هذا البروتوكول الفيديو يشرح طريقة جديدة لتوليد وتنقية لاحق من الخلايا العصبية السلف من مصدر متجدد للخلايا الجذعية العصبية (NSCs) على أساس (الحبوبية حجم والداخلية) والخصائص الجسدية فلوري باستخدام تكنولوجيا تدفق الخلوي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الفحص Neuroblast: والفحص للانشاء وإثراء خلايا متعلق بالخلايا العصبية السلف من التفريق العصبية الجذعية آله الخلية باستخدام التدفق الخلوي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يمكن عزل الخلايا الجذعية العصبية (NSCs)، وتوسعت في نطاق واسع، وذلك باستخدام الفحص neurosphere ومتباينة إلى ثلاثة أنواع رئيسية من خلايا الجهاز العصبي المركزي (CNS)، وهي الخلايا النجمية، oligodendrocytes والخلايا العصبية. هذه الخصائص تجعل الجذعية العصبية والخلايا الاولية مصدرا قيما قابلة للتجديد الخلايا للدراسات في المختبر مثل فحص المخدرات، neurotoxicology والكهربية، وكذلك لعلاج استبدال الخلية في العديد من الأمراض العصبية. في الممارسة العملية، ومع ذلك، عدم تجانس ذرية مجلس الأمن القومي، وإنتاج منخفض من الخلايا العصبية وoligodendrocytes، وغلبة تمايز الخلايا النجمية بعد تحد تطبيقاتها السريرية. هنا، نحن تصف منهجية جديدة لتنقية جيل لاحق من الخلايا العصبية وغير ناضج من ذرية NSC الفئران باستخدام مضان الفرز الخلية تفعيلها (FACS) التكنولوجيا. باستخدام هذه المنهجية، يمكن التوصل الى التخصيب الخلية العصبية سلف سكان خفة دمالحوت أي نجمية ملحوظ وبحسن نية تلوث مجلس الأمن القومي. الإجراء يشمل التفريق بين ذرية معزولة وتوسيع مجلس الأمن القومي من eminences الماوس E14 العقدية باستخدام مقايسة neurosphere، تليها العزلة وإثراء غير ناضج الخلايا العصبية على أساس خصائصها الفيزيائية (الحجم والتعقيد الداخلية) وفلوري باستخدام تكنولوجيا تدفق الخلوي. وعموما، يستغرق 5-7 أيام لتوليد neurospheres و 6-8 أيام في التفريق NSC ذرية وعزل عالي النقاء الخلايا العصبية غير ناضج.
البروتوكول
1. مجموعة أساسية حتى قبل الشروع في زراعة الخلايا
- يتم خلط NeuroCult NSC متوسطة القاعدية وNeuroCult ملاحق مجلس الأمن القومي انتشار الأسلحة النووية في نسبة 9:1، على التوالي، إلى جعل مجلس الأمن القومي الشامل المتوسطة.
- ويتم استخدام المياه 37 درجة مئوية حمام في عملية الاحماء في المتوسط.
- يتم إذابة كمية مناسبة من حرارة المعطل مصل العجل الجنين (FCS).
- مخزنة كمية مناسبة من حلول المخزون عامل النمو بما ف....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
قد القدرة على عزل تعريف السكان الخلايا العصبية (العصبونات، أي الخلايا النجمية وoligodendrocytes) حل بعض العقبات المرتبطة التطبيق السريري من الخلايا الجذعية العصبية (NSCs). الأول، أنه يساعدنا على وصف كامل للسكان بدءا من الخلايا المانحة. الثانية، لأنها تتيح لنا استخدام نوع خلية معينة أو مزيج من أنواع مختلفة من الخلايا مع نسبة محددة، وتبعا لطبيعة أو مرحلة من مراحل المرض. وأخيرا، يمكن استخدام التخصيب قبل متباينة أسلاف الخلايا العصبية بشكل كبير تخفيض الانتشار غير المنظم ممكن، وتشكيل ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من خلال تمويل من مؤسسة Overstreet.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| اسم كاشف | نوع | شركة | فهرس العدد | تعليقات |
| NeuroCult NSC متوسطة بصل | متوسط | وقف سيل تكنولوجيز | 05700 | |
| NeuroCult NSC ملاحق انتشار الأسلحة النووية | متوسط الملحق | وقف سيل تكنولوجيز | 05701 | |
| 0.05٪ التربسين-EDTA | الكاشف | Gibco | 25300-062 | |
| فول الصويا مثبط التربسين | الكاشف | سيغما | T6522 | |
| القلم / بكتيريا | الكاشف | Gibco | 15140-122 | |
| * MEM | الكاشف | Gibco | 41500-018 | HEM مكون |
| * HEPES | الكاشف | سيغما | H4034 | HEM مكون |
| * الماء المقطر | الكاشف | Gibco | 15230-147 | |
| خلية مصفاة | غربال | دينار بحريني الصقر | 352340 | |
| T25 قارورة | ثقافة وير | Nalge نونك الدولية | 136196 | |
| T80 قارورة | ثقافة وير | Nalge نونك الدولية | 178905 | |
| 15 مل من أنابيب | ثقافة وير | دينار بحريني الصقر | 352096 | |
| 50 مل من أنابيب | ثقافة وير | دينار بحريني الصقر | 352070 | |
| EGF | عامل النمو | R & D | 2028-EG | |
| ب. جمعية جيل المستقبل | عامل النمو | R & D | 3139-FB | |
| الهيبارين | عامل النمو | سيغما | H4784 | أعيد في برنامج تلفزيوني |
| مكافحة PSA-NCAM-PE | الجسم المضاد | Miltenyi بيوتيك | 130-093-274 | |
| PE-مترافق الماوس IgG1 | Isotype سيطرة الجسم المضاد | دينار بحريني Pharminogen | 556029 | |
| الهيبارين | عامل النمو | سيغما | H4784 | أعيد في برنامج تلفزيوني |
| HrBMP-4 | عامل النمو | R & D | 314-BP-010 | |
| بولي-L-Ornitهايني | الكاشف | سيغما | P4957 | |
| الجنين مصل العجل | متوسط الملحق | Gibco | 10099-141 | |
| GFAP | الجسم المضاد | DAKO | Z0334 | |
| B-III تويولين | الجسم المضاد | Promega | G7121 |
* لجعل HEM، مزيج 1 × علبة L 10 من MEM و 160 مل من HEPES 1M وتحقيق وحدة التخزين إلى 8.75 لتر باستخدام الماء المقطر. تعيين PH النهائي إلى 7.4 وتخزينه في درجة مئوية 4
المراجع
- Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay. J. Vis. Exp. (45), e2393(2010).
- Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. Establishing Embryonic Mouse....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
