تقييم التأثيرات الوقائية العصبية لمركب الاختبار في نموذج فأر انسداد الشريان الدماغي الأوسط

الملخص

المصدر: Lee، S. E.، et al. تقييم الآثار العصبية للجسرrhizae الجذر et استخراج الجذور باستخدام نموذج فأر انسداد الشريان الدماغي الأوسط العابر. J. Vis. Exp. (2018)

يوضح هذا الفيديو إجراء تقييم التأثير الوقائي العصبي لمركب الاختبار في نموذج فأر انسداد الشريان الدماغي الأوسط. يدخل المركب إلى الدماغ ، ويمنع موت الخلايا العصبية ، ويقلل من حجم الاحتشاء ، مما يؤكد تأثيره الوقائي العصبي مقارنة بالفأر غير المعالج.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. نموذج الفأر لانسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO)

1. استخدم ذكور C57BL / 6 فئران تتراوح أعمارهم بين 6 أسابيع ووزنها 22-25 جم. قم بتزويد جميع بحرية الوصول إلى الطعام والماء القياسي ، وإيوائها في بيئة ذات درجة حرارة مضبوطة (22 ±1 درجة مئوية) ودورة ضوء / مظلمة لمدة 12 ساعة.
   1. قسم الفئران إلى مجموعات من ستة فئران لكل منها ، والتي يجب أن تتكون من مجموعات علاج طبيعية ، وتحكم ، و Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GRex).
   2. إجراء جراحة MCAO على مجموعات العلاج الضابطة والعلاج GRex باستخدام مجهر مجهر.
2. تحفيز التخدير الاستنشاقي في الفئران باستخدام 2٪ إيزوفلوران في 70٪ أكسيد النيتروز (N₂O) و 30٪ أكسجين (O₂). يعتبر التخدير كافيا عندما يصبح الفأر غير مستجيب للتحفيز الميكانيكي المطبق على ذيله. حافظ على درجة حرارة جسم الفئران عند 36.5 ± 0.5 درجة مئوية باستخدام بطانية تحمل درجة حرارة الجسم متصلة بمقياس حرارة.
3. قم بإزالة كل الشعر على صدر وأعناق الفئران عن طريق الحلاقة ، متبوعا باستخدام كريم إزالة الشعر. تطهير الموقع الجراحي للجلد بمقشر البيتادين بالتناوب مع الكحول مرتين ، ثم قم بعمل شق بطول 2 سم تقريبا بشفرة جراحية في وسط الرقبة. اعزل بعناية الشريان السباتي المشترك الأيسر (LCCA) والشريان السباتي الخارجي وفرع الشريان السباتي الداخلي عن الأنسجة الضامة المحيطة.
4. اربط الشريان السباتي الخارجي والشريان السباتي المشترك بخياطة جراحية (خياطة حريرية 4-0 ، نصف عقدة عقبة) لمنع تدفق الدم مؤقتا إلى الشريان السباتي الداخلي أثناء العملية.
5. أدخل خياطة نايلون مطلية بالسيليكون (8-0 خيوط أحادية ، بطول 11 مم) عبر الشريان السباتي الداخلي إلى أصل MCA الأيسر. اضبط سمك الجزء المطلي بالسيليكون من الفتيل إلى نطاق 0.10-0.12 مم.
6. قم بقياس الانخفاض في تدفق الدم الدماغي النسبي (rCBF) في MCA باستخدام مقياس تدفق دوبلر بالليزر. سيتم تأكيد MCAO عند الحفاظ على rCBF عند < 20٪ من قيم حالة الراحة خلال فترة الإقفار بأكملها.
7. ثبت الفتيل الذي تم إدخاله في الأوعية الدموية لمدة ساعتين أثناء انسداد الشريان الدماغي ، ثم اسحب الفتيل بعناية لاستعادة تدفق الدم لمدة 22 ساعة من إعادة التروية. خياطة الجلد عن طريق الخياطة في خمسة أماكن (خياطة حريرية 3-0 ، عقدتان نصف عقبة) واسمح لكل فأر بالاستيقاظ من التخدير.

المواد

< فئة الشكل = 'الجدول' ><فئة الجدول = 'ck-table-ressize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Glycyrrhizae Radix et RhizomaGwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea Stereo المجهرLeicaM50مجهر ستيريونيكونSMZ745أداة مستنقع ليزر دوبلرmoorVMS-LDFقوس منضدية التخدير مع نظام مقياس الجريان N₂O و O₂هارفارد Appratus34-1352نظام مراقبة الحرارةالمنزلية هارفارد Appratus55-7020نظام غذائي للفأرDoo Yeol Biotechقياسي قوارض تشاوIsofluraneJOONGWAEA02104781IsofluraneTROIKAAISOTROY 100خياطة حريرية (4-0 حرير أسود)AILEESK47510خياطة حريرية (3-0 حرير أبيض)خياطة Baekjae57نايلون (8-0 خيوط أحادية)AILEENB825أدوات العلوم الدقيقة AILEE NB82511241-30أدوات العلوم الدقيقةالملقط11254-20أدوات العلوم الدقيقةالملقط11274-20مقص جراحيأدوات العلوم الدقيقة14001-12مقص بون ناعم للغايةأدوات العلومالدقيقة 14084-08موريا باشيف وولف مقص الربيعأدوات العلوم الدقيقة15371-92ملقط توسيع الوعاءأدوات العلوم الدقيقة18153-11