1. إعداد الصوف الزجاجي
- قبل وبعد اتخاذ كل دفعة من المرشحات، وتعقيم منطقة العمل مع حل التبييض 10٪.
- وضعت على قفازات وثوب. تعقيم دلو عن طريق جهاز الأوتوكليف في 121 درجة مئوية و 15 رطل ما لا يقل عن 20 دقيقة. وضع الصوف الزجاجي في وعاء معقم.
- تشبع الصوف الزجاجي بالماء التناضح العكسي والسماح للنقع لمدة 15 دقيقة.
- استنزاف المياه التناضح العكسي من دلو.
- تشبع الصوف الزجاجي مع حمض الهيدروكلوريك M (1) واسمحوا نقع لمدة 15 دقيقة.
- استنزاف 1 M حمض الهيدروكلوريك من دلو.
- شطف الصوف الزجاجي بالماء التناضح العكسي.
- مزيج دقيق.
- التحقق من الرقم الهيدروجيني باستخدام ورقة الأس الهيدروجيني وتكرار شطف المياه التناضح العكسي إلى أن يتم تحقيق محايد الرقم الهيدروجيني.
- صب قبالة المياه شطف.
- تشبع الصوف الزجاجي مع هيدروكسيد الصوديوم 1 م والسماح للنقع لمدة 15 دقيقة.
- استنزاف 1 م هيدروكسيد الصوديوم من دلو.
- REPEAT والتناضح العكسي شطف حتى يتم التوصل إلى محايد الرقم الهيدروجيني.
- صب قبالة المياه شطف.
- بدلا من دلو، ويمكن بناؤها لغسيل الصوف الزجاجي، والتي تشبه في تصميمها لغسالة ماصة الزجاج (الشكل 1).
- تغطية الصوف الزجاجي تماما مع الفوسفات معقم مخزنة المالحة (PBS) إلى تعديل درجة الحموضة 6.8.
- استخدام المعدة الصوف الزجاجي مباشرة أو مخزن في 4 درجات مئوية. يمكن تخزينه لمدة تصل الى أسبوعين. قبل استخدام، للتأكد من درجة حموضة محايدة لأنها سوف ترتفع مع مرور الوقت. إذا كان الرقم الهيدروجيني ليست محايدة، مع الفوسفات عقيمة إعادة شطف مخزنة المالحة (الرقم الهيدروجيني 6.8).
2. تجميع تصفية الصوف الزجاجي
- حفر حفرة 11/16 بوصة في مباراة دولية بولي كلوريد الفينيل والمواضيع الصنبور بحيث يمكن ثمل والنايلون محول ذكر التجهيزات في مباراة دولية. هذه الخطوة كانت ضرورية فقط من أجل انعقاد الجمعية العمومية الأولى. بعد ذلك، يمكن استخدام أغطية لسنوات. تطبق تفلونالشريط إلى المواضيع التجهيزات النايلون والمسمار في مباراة دولية.
- حزمة من الأنابيب البلاستيكية مع قطع صغيرة من الصوف الزجاجي. استخدام المكبس المعدني، مثل سيارة صمام محرك، إلى حزمة ضيقة. التعبئة والتغليف لا يتطلب قوة كبيرة. حزمة ضيقة بما يكفي بحيث الصوف الزجاجي يبقى في مكان وقنوات لا تشكل لا. ومع ذلك، لا حزمة باحكام حتى الماء لا يمكن أن تتدفق من خلال مصفاة. عندما معبأة بشكل مناسب، يجب أن معدل التدفق من 4 إلى 5 لترات في الدقيقة الواحدة يمكن تحقيقه عندما يتم إرفاق مرشح لصنابير المياه مع الضغوط بين 40-60 رطل. لحجم الأنابيب البلاستيكية المحددة في هذا البروتوكول، ما يقرب من 85 غراما يغسل ويستعمل الصوف الزجاجي معبأة في الأنابيب. الفارغة والأنابيب البلاستيكية الفارغة على توازن أعلى التحميل وحزمة مع الصوف الزجاجي غسلها حتى كتلة الأنابيب يزيد 85 غراما.
- إدراج شبكة البولي بروبلين في مباراة دولية PVC مع ذكر التجهيزات النايلون محول المرفقة.
- تطبق تفلون الشريط إلى أجزاء مترابطة من الأنابيب البلاستيكية.
- برغي في مباراة دولية PVC إلى ع خبورصة البترول الدولية وتسمية واحدة نهاية مرشح تدفق والطرف الآخر على تدفق. وهذا هو المهم في وقت لاحق لاتخاذ الخطوة شطف. هو المسمى الذي تدفق نهاية لا يهم.
- يميل دفع 60 مل من الفوسفات معقم مخزنة المالحة (الرقم الهيدروجيني = 6.8) في التصفية باستخدام قسطرة حقنة. وسوف تزيد يخرج الطرف الآخر.
- لف تنتهي بشكل وثيق مع Parafilm لتجنب تسرب. ويمكن تخزين مرشحات تصل إلى 30 يوما في 4 درجات مئوية.
3. أخذ العينات
- تعقيم الأنابيب المستخدمة لأخذ العينات بواسطة إعادة تدوير أو تخبط العناصر لمدة 30 دقيقة في NaClO 0.525٪ (أي حل 10٪ من التبييض المنزلي قياسي). اتبع هذا من خلال تجفيف محلول هيبوكلوريت وتحييد مع ثيوسلفات الصوديوم 0.05٪، الذي أدلى به بإضافة 25 مل من مخزون مائي 2٪ صوديوم ثيوسلفات حل للتر واحد من المياه التناضح العكسي.
- لعينة المياه مع الرقم الهيدروجيني أكبر من 7.5، وضبط درجة الحموضة إلى ما بين 6.5 و 7.0 مع حمض الهيدروكلوريك. ويمكن تركيز حمض الهيدروكلوريك وتتراوح من 0.25M إلى 1 ليتر أربعة M. 0.5 متر حمض الهيدروكلوريك عموما كافية لعينات 800 2 لتر، اعتمادا على الرقم الماء المحيطة وقدرة التخزين المؤقت. حقن حمض الهيدروكلوريك أثناء أخذ العينات باستخدام مضخة تمعجية أو بخاخ (الشكل 2). ضبط سرعة المضخة أو بخاخ الافتتاحية لتحقيق الهدف الرقم الهيدروجيني. قياس درجة الحموضة في العينة منفذ خط باستخدام مقياس درجة الحموضة المجال.
- استخدام prefilter إذا قباقيب الصوف الزجاجي مرشح من المياه مع ارتفاع درجة التعكر. (المواصفات لprefilter والسكن فيها هي في قائمة المواد على الانترنت.) لأن يمكن تركيبها مسببات الأمراض إلى جزيئات محاصرين من قبل prefilter يجب مزال أنه جنبا إلى جنب مع مرشح الصوف الزجاجي (انظر أدناه).
- ضبط معدل تدفق إلى ما بين 2 و 4 لترات / دقيقة. حجم العينة النموذجية هي ما بين 200 و 1500 لتر.
- قطع مرشح الصوف الزجاجي، ومخزن في حقيبة بلاستيكية معقمة في 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 48 ساعة.
4. شطف
- لصق الفلتر الصوف الزجاجي الى حلقةنقف مع نهاية تدفق عينة نحو الانخفاض في زجاجة البولي بروبلين. أزل عكس اتجاه تدفق العينة.
- دفع 80 مل من مستخلص عقيمة لحوم البقر 3٪ في جليكاين 0.05 M مع الرقم الهيدروجيني من 9.5 إلى التصفية.
- انتظر 15 دقيقة.
- دفع آخر مل 80 من معقم مستخلص لحم البقر 3٪ في جليكاين M 0.05 مع الرقم الهيدروجيني من 9.5 إلى التصفية.
- دفع الهواء شامل للمرشح حتى رغوة يخرج من مدخل مرشح.
- ضبط درجة الحموضة إلى شطافة بين 7.0 و 7.5 مع حمض الهيدروكلوريك 1 م.
- شطافة مخزن في 4 درجات مئوية لتصل إلى 24 ساعة أو عند -20 درجة مئوية لفترات أطول من الوقت.
- أزل من prefilter إذا تم استخدام واحد. فك الجزء العلوي من خرطوشة الإسكان وتصب كل المياه قبالة المتبقية داخل السكن في حين الضغط على prefilter في مكان بالأيدي بعد ارتداء القفازات المعقمة.
- إزالة prefilter من خرطوشة الإسكان، وتنزلق قبل ان تتحول الى 15 "× 6" حقيبة الرمز البريدي قفل.
- صب 200 مل من مستخلص عقيمة لحوم البقر 3٪ في ز 0.05 مlycine مع الرقم الهيدروجيني من 9.5 في كيس وختم بشكل آمن مع قفل الرمز البريدي.
- قلب لprefilter أكياس عدة مرات لضمان كامل سطح يأتي في اتصال مع استخراج لحوم البقر.
- انتظر 15 دقيقة، وأحيانا قلب تدليك prefilter أكياس.
- فتح الرمز البريدي قفل. قبضة الكيس حول prefilter بإحكام للضغط على لحوم البقر وانتزاع أكبر قدر ممكن وسحب prefilter خارج بالأيدي بعد ارتداء القفازات المعقمة،.
- صب شطافة مستخلص لحم البقر في زجاجة البولي بروبلين.
- ضبط درجة الحموضة إلى شطافة بين 7.0 و 7.5 مع حمض الهيدروكلوريك 1M.
- شطافة مخزن في 4 درجات مئوية لتصل إلى 24 ساعة أو عند -20 درجة مئوية لفترات أطول من الوقت. ويمكن للشطافة prefilter تحليلها بشكل منفصل عن مسببات الأمراض أو جنبا إلى جنب مع مرشح شطافة زجاج والصوف.
5. ممثل النتائج
| الممرض | مستوى المياه العكرة (NTU) 1 | مبلغ مصنف / لتر ب، ج، د | استرداد٪ ± 1 SD | تجارب عدد المستقلة |
| المعوي، فيروس شلل الأطفال سابين الثالث | 0.5 | 500 | 81٪ ± 11 | 7 |
| الأمعاءفيروس شلل الأطفال سابين-III | 0.5 | 5000 | 67٪ ± 12 | 8 |
| المعوي، فيروس شلل الأطفال سابين الثالث | 215 | 500 | 59٪ ± 32 | 7 |
| المعوي، فيروس شلل الأطفال سابين الثالث | 215 | 5000 | 38٪ ± 22 | 6 |
| المعوي، فيروس شلل الأطفال سابين الثالث | 447 | 500 | 56٪ ± 18 | 8 |
| المعوي، فيروس شلل الأطفال سابين الثالث | 447 | 5000 | 63٪ ± 37 | 8 |
| الكريبتوسبوريديوم parvum | 0.5 | 5 | 38٪ ± 14 | 7 |
| الكريبتوسبوريديوم parvum | 0.5 | 50 | 53٪ ± 19 | 8 |
| بكاءptosporidium parvum | 215 | 5 | 40٪ ± 16 | 7 |
| الكريبتوسبوريديوم parvum | 215 | 50 | 30٪ ± 6 | 6 |
| الكريبتوسبوريديوم parvum | 447 | 5 | 33٪ ± 13 | 8 |
| الكريبتوسبوريديوم parvum | 447 | 50 | 28٪ ± 11 | 8 |
| السالمونيلا الملهبة لل | 0.5 | 5 | 29٪ ± 24 | 7 |
| السالمونيلا الملهبة لل | 0.5 | 500 | 56٪ ± 16 | 8 |
| السالمونيلا الملهبة لل | 215 | 5 | 32٪ ± 24 | 7 |
| السالمونيلا الملهبة لل | 215 | 500 | 34٪ ± 11 | 6 |
| السالمونيلا الملهبة لل | 447 | 5 | 34٪ ± 18 | 8 |
| السالمونيلا الملهبة لل | 447 | 500 | 31٪ ± 24 | 8 |
- Nephelometric التعكر وحدة
- الفيروسات المعوية تعداد بواسطة qPCR كما نسخ الجيني / L
- جيم parvum تعداد بواسطة المناعي مثل بيض التوكسوبلازما
- S. الملهبة للتعداد بواسطة الثقافة بوصفها مستعمرة تشكيل وحدات-
جدول الصوف الزجاجي 1. مع تركيز turbidities المياه متفاوتة وكثافة العوامل المسببة للأمراض.
| الممرض | عينة مياه الدولة | مبلغ مصنف / L 1 | ٪ ريكو جدا |
| أنفلونزا الطيور H5N2 | Sundi بحيرة، مرسى بورو | 2500 | 42.9٪ |
| أنفلونزا الطيور H5N2 | مينتو شقق، فيربانكس نورث ستار بورو | 2500 | 36.7٪ |
| أنفلونزا الطيور H5N2 | تعدية البضائع وادي، مرسى بورو | 2500 | 7.8٪ |
| أنفلونزا الطيور H5N2 | الخزاف مارش، مرسى بورو | 2500 | 41.5٪ |
| أنفلونزا الطيور H5N2 | بحيرة الصفصاف، يوكون، Koyukuk بورو | 2500 | 15.5٪ |
- تقاس qPCR كما نسخ الجيني / L
جدول الصوف الزجاجي 2. تركيز من فيروس انفلونزا الطيور باستخدام مياه من خمسة مواقع في ولاية ألاسكا.
les/ftp_upload/3930/3930fig1.jpg "ALT =" الشكل 1 "/>
الشكل 1. التنظيمي للغسيل الصوف الزجاجي. ويمكن استخدام هذا بدلا من دلو، وتوفير الوقت من الشطف. هذا المفهوم هو مشابه للزجاج غسالة ماصة.

الرقم الصوف الزجاجي 2. الترشيح مع حقن حمض بواسطة مضخة تمعجية. لاحظ "T" موصل حيث يدخل أنبوب مضخة حامض في خط عينة بين حنفية الماء والزجاج مرشح الصوف. ضبط الأس الهيدروجيني هو ضروري فقط إذا كان الماء عينات لديه درجة الحموضة> 7.5.
مرشحات الصوف الزجاجي فعالة في تركيز الجراثيم من المياه مع مجموعة واسعة من مستويات العكارة وكثافة الممرض (الجدول 1). لاختبار هذا، كانت مختلطة 20 لترا نزع الكلور منه ماء الصنبور مع المجففة الطمي التربة الطميية (0، 1.27، 2.75 أو جرام / لتر) لتحقيق المستوى المطلوب من التعكر ومن ثم بذرت مع مسببات الأمراض بكثافات مختلفة. الماءتم تمرير من خلال زجاج فلتر الصوف، وتعداد الجراثيم المركزة في شطافة، وهذه القيمة هي البسط في المئة حساب الانتعاش. تم تحديد كمية مسببات الأمراض المصنفة في الماء، وهذا هو، ومقام في المئة حساب الانتعاش، من خلال بذر أول مسببات الأمراض إلى شطافة سلبي تعداد ثم العوامل الممرضة. أعدت شطافة سلبي من قبل تمرير غير المصنف 20 عينة لتر من خلال مرشح ويبلغ حجمه. قياس مسببات الأمراض المصنفة في شطافة سلبية يتجنب الاختلافات في تعداد العوامل المسببة للأمراض التي يمكن أن تنجم عن الاختلافات مصفوفة التي أنشأتها زجاج فلتر الصوف. ويناقش أهمية هذه الخطوة عندما قياس مسببات الأمراض التي qPCR في Lambertini وآخرون. 3. وتركزت A 20 لتر عينة سيطرة السلبية عن طريق الترشيح الصوف الزجاجي لتحديد ما لم يكن هناك مسببات الأمراض الحالية الأصلية التي يمكن أن يتغلب على حساب انتعاش في المئة. A 10 الاسمي مسام ميكرون حجم prefilter ثتستخدم عندما يكون مستوى العكارة وكان ≥ 215 NTU.
وكان فيروس شلل الأطفال من قبل كميا في الوقت الحقيقي باستخدام qPCR تركيز الثانوية وإجراءات استخراج حامض النووي والاشعال والتحقيق وصفها في Lambertini وآخرون. 3. الكريبتوسبوريديوم parvum وكميا في حجم عينة مركزة النهائي (FCSV) التي تم إنشاؤها بواسطة الإجراء تركيز الثانوية للفيروس شلل الأطفال . وكان بيض التوكسوبلازما تصور من قبل المناعي (MeriFluor الكريبتوسبوريديوم والجيارديات عدة كشفها، ميريديان علوم الحياة، وشركة، سينسيناتي، أوهايو). وكميا السالمونيلا الملهبة في FCSV بواسطة طلاء على أجار XLD (Remel، Lenexa، KS) والفرز المكونة للمستعمرة، وحدة.
مرشحات الصوف الزجاجي فعالة في التركيز فيروسات أنفلونزا الطيور (الجدول 2). وكان المصنف منخفض فيروس تسببها أنفلونزا الطيور (H5N2) في المياه من عدة مواقع في ولاية ألاسكا والانتعاش في المئة محسوبة على النحو المبين اعلاهه. وأجريت تركيز الثانوية والإجراءات الحمض النووي بالنسبة لفيروس شلل الأطفال، وكان كميا الفيروس عن طريق qPCR باستخدام الاشعال والتحقيق وصفها في Spackman وآخرون 4.