الكمية التصوير من النسب المحددة اشارة مستقبلات بوساطة الرقم تشبه في وحيدات والخلايا الجذعية من عينات صغيرة من دم الإنسان

Summary

وصفنا استخدام التكنولوجيا ImageStream ( www.amnis.com)، والذي يجمع بين كمية التدفق الخلوي في وقت واحد مع عالية الدقة التصوير الرقمي، لتحديد الآليات الخلوية لخلايا المناعة الأولية من الأفواج المريض واضحة المعالم. دراستنا توفر نموذجا للتحقيقات لتحديد نسب متعدية الاستجابات الخلوية محددة في عينات صغيرة من الأفواج الموضوع.

Abstract

الاختلافات الفردية في الحالة المناعية تحديد الردود على العدوى والمساهمة في شدة المرض والنتيجة. ويرتبط الشيخوخة مع زيادة الحساسية للالتهابات الفيروسية والبكتيرية وانخفاض القدرة على الاستجابة للقاحات مع انخفاض الموثقة توثيقا جيدا في الخلطية فضلا عن الخلية التي تتوسط فيها ^1،2 الاستجابات المناعية. لقد قمنا بتقييم مؤخرا من آثار الشيخوخة على الرقم مثل مستقبلات (TLRs)، والمكونات الرئيسية للنظام المناعة الفطرية التي تكشف عن العدوى الميكروبية والزناد دفاع المضيف مضادات الميكروبات ردود ^3. في لفيف كبير من الجهات المانحة البشرية الصحية، ونحن أظهرت أن حيدات الدم المحيطي من كبار السن قد انخفضت التعبير وظيفة TLRs معينة ⁽⁴⁾ ومستويات مماثلة TLR انخفاض والاستجابات يشير في الخلايا الجذعية (DCS)، مستضد تقديم الخلايا التي تقوم بدور محوري في الربط بين الحصانة الفطرية والتكيفية ^5. لقد أظهرنا dysregulation من TLR3 في الضامة 1د انخفاض إنتاج الإنترفيرون من قبل البلدان النامية من الجهات المانحة المسنين في استجابة للإصابة بعدوى فيروس غرب النيل ^6،7.

قصوى في فهمنا للتشيخ مناعي والتدخل العلاجي هو فهم مفصل لأنواع معينة من الخلايا الاستجابة وآلية (ق) من نقل الإشارة. لقد تقدمت الدراسات التقليدية من الاستجابات المناعية من خلال التصوير من الخلايا الأولية وعلامات الخلية المسح من قبل نظام مراقبة الأصول الميدانية أو طخة مناعية فهمنا بشكل كبير، ومع ذلك، وتقتصر هذه الدراسات بشكل عام من الناحية الفنية من خلال حجم عينة صغيرة المتاحة من المرضى وعدم القدرة على إجراء تقنيات مختبرية معقدة على عدة الإنسان العينات. ImageStream يجمع كمية التدفق الخلوي في وقت واحد مع عالية الدقة التصوير الرقمي، وبالتالي يسهل تحقيق في السكان الخلية متعددة متزامنة لالتقاط كفاءة قابلية المريض. نحن هنا لشرح استخدام ImageStream في البلدان النامية لتقييم TLR7 / 8تفعيل بوساطة الزيادات في الفسفرة وإزفاء النووية عامل النسخ مفتاح، NF-κB، الذي يبدأ النسخ من الجينات العديدة التي تعتبر بالغة الأهمية بالنسبة الاستجابات المناعية ^8. باستخدام هذه التكنولوجيا، ونحن كما أظهرت مؤخرا تغيير غير المعترف بها من قبل من TLR5 إشارات والمسار NF-κB في حيدات من أقدم الجهات المانحة التي قد تسهم في الاستجابة المناعية المعدلة في الشيخوخة ^9.

Protocol

1. العزلة وتنشيط الخلايا المناعية

1. الحصول على 10-50 مل من الدم heparinized متطوعين أصحاء بعد الموافقة المسبقة عن كتابي في إطار المبادئ التوجيهية للمجلس مراجعة المؤسسية المحلية. يجب أن لدراسات الشيخوخة أو المرض يمكن المرضية والاستبعاد ومعايير الاشتمال لكل متطوع أو المريض تحدد بشكل واضح.
2. عزل خلايا الدم المحيطية وحيدات النوى (PBMCs) باستخدام أنابيب لجنة مناهضة التعذيب أو Ficoll Paque زائد وفقا لتعليمات الشركة المصنعة (شركة جنرال الكتريك للرعاية الصحية، ونيو جيرسي) وإجراء التجارب في يوم من العز....

Discussion

الخطوات الحاسمة في استخدام ImageStream للدراسات متعدية هي اختيار مجموعات المقارنة ذات الصلة، والتحسين والتحقق من نوعية الأجسام المضادة. والفروق بين الجماعات موضوع في الهدف المسمى يكون واضحا من خلال رسوم بيانية وصور الخلية. بالاشتراك مع تحليل دقيق للتغيرات في مستقبلات ذات الصلة، ومسارات إشارات، وهذه البيانات تقدم معلومات قيمة حول الآليات التي تكمن وراء dysregulation المناعي في الأفواج المتخصصة. وستقتصر هذه التقنية التي توفر من الاجسام المضادة المحددة للتقارب كاف للأهداف ذات الصلة. .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
اسم كاشف	شركة	فهرس العدد
Ficoll-Paque زائد	جنرال إلكتريك للرعاية الصحية	17-1440-03
R848	Invivogen	tlrl-r848
لامتصاص العرق (16٪)	علوم المجهر الإلكتروني	15710
دينار بحريني بيرم / اغسل	العلوم البيولوجية دينار بحريني	554723
CD14-PE	eBioscience	12-0149-41
CD4-PacBlue	دينار بحريني Pharmingen	68436
كوكتيل النسب 1 (لين 1)، FITC	العلوم البيولوجية دينار بحريني	340546
CD11c-PE	العلوم البيولوجية دينار بحريني	347637
CD123-PE	العلوم البيولوجية دينار بحريني	340545
أرنب المضادة للNF-κB (P65)	سانتا كروز	SC-372
Alexa647 F ('أ ب) 2 الماعز المضادة للأرنب مفتش	إينفيتروجن	A21246
دابي	إينفيتروجن	D21490
ImageStream X	Amnis

خلية نوع	FITC	PE	اليكسا 647	PacBlue
الوحيدات		CD14	NF-κB (P65)
حركة التغيير الديمقراطي	Lin1	CD11c	NF-κB (P65)	CD4
PDC	Lin1	CD123	NF-κB (P65)	CD4