إحداث إصابة العصب الشظوي في الفأر لدراسة تجديد الوصلات العصبية العضلية

الملخص

المصدر: Dalkin, W., et al. طريقة إصابة العصب الشظيوي: اختبار موثوق به لتحديد واختبار العوامل التي تصلح الوصلات العصبية العضلية. J. Vis. Exp. (2016)

يوضح هذا الفيديو إجراء جراحيا للحث على إصابة العصب الشظوي في الفأر لدراسة تجديد الوصلة العصبية العضلية (NMJ). يتضمن الإجراء تعريض العصب الشظوي ، وتطبيق ضغط متحكم فيه للحث على الإصابة ، والتأكد من بقاء epineurium سليما لدعم التجديد المحوري. بمرور الوقت ، تزيل البلاعم الحطام المحوري ، مما يسهل إصلاح الأعصاب وإعادة إنشاء NMJs.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تحضير للجراحة تخدير

1. الفئران بمزيج من الكيتامين (90 مجم / كجم) والزيلازين (10 مجم / كجم) عن طريق الحقن الإربي تحت الجلد بحقنة أنسولين معقمة سعة 1 مل. يحتوي المحلول الناقل على خليط من محلول ملحي 0.9٪ ، و 17.4 مجم / مل كيتامين ، و 2.6 مجم / مل زيلازين. ضع مرة أخرى في أقفاص أثناء انتظار دخول الدواء حيز التنفيذ.
   ملاحظة: إذا كانت جرعة التحميل لا توفر تخديرا كافيا طوال مدة الإجراء ، فقد يتم حقن 25٪ إضافية من جرعة التحميل.
2. مراقبة بعد الحقن للتحقق من معدلات التنفس الثابتة والاكتئاب المناسب لمستويات الإثارة. تحقق من مستوى الإثارة بقرصة القدم الخلفية ، والتي لا ينبغي أن تثير أي استجابة عند التخدير بشكل كاف.
   ملاحظة: يستغرق هذا عادة من 3 إلى 5 دقائق للفأر البالغ الصغير بمتوسط 25 إلى 30 جم. إذا كان لا يزال مستجيبا بعد 10 دقائق من الحقن ، فيمكن حقن 25٪ إضافية من جرعة تحميل المخدر.
3. ضع الفازلين ومرهم العيون بالزيت المعدني الخفيف على عيون لمنع الجفاف. أخرج من القفص وضعها على سطح نظيف ومستو. احلق الطرف الخلفي المطلوب من القدم إلى الحوض باستخدام أداة تشذيب الشعر الكهربائية ، مع تعريض الجانب الجانبي فقط للطرف.
4. ضعي مزيل الشعر الكيميائي على مكان الحلاقة لمدة 1 دقيقة. قم بإزالة الشعر يدويا باستخدام مناديل المختبر. نظف المنطقة منزوعة الشعر بمنديل مختبر مبلل بالإيثانول.

2. الإجراء الجراحي

1. تعقيم الأدوات الجراحية عن طريق الأوتوكلاف أو أي طريقة أخرى مناسبة. نظف موقع الجراحة واللوح الجراحي بنسبة 80٪ إيثانول / H₂O. تطهير موقع الجراحة ببروفيدون. ضع الماوس على لوحة الجراحة وقم بمحاذاة قيود الأطراف. حافظ على الطرف الخلفي المستهدف في وضع طبيعي تشريحيا مع تمديد مفصل الركبة قليلا دون دوران داخلي أو خارجي.
2. ضع واللوح تحت المجهر الجراحي. التوجيه إلى موقع الشق المناسب عن طريق ملامسة المعالم السطحية ، وتحديدا مفصل الركبة العظمي والتلال بين عضلات الظنبوب الأمامية وعضلات المعدة.
3. قم بعمل شق بطول 3 سم تقريبا عبر الجلد باستخدام مشرط أو مقص زنبركي أثناء استخدام ملقط عام للإمساك. اجعل الشق عموديا على المسار الأساسي للعصب الشظوي المشترك.
4. استمر في الشق من خلال اللفافة السطحية ، مع تعريض العضلة ذات الرأسين الفخذية والعضلات الجانبية الواسعة. افصل هذه العضلات عن طريق قطع اللفافة العميقة المتصلة. يجب أن يكون القطع 1-2 سم كافيا.
5. سحب العضلة ذات الرأسين الفخذ ذيليا باستخدام مباعدات ميكانيكية, الكشف عن العصب الشظوي المشترك.
6. تتبع العصب بالقرب من ذلك حتى يتم العثور على تقاطعه مع وتر الرأس الجانبي لعضلة المعدة.
   ملاحظة: قد يتطلب التعرض تلاعبا إضافيا بالجلد والعضلات المتراجعة. يستخدم هذا التقاطع كمعلم مستقر لإصابة الأعصاب.
7. أمسك العصب بملقط ناعم ، ومحاذاة الأطراف بطريقة موازية مع الحدود الجانبية لوتر المعدة. سحق العصب الشظوي المشترك عن طريق الضغط الثابت والثابت لمدة 5 ثوان.
8. تأكيد السحق الكامل للعصب عن طريق الفحص البصري من خلال المنظار الجراحي. سيبدو شفافا في موقع الإصابة. في حالة استخدام الفئران التي تعبر عن بروتينات التألق في المحاور الطرفية ، سيختفي التألق من موقع الإصابة.
9. قم بإزالة الضاعرات وإعادة تنظيم العضلات في مواقعها التشريحية. أغلق موقع الشق ب 6-0 خيوط حريرية. 1-3 خيوط بسيطة متقطعة كافية. ضع الماوس المستعاد على وسادة تدفئة في قفص نظيف.
10. راقب جميع لمدة ساعتين بعد العملية للتحقق من التنفس وأي ردود فعل سلبية على التخدير. يجب إعطاء جرعة أولية من البوبرينورفين 0.05-0.10 ملغم/كغ عن طريق الحقن الإربي تحت الجلد مباشرة بعد التعافي من الجراحة. أعط 3 جرعات إضافية كل 12 ساعة خلال ال 48 ساعة القادمة. بعد الشفاء التام ، أعد الفئران إلى منشأة رعاية.

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-ressize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات KetamineVetOne501072 XylazineLloyd Inc.3437 بوبرينورفينزوفارم1Z-73000-150910 ناير ناير كيم مناديلKimtech34155 ماكينة حلاقة كهربائيةبرينتري ScientificCLP-64800 80٪ EtOH / H₂O 10٪ Proviodine 1 مل مقص زنبركي لحقنة الأنسولين Vannas91500-09 رقم 15 مشرطBraintree ScientificSSS 15 # 5 ملقطDumont11252-00 6-0 خياطة حريرية على إبرة قطع عكسيةخياطة Express752B وسادة تسخين القوارضBraintree ScientificAP-R-18.5 Alexa 555 مجسات جزيئية مترافقة alpha-BTXB35451 مختبرات VectashieldVector LabsH-1000 Olympus Stereo ZoomMicroscope أوليمبوس562037192 Zeiss 700 مجهر متحد البؤرZeiss مضخة التروية التمعجية متغيرةالتدفق فيشر Scientific13-876-3