Method Article

الفئران عقدة اللمفاوية السطحية جراحة

DOI:

10.3791/3444

⸱

May 21st, 2012

 , 
1Maisonneuve-Rosemont Hospital Research Center, 2Department of Microbiology and Immunology, University of Montreal, 3Department of Medicine, University of Montreal

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لمتابعة تطور استجابة مناعية أكثر من مرة داخل الماوس نفسه، ويمكن إزالة الغدد الليمفاوية بشكل متتابع عن طريق الجراحة. هنا، نحن تصف كيف يمكن تنفيذ هذه التقنية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في مجال علم المناعة، لفهم تطور استجابة مناعية ضد لقاح لعدوى أو ورم، ويتبع في كثير من الأحيان استجابة مع مرور الوقت. وبالمثل، فإن دراسة التوازن لمفاوية يتطلب بطبيعة الحال التجارب المرة. تنفيذ هذه الدراسات في الماوس نفسه مثالية للحد من التقلبات التجريبية، فضلا عن عدد من الفئران المستخدمة. سحب الدم يسمح أداء التجارب مسار الزمن، لكنه يعطي فقط معلومات حول تعميم الخلايا اللمفية، ويقدم لعدد محدود من الخلايا 1-4. منذ الخلايا الليمفاوية من خلال تعميم الجسد والمقيمين في الغدد الليمفاوية لها خصائص مختلفة، من المهم أن تدرس كلا الموقعين. إزالة متتابعة من الغدد الليمفاوية عن طريق الجراحة يوفر فرصة فريدة لمتابعة استجابة مناعية أو توسيع الخلية المناعية في الماوس نفسه مع مرور الوقت. وعلاوة على ذلك، هذا الأسلوب ينتج بين الخلايا 6 1-2x10 في العقدة الليمفاوية التي هي كافية لPErform التوصيف المظهري و / أو فحوصات وظيفية. وقد متتابعة لعملية جراحية العقدة الليمفاوية أو الغدد الليمفاوية استخدمت بنجاح من قبلنا وغيرها من 5-11. هنا، نحن تصف كيف يمكن إزالة العقد اللمفية العضدية، والاربية من خلال جعل شق صغير في الجلد من فأر anesthetised. منذ العملية الجراحية هو سطحي والقيام بسرعة، والماوس للشفاء بسرعة كبيرة، ويشفى تماما وليس تجربة الألم المفرط. كل يوم الثاني على التوالي، فمن الممكن لجني الغدد الليمفاوية واحد أو اثنين مما يسمح للتجارب دوام. هذا الأسلوب هو مناسب وبالتالي إلى دراسة خصائص العقدة الليمفاوية، الخلايا الليمفاوية المقيمين على مر الزمن. هذا النهج هو مناسبة لتصاميم تجريبية مختلفة، ونعتقد أن العديد من المختبرات ستستفيد من تنفيذ عمليات جراحية متتابعة العقدة الليمفاوية.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. إعداد قبل الجراحة

عولجت فئران وفقا لمبادئ توجيهية المجلس الكندي للرعاية الحيوان.

  1. Anesthetise الفئران عن طريق الحقن من الكيتامين / زيلازين (150/300 ملغ / كلغ، والملكية الفكرية) أو عن طريق استنشاق isoflurane (2٪، والأكسجين 1L). إذا كانت متوفرة، يجب استخدام isoflurane لأنها تسمح لتحسين السيطرة على الوقت التخدير وعمق. أيضا، ويدير الأكسجين في نفس الوقت الذي تدعم الوظائف الفسيولوجية للحيوان. وعلاوة على ذلك، يتم التخلص مباشرة isoflurane بواسطة الرئتين، وبالتالي لا يتطلب عملي....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد وصفت نحن بروتوكولا للجراحة LN التي يمكن أن تنطبق على كثير من النظم التجريبية. وعلى الرغم من المفيد جدا لمتابعة الاستجابات المناعية أو المناعي توازن الخلية، هذه التقنية لديها عدد قليل من القيود. أولا، يمكن أن يحصد سوى أربعة LNS. ثانيا، يجب أن يكون رد الفعل المناعي دراسة منهجية أو تحدث في LNS سطحي (البشرة استنزاف) الأربية أو العضدية. أخيرا، ويتأثر عدد الخلايا التي تحصد من نوعية إزالة LN، وتحديد التقنية التي قد تساهم في تقلب التجريبية عندما تكون هناك حاجة أرقام الخلية المطلق. ومع.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر سيلفي ليسيج وجميع أفراد مختبر لقراءة نقدية للبروتوكول. وأيد هذا العمل من خلال منحة (MOP-77545) من المعاهد الكندية لأبحاث الصحة (CIHR). ويدعم ناتالي Labrecque بواسطة منحة دراسية كبار FRSQ وميليسا ماتيو تلقى الكسندر غراهام بيل NSERC منحة دراسات عليا كندا.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
اسم كاشف شركة فهرس العدد تعليقات
غريف الجميلة الملقط بريميوم نمط هارفارد جهاز 52-2144 منحني بقوة، 10 سم (4 بوصة)، و 0.8 ملم معلومات سرية
ميشال كليب تطبيق وإزالة الملقط هارفارد جهاز 52-3779 12.5 سم (5 بوصة)
ميشال كليب 100 هارفارد جهاز 52-3746 7،5-1،75 مم
Temgesic (البوبرينورفين هيدروكلوريد) شيرينغ بلاو
Vetalar (هيدروكلوريد الكيتامين) Boniche الحيوان للرعاية الصحية الدين: 01989529
Rompun (زيلازين) باير الدين: 02169592
Isoflurane ABBOTT الدين: 02032384
Hypotears العين مرهم نوفارتيس Ophtalmics الدين: 02133288
Baxedin (Clorhexidine جلوكونات 2٪ في ايزوبروبيل 70٪) أوميغا L0000017 الدين: 02251477

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen. Nature. 458, 211-214 (2009).
  2. Vezys, V. Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience. Nature. 457, 196-199 (2009).
  3. Zho....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Lymph Node SurgeryMurine Lymph NodeBrachial Lymph NodeInguinal Lymph NodeLymph Node RemovalSequential Lymph NodeLymph Node HarvestingSingle Cell SuspensionFlow Cytometry AnalysisIsotonic Solution

Related Articles