التصاق الفحص عن التردد في الموقع تحليل حركية عبر صلي التفاعلات الجزيئية في خلية واجهة سيل

ملخص

يوصف لفحص لقياس التردد التصاق حركية التفاعل مستقبلات يجند عندما ترسو على حد سواء الجزيئات على أسطح الخلايا المتفاعلة. ويتمثل هذا الاختبار القائم على ميكانيكيا باستخدام micropipette مضغوطة الإنسان خلايا الدم الحمراء وأجهزة الاستشعار والتصاق αLβ2 إنتغرين وبين الخلايا جزيء التصاق - 1 والتفاعل ومستقبلات يغاندس.

الملخص

تم تطوير مقايسة التصاق micropipette في عام 1998 لقياس ثنائي الأبعاد (2D) مستقبلات يجند حركية ملزمة ^1. في مقايسة يستخدم الإنسان خلايا الدم الحمراء (RBC) وأجهزة الاستشعار والتصاق الخلية عرض لواحدة من الجزيئات المتفاعلة. انها توظف المجهرية لجلب RBC في اتصال مع خلية أخرى يعبر عن جزيء التفاعل مع غيرها من المنطقة التي تسيطر على وجه التحديد والوقت لتمكين تشكيل السندات. تم الكشف عن حالة التصاق والاستطالة على سحب RBC الخلايا باستثناء اثنين. من خلال التحكم في كثافة يغاندس ثبتوا على سطح خلايا الدم الحمراء ، يتم الاحتفاظ احتمال الالتصاق في منتصف المدى بين 0 و 1. ويقدر احتمال التصاق من وتيرة الأحداث التصاق في سلسلة من دورات متكررة الاتصال بين خليتين لوقت الاتصال معين. متفاوتة في وقت الاتصال يولد منحنى ملزم. تركيب نموذج احتمالي لمستقبلات يجند رد فعل حركية ¹ إلى الربطمنحنى عائدات تقارب معدل 2D وقبالة.

وقد تم التحقق من صحة الفحص باستخدام تفاعلات مستقبلات Fcγ مع نادي مفتش ^{1-6 و} selectins مع يغاندس glycoconjugate ^6-9 ، لل integrins مع يغاندس ^10-13 ، homotypical كادهيرين ملزمة ¹⁴ ، تي مستقبلات الخلية وcoreceptor مع المجمعات الكبرى التوافق النسيجي الببتيد - ^{15 -- 19.}

وقد استخدمت هذه الطريقة لقياس أنظمة حركية 2D عوامل البيولوجية والفيزيائية ، مثل الغشاء microtopology ⁵ ، ² مرساة الغشاء ، والتوجه الجزيئية وطول ⁶ ، وتصلب الناقل ⁹ ، ²⁰ انحناء ، وقوة اعتداءات ²⁰ ، فضلا عن العوامل البيوكيميائية ، مثل جهري من الهيكل الخلوي والغشاء المكروية حيث تتفاعل الجزيئات الموجودة وتنظيم سطح هذه الجزيئات ^15،17،19.

الأسلوب كما استخدمت رس دراسة الربط المتزامن لأنواع مستقبلات يجند ^3،4 المزدوج ، والتفاعلات trimolecular ¹⁹ باستخدام نموذج تعديل ^21.

والميزة الرئيسية لهذه الطريقة أنها تسمح دراسة المستقبلات في غشاء بيئتها الأصلية. ويمكن أن تكون النتائج مختلفة جدا عن تلك التي تم الحصول عليها باستخدام مستقبلات المنقى ^17. كما يسمح دراسة التفاعلات مستقبلات يجند في فترة زمنية الفرعي الثاني للقرار الزمنية إلى ما وراء الأساليب التقليدية البيوكيميائية.

لتوضيح طريقة التصاق micropipette التردد ، وتبين لنا قياس حركية جزيء التصاق بين الخلايا 1 (ICAM - 1) على كرات الدم الحمراء functionalized ملزمة لإنتغرين β α _{L 2} على العدلات مع مثنوي E - selectin في الحل لتنشيط β α _{L 2.}

البروتوكول

1. كرات الدم الحمراء في الدم من عزلة كاملة

1. تعد قمة شرق اسيا حلول - 45. يصل وزنه جميع المكونات من الجدول الأول وتذوب في 200ml من الماء - 100 DI. إضافة الماء لجعل الحل وضبط درجة الحموضة 1000ml إلى 8.0. تصفية وقسامة بواسطة 50ml. التجميد في -20 درجة مئوية لمدة التخزين.

ملاحظة : يجب أن يتم تنفيذ الخطوة 1.2 من هذا القبيل تدريب المهني الطبي كممرضة ، مع مجلس المراجعة المؤسساتي البروتوكول المعتمدة.

2. التعادل 3 - 5ml من الدم من الوريد المرفقي المتوسط ​​في أنبوب EDTA 10ML تحتوي على مزيج بلطف والدم مع EDTA فورا وبدقة لتجنب تجلط.
3. عملية عينة الدم في أقرب وقت ممكن. وينبغي القيام بكل الخطوات التالية ما عدا الطرد المركزي تحت غطاء محرك السيارة للحفاظ على إعداد عقيمة. نقل الدم إلى أنبوب الطرد المركزي 50ml ، إضافة 10ML Histopaque من البرد ومعقمة و1077 جهاز طرد مركزي ل5min @ 1000rpm ، 4 درجات مئوية. كرر مرتين.
4. إضافة 10مل الباردة ومعقمة PBS ، الطرد المركزي ل5min @ 1000rpm ، 4 درجات مئوية. إزالة طاف. كرر 4 مرات (المجموع 5 مرات).
5. تغسل مع العقيمة EAS - 45 (درجة مئوية 5min @ 1000rpm ، 4) مرتين. خلال مشاركة كرات الدم الحمراء نقل الغسيل في أنبوب جديد 15ml العقيمة.
6. Resuspend كرات الدم الحمراء in10ml EAS - 45.

2. كرات الدم الحمراء biotinylation

1. أخذ أنبوب مع كرات الدم الحمراء من الخطوة 1. إزالة كافة طاف بعد الطرد المركزي ل5min @ 1000rpm ، 4 درجات مئوية. وضع بيليه 10μl من كرات الدم الحمراء لكل من عدة قوارير وإضافة مبلغ مماثل لبرنامج تلفزيوني على كل قارورة (انظر الجدول الثاني على سبيل المثال إعداد تركيزات مختلفة من ستة biotinylation كرات الدم الحمراء).
2. جعل الطازجة Biotin-X-NHS/DMF 1:10 ، 1:100 التخفيفات حسب الجدول الثاني.
3. إضافة 10μl العازلة من بورات 0.1M إلى كل القارورة.
4. إضافة كمية محسوبة من البيوتين إلى حل كل قارورة (انظر الجدول الثاني على سبيل المثال) ، ودوامة على الفور.
5. وضع كل قارورة RBCداخل أنبوب 50ml المخروطية وعلى احتضان المدورة ل30min في درجة حرارة الغرفة.
6. غسل القنينة الواحدة 3 مرات مع 800μl من EAS - 45 لل2000rpm @ 2min.
7. إضافة 100μl من EAS - 45 على كل قارورة وتخزينها في 4 درجات مئوية. في كل 1μl الحل النهائي يجب أن يكون الآن ~ 1mln من كرات الدم الحمراء.

3. * في Functionalizing يغاندس البيوتين مرتبطة على كرات الدم الحمراء

1. إعداد 2mg/ml streptavidin حل وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. قد تكون مخزنة في حل Aliqouted -20 درجة مئوية.
2. مزيج مبلغ مساو من كرات الدم الحمراء من الخطوة 2.7 (10μl) مع الحل streptavidin ، دوامة فورا وعلى احتضان المدورة ل30min عند 4 درجة مئوية.
3. يغسل 3 مرات مع 500μl من EAS - 45 لل2000rpm @ 2min. إضافة 15μl EAS - 45 / 1 ٪ BSA للتخزين.
4. المزيج كمية مساوية من كرات الدم الحمراء من الخطوة 3.3 (10μl) مع الحل يجند 20μg/ml ، دوامة فورا وعلى احتضان المدورة ل30min في درجة حرارة الغرفة.
5. تغسل مرتين مع 500μl من EAS -45 / 1 ٪ لجيش صرب البوسنة 2min @ 2000rpm. إضافة 15μl من EAS BSA - 45 / 1 ٪ للتخزين.

* إذا كان لديك بروتين لا يوجد لديه ارتباط البيوتين يمكنك استخدام واحدة من مجموعات المتاحة تجاريا لbiotinylation البروتين (على سبيل المثال ، الحرارية العلمية # 21955 EZ - ارتباط مايكرو NHS - PEG4 - Biotinylation كيت) أو استخدام الأضداد biotinylated اسر بمثابة خطوة وسيطة كما هو موضح في شريط الفيديو.

4. الكمي للكثافة المستقبلات ويجند

1. احتضان يجند المغلفة كرات الدم الحمراء من الخطوة 3 ، وقارورة في الخلايا مستقبلات مختلفة الحاملة ، مع تركيزات تشبع من MABS منها ل30min في درجة حرارة الغرفة. احتضان في خلايا منفصلة مع قارورة الأضداد isotype المطابقة غير ذات صلة من أجل السيطرة. إذا لم يتم الأجسام المضادة الأولية fluorescently المسمى ، مع احتضان الأضداد الثانوية fluorescently ، مترافق وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
2. تحليل عينات أعدت في الخطوة 4.1 cytometery التي تتدفق مع كال الفلورسنت المقابلةibration الخرز. حساب الكثافة كما هو مبين في الشكل. 1.

5. استعدادا لmicropipette وغرفة الخلية

1. سحب micropipettes من الأنابيب الشعرية به PN - 30 Narishige 'بولير Microelectrode الزجاج الأفقي المغناطيسي أو آلات بولير Micropipette سوتر.
2. مع استخدام micromanipulator microforge لضبط غيض من micropipette انسحبت إلى الحجم المطلوب (عادة يتراوح قطرها المطلوبة من 5μm - 1 اعتمادا على حجم الخلايا لاستخدامها في الدراسة).
3. إعداد غرفة الخلية عن طريق قطع الزجاج غطاء مجهر إلى الحجم المطلوب. ختم الغرفة باستخدام الزيوت المعدنية من كلا الجانبين لتجنب التبخر المتوسطة لتغيير الأسمولية أثناء التجربة.
4. إضافة مستقبلات الخلايا ويجند تحمل إلى الغرفة.

6. Micropipette مقايسة التصاق التردد

1. نضح الخلايا التي تتفاعل الماصات منها واستخدام الكمبيوتر مبرمجة piezoelectr جيم مترجم لدفع RBC داخل وخارج الاتصال مع الخلايا الاخرى مع منطقة تسيطر عليها الاتصال والوقت. الكشف عن أحداث التصاق بملاحظة RBC استطالة عند انتهاء الخلية.
2. تكرار دورة الاتصال ، 5-10 مرات التراجع عن وقت الاتصال معين. تسجيل الأحداث التي لاحظها التصاق مضيفا "1" للالتصاق أو "0" لا لالتصاق في عمود من جدول بيانات Excel. يمكنك استخدام جهاز التسجيل ، على سبيل المثال ، والإعلام الرقمي أو شريط فيديو ، للصور المجهرية.
3. تسجيل الترددات التصاق مقابل منحنى الاتصال به مرة على الأقل ثلاثة أزواج مختلفة من الخلايا في كل مرة للحصول على اتصال ويعني SEM.
4. سجل منحنى غير محدد ملزم للتحكم باستخدام كرات الدم الحمراء المغلفة مع يغاندس غير ذي صلة (على سبيل المثال BSA) و / أو إعاقة أو يغاندس المستقبلات الخاصة به MABS الحصار وظيفية. ويمكن حساب التردد التصاق محددة في كل وقت عن طريق نقطة اتصال وتيرة ازالة التصاق غير محدد ^1.

ove_title "> 7. تحليل البيانات

1. تتناسب وتيرة محددة التصاق ف _وقت بيانات الاتصال طن مقابل من نموذج احتمالي (المعادلات 1) الذي يصف الدرجة الثانية إلى الأمام والنظام الأول العكسي ، خطوة واحدة التفاعل بين نوع واحد من المستقبلات ونوع واحد من يغاندس ¹ :
   
   حيث K _أ هو 2D تقارب ملزمة فعالة ، ك _قبالة هو إيقاف الصرف ، م _ص و _ل م هي مستقبلات منها وقياس كثافة يجند في الخطوة 4 ، _وج هي منطقة الاتصال. منحنى تناسب معلمتين ، أ _{ج أ} ك ك _{وخارجها} ، كما ألف _ج والبوتاسيوم وجمعها معا ، ودعا _a مجتمعة تقارب 2D فعالة. منتجاتها مع معدل قبالة هو فعال على معدل 2D : A ج ك = A _{على ج} س ك ك _{a قبالة.}
   ويتم احتساب وتيرة محددة التصاق ف _ثانوي الطرح للالتصاق جزء غير محدد (ف _{غير محدد)} من مجموع التصاق قياس (P _تقاس) ^1،21 :
   

8. ممثل النتائج :

الشكل 1 تحديد إنتغرين β α _{L 2} الكثافة موقع على العدلات. وحضنت first العدلات مع 1μg/ml من E - IG - selectin ل10min لتتناسب مع حالة التجريبية المستخدمة في أرقام 3،4 أو بدون E - IG - selectin ، ثم مع تركيزات تشبع (10μg/ml) من PE - مترافق المضادة البشرية CD11a خريطة موقع (استنساخ HI111 ، انظر جدول محددتغسل الكواشف والمعدات) أو غير ذات صلة IgG1 الماوس للسيطرة ، وتحليلها على الفور. وكانت العينات في قراءة عداد الكريات دينار بحريني مع تدفق LSR QuantiBRITE الخرز المعايرة القياسية PE. رسوم بيانية لوحة ويظهر مضان من الخرز المعايرة (الوردي) جنبا الى جنب مع تلك - E - selectin الإيج الخلايا المعالجة (اللون الأزرق) أو غير المعالجة (اللون الأخضر). ويرد محددة تلوين خريطة موقع CD11a في منحنيات الصلبة وغير ذي صلة الضد يظهر سيطرة isotype المطابقة تلطيخ في منحنيات المنقط. لم الخلايا تعامل مع E - IG - selectin (وجود في جميع الخطوات في الغسيل وFACS العازلة) لن يؤثر على كثافة CD11a كما يتضح من مقارنة مع الخلايا غير المعالجة. لوحة باء يظهر في عملية تقدير الكثافة. وقد حسبت LOG10 لشدة يعني فلوري (FI) من كل قيمة الذروة أربعة رسوم بيانية المعايرة حبة من لوحة A (الدوائر الوردي) وجزيئات PE الكثير محددة لكل حبة (من الشركة المصنعة). والانحدار الخطي للجزيئات PE LOG10 لكل حبة ضد fluoresc LOG10وقد تآمر جزأين. لE - selectin الخلايا معاملة FI LOG10 (ذ) قيم المساواة 3.99 (دائرة زرقاء ثابتة) و2.23 (دائرة مفتوحة الأزرق) لخريطة موقع الضد محددة والسيطرة ، respectivly. علينا حل المعادلة الخطية ل x (يتم رسم القيم كدوائر خضراء وزرقاء على الفريق B) س = LOG10 PE / خلية ، وكما PE : خريطة موقع كانت نسبة 1:1 ، وكان العدد الإجمالي للβ α _{L 2} على العدلات المحسوبة على النحو 9587. تم حساب كثافة السطح لتكون جزيئات 43 / ² ميكرون ، وذلك باستخدام 8.4μm كما قطرها ²² العدلة. وقد تم قياس كثافة بالمثل ICAM - 1 بواسطة cytometery تدفق باستخدام PE - المضادة للCD54 خريطة موقع الإنسان ، والتي بلغت 65 مول / ² ميكرون.

الرقم 2 نظام Micropipette الخطط. تم تجميع نظامنا micropipette في المنزل ويتكون من ثلاثة نظم فرعية هي : فرعي التصوير للسماح واحد لمراقبة وتفصيلORD وتحليل تحركات الخلية micropipette - يستنشق ؛ فرعي المجهرية لتمكين احد لتحديد الخلايا من الغرفة الخلية ، والنظام الفرعي للسماح للضغط واحد إلى نضح الخلايا في micropipettes. غير مقلوب على جزء أساسي من النظام الفرعي التصوير المجهر (أوليمبوس IMT - 2 IMT2) مع الغمر النفط 100X الهدف NA 1.25. يتم إرسال صورة إلى مسجل فيديو كاسيت من خلال اتهام الزوجين جهاز (CCD) الكاميرا. ويقترن جهاز توقيت الفيديو إلى نظام لتتبع الوقت. ويمكن التلاعب بها من قبل كل micropipette حملة الميكانيكية التي شنت على المجهر وناعما وضعه مع micromanipulator ثلاثة محاور هيدروليكية. ويمكن استخدام المتلاعبين الميكانيكية من نيوبورت كذلك. هي التي شنت واحدة من أصحاب micropipette على المترجم كهرضغطية ، يتم التحكم فيها من قبل سائق رمز LABVIEW الكمبيوتر (متوفر عند الطلب) ، ويترجم من خلال لوحة إشارة دق عبر مكبر للصوت الجهد (محلية الصنع) على المحرك بيزو. هذا الأمرllows واحد لنقل بدقة وماصة repeatably في التصاق دورة الاختبار. يستخدم النظام الفرعي للتحكم في تنظيم ضغط الشفط أثناء التجربة. يربط خط الهيدروليكية صاحب micropipette إلى خزان السائل. A ميضعة غرامة الميكانيكية يسمح ارتفاع الخزان التلاعب بدقة.

يتم إنشاؤها باستخدام Micropipettes KIMAX ذوبان أنابيب زجاجية نقطة البورسليكات الشعرية (مع خارج القطر من 1.0 ± 0.07 ملم وقطرها من الداخل 0.7 ± 0.07 ملم. أولا ، يتم سحبها من الأنابيب الشعرية micropipettes به PN - 30 Narishige 'بولير Microelectrode الزجاج الأفقي المغناطيسي (سوتر آلات Micropipette بولير هو خيار آخر مجتذب) ، ويستخدم نظام Microforge الثانية ، (بنيت في المنزل) لقطع micropipettes لافتتاح الحجم المطلوب. النماذج التجارية لنظم Microforge تتوفر كذلك.

لتجنب اهتزاز micropipettes خلال التجربة ، وmicroscمكتب مستشار رئيس الوزراء ، جنبا إلى جنب مع micromanipulators ، يتم وضعها على جدول تعليق هوائي.

الشكل 3 تشغيل التصاق F تردد عن _ط محددة (A) وغير محدد (B) في ملزمة 1S (الحمراء) ، و10S مرات الاتصال (الأزرق) يقاس من تكرار دورات اختبار الالتصاق بين كرات الدم الحمراء المغلفة مع ICAM - 1 (أ) أو hIgG (B ) مع العدلات الإنسان معربا عن إنتغرين β α _{L 2. ط} = F (X X ₁ + ₂ +... + X _ط) / ط (1 ≤ ≤ ط ن) ، حيث i هو فهرس دورة الاختبار ، X _ط يساوي "1" وقد استخدم (الالتصاق) أو "0" (أي التصاق). F _ن (ن = 50) ، وأفضل تقدير لاحتمال الالتصاق.

الشكل 4 حركيةICAM - 1 ملزمة لإنتغرين العدلة β α _{L 2} ( ). احتمال التصاق قياس كما هو موضح في الشكل رقم 3 لأزواج الخلايا الثلاث في كل مرة يتم الاتصال المتوسط ​​ورسم مقابل وقت الاتصال. كانت غرفة متوسطة HBSS 1MM مع كل من الكالسيوم والمغنيسيوم ^{2 + 2 +} زائد 1μg/ml من مثنوي - E - selectin الإيج لupregulate α β _{L 2} ملزمة. لالتقاط ICAM - 1 - الإيج على كرات الدم الحمراء ، وأضيف خطوة وسيطة لاحتضان كرات الدم الحمراء مع الضد التقاط 10μg/ml (biotinylated الماعز المضادة للجسم البشري التيسير ، eBioscience) بعد الخطوة streptavidin الحضانة. للسيطرة على شرطين غير محدد ملزم مختلفة استخدمت : 1) كرات الدم الحمراء المغلفة مع الأجسام المضادة الطبيعية المضادة للبشرية التيسير وحضنت مع مفتش الإنسان بدلا من ICAM - 1 - الإيج (O) و 2) العدلات ملزمة لكرات الدم الحمراء غير المغلفة مع القبض على الضد (Δ). واضاف مفتش 10μg/ml الإنسان إلى وسيلة للحد من ربط البريدselectin - - الإيج في حل لالتقاط الأجسام المضادة على سطح خلايا الدم الحمراء. وقد استخدم ملزم غير محدد كما هو مسجل الإنسان منحنى مراقبة مفتش الحكومة للحصول على احتمال التصاق محددة منحنى ( ) باستخدام المعادلة. 2. تركيب احتمال التصاق محددة مع منحنى المعادلة. عاد 1 (خط الصلبة) تقارب فعالة وملزمة ك _{ج أ} = 1.4 • 10 μm4 ^-4 _وقبالة ك = 0.3 ق ^-1.

الكاشف	ميغاواط (ز / مول)	تركيز (ملم)	المبلغ (ز)
الأدينين	135.13	2	0.27
مد الجلوكوز (سكر العنب)	180.16	110	19.82
D - المانيتول	182.17	55	10.02
كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم)	58.44	50	2.92
فوسفات الصوديوم ، ثنائي القاعدة (نا هبو )	141.95	20	2.84
L - الجلوتامين	146.15	10	1.46

الجدول 1. التحضير EAS - 45 العازلة (1L).

25 ملغ البيوتين XHS في 550 ميكرولتر من DMF	0.1M البيوتين الحل
01:10 التخفيف من البيوتين ث 0.1 / DMF	0.01M البيوتين الحل
1:100 التخفيف من البيوتين ث 0.1 / DMF	0.001M البيوتين الحل

الجدول 2. إعداد الحل البيوتين.

البيوتين التركيز النهائي (ميكرومتر)	4	10	20	50	100	160
كرات الدم الحمراء الأسهم بيليه (ميكرولتر)	10	10	10	10	10	10
1X PBS (ميكرولتر)	179.2	178	176	179	178	176.8
0.1M بورات العازلة (ميكرولتر)	10	10	10	10	10	10
0.01M البيوتين الحل (ميكرولتر)				1	2	3.2
0.001M البيوتين الحل (ميكرولتر)	0.8	2	4

الجدول 3. Biotinylation من كرات الدم الحمراء.

المناقشة

لاستخدام بنجاح وتيرة التصاق مقايسة micropipette ينبغي للمرء أن ينظر في اتخاذ خطوات حاسمة عدة. أولا ، تأكد من أن يسجل التفاعل محددة لنظام مستقبلات يجند من الفائدة. قياسات التحكم غير محدد (راجع الشكل رقم 3 ، 4) ضمان النوعية. من الناحية المثالية ، ينبغي أن تكون احتمالات التصاق غير محدد أدناه 0.05 لجميع فترات وقت الاتصال والحصول على فارق كبير بين احتمالات التصاق محددة وغير محددة عن كل نقطة زمنية. ويمكن استخدام أساليب مختلفة ليغاندس الزوجين على سطح كرات الدم الحمراء. فقد تبين أن طريقة ...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
اسم الكاشف	شركة	كتالوج #	تعليقات
10X PBS	BioWhittaker	17 - 517Q	المخفف بالماء ل1X منزوع الأيونات قبل استخدامها
Vacutainer EDTA	دينار بحريني	366643	كرات الدم الحمراء العزلة
10ML PK100
Histopaque 1077	سيغما الدريخ	10771	كرات الدم الحمراء العزلة
الأدينين	سيغما الدريخ	A2786	EAS - 45 إعداد
مد الجلوكوز (سكر العنب)	سيغما الدريخ	G7528	EAS - 45 إعداد
D - المانيتول	سيغما الدريخ	6360	EAS - 45 إعداد
كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم)	سيغما الدريخ	S7653	EAS - 45 إعداد
فوسفات الصوديوم ، ثنائي القاعدة (نا س & #2082 ؛ هبو ₄)	فيشر العلمية	S374	EAS - 45 إعداد
L - الجلوتامين	سيغما الدريخ	G5763	EAS - 45 إعداد
البيوتين - X - NHS	Calbiochem	203188	كرات الدم الحمراء biotinylation
ثنائي ميثيل الفورماميد (DMF)	الحرارية العلمية	20673	كرات الدم الحمراء biotinylation
بورات العازلة (0.1M)	الإلكترون المجهري العلوم	11455-90	كرات الدم الحمراء biotinylation
Streptavidin	الحرارية العلمية	21125	يجند functionalizing
BSA	سيغما الدريخ	A0336	يجند functionalizing
Quantibrite الخرز PE	العلوم البيولوجية دينار بحريني	340495	كثافة الكمي
تدفق عداد الكريات	نظم دينار بحريني Immunocytometry	دينار بحريني LSR الثاني	كثافة تشيوانtification
الأنبوبة الشعرية 0.7 - 1.0mm × 30 "	كيمبل شركة زجاج	46485-1	سحب Micropipette
الزيوت المعدنية	فيشر العلمية	BP2629 - 1	غرفة التجميع
مجهر غطاء زجاج	فيشر العلمية	12-544 - G	غرفة التجميع
PE - α الإنسان CD11a استنساخ مرحبا 111	eBioscience	12-0119-71	كاشف للFig.1
PE مكافحة CD54 الإنسان	eBioscience	12-0549	كاشف للFig.1
الماوس IgG1 Isotype التحكم PE	eBioscience	12-4714	كاشف للFig.1
الهيدروليكية micromanipulator	Narishige	MO - 303	Micropipette النظام
مناور الميكانيكية	نيوبورت	461 م ، XYZ ، SM - 13 ، DM - 13	Micropipette النظام
كهرضغطية مترجم	Physik الرفيعة Instrumente	P - 840	Micropipette النظام
ابفيو (LabVIEW)	الصكوك الوطنية	الإصدار 8.6	Micropipette النظام
دق متنها	الصكوك الوطنية	USB - 6008	Micropipette النظام
الجدول البصرية	نظم حركية	5200 سلسلة	Micropipette النظام