-8OZ الهيبارينهنري شاين55737 حمض الهيدروكلوريكفيشر العلمي219405490 الكيتامين هيدروكلوريكهنري شاين55853الكيتامين مادة خاضعة للرقابة ويجب التعامل معها وفقا للإرشاداتالمؤسسية Lactated Ringer'sHenry Schein9846 Laser ، سائق ، ومقرنة ليزر إلى أليافOEM أنظمة ليزرBL-473-00100-CWM-SD-xx-LED-0100 ميجاوات ، 473 نانومتر ، ليزر الحالة الصلبة بضخ الصمام الثنائي (خيار واحد)ليدوكائينبتلر شين14583 مستشعر الضوء ThorLabsPM100Dوحدة تحكم مقياس الطاقة المدمجة مع شاشة رقميةلاصق فوري LoctiteGrainger5.00E + 207 مضخم كهربائي دقيق / أجهزة جزيئية للحصول على البياناتMULTICLAMP700B / مضخة حاقن دقيق Digidata 1440A هارفارد جهاز70-4501حقنةمزدوجة Micromanipulatorأدوات SutterMPC-200 / ROE-200 أسمنت أسنان أورثوجيت ، سائللانغ دانتال1504BLKأسمنت أسنان أسودأورثوجيت ، مسحوقلانج أدانتل1530BLKمسحوق معاصر ، كابلات تصحيح سوداءThor LabsFP200ERTMultimode ، FT030 أنابيبRimadyl (Carprofen)Henry Schein24751 غرف الإدارة الذاتية / البرمجياتMed AssociatesMED-NP5L-D1 مسامير آلة الفولاذ المقاوم للصدأ WW Grainger6GB25M2-0.40mm آلة برغي ، مقلاة ، فيليبس ، A2 الفولاذ المقاوم للصدأ ، عادي ، 3 مم طولمحول تجسيمي للحلقاتThor LabsXCL الإطار التجسيميStoelting51603 خياطة خيوطأدوات العلوم الدقيقة18020-50خيط حريري ؛ الحجم: 5/0 ، القطر: 0.12 ممVetbond لاصق الأنسجةCovetrus1505