Method Article

الفشوت القوارض تقييم النسخ المتماثل وظيفة خلايا بيتا في Adenovirally-transduced المعزولة

DOI:

10.3791/4080

⸱

June 25th, 2012

 ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, Indiana University School of Medicine, 2Department of Cellular & Integrative Physiology, Indiana University School of Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا البروتوكول يسمح احد لتحديد العوامل التي تعدل وظيفي كتلة خلايا بيتا للعثور على الأهداف العلاجية المحتملة لعلاج مرض السكري. بروتوكول يتكون من طريقة مبسطة لتقييم تكرار جزيرة وظيفة خلايا بيتا في جزر معزولة في اعقاب الفئران التلاعب في الجينات مع الفيروسات الغدية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويتم التحكم في المقام الأول توازن الجلوكوز من قبل الغدد الصماء هرمونات الانسولين والجلوكاجون، يفرز من خلايا بيتا في البنكرياس، وألفا، على التوالي. يتم تحديد وظيفي كتلة خلايا بيتا بيتا من كتلة الخلية التشريحية، فضلا عن قدرة خلايا بيتا للرد على حمل المغذيات. وفقدان وظيفي بيتا كتلة الخلية المركزية على كل من الأشكال الرئيسية لداء السكري 1-3. في حين تراجع وظيفي النتائج بيتا كتلة الخلية من هجوم المناعة الذاتية في مرض السكري نوع 1، في مرض السكري من النوع 2، وهذا النقصان يطور من عدم القدرة على حد سواء من خلايا بيتا لإفراز الإنسولين بشكل مناسب، وتدمير خلايا بيتا من كادر من الآليات. وبالتالي، الجهود المبذولة لاستعادة وظيفي كتلة خلايا بيتا لها أهمية قصوى لتحسين معاملة وعلاج محتمل لمرض السكري.

هناك جهود جارية لتحديد المسارات الجزيئية التي يمكن استغلالها لتحفيز تكرار وتعزيز وظيفة خلايا بيتا.من الناحية المثالية، فإن الأهداف العلاجية تحسين كل من نمو خلايا بيتا ووظيفتها. ربما أكثر أهمية على الرغم من ذلك هو تحديد ما إذا كانت الاستراتيجية التي تحفز نمو خلايا بيتا يأتي على حساب إضعاف وظيفة خلايا بيتا (مثل مع بعض الجينات المسرطنة)، والعكس بالعكس.

بواسطة التعبير قمع منهجي أو overexpressing من الجينات المستهدفة في الجزر الفئران المعزولة، يمكن للمرء تحديد الأهداف العلاجية المحتملة لزيادة وظيفية بيتا كتلة الخلية 4-6. ويمكن استخدام ناقلات الفيروسة الغدانية للبروتينات overexpress بكفاءة أو ضربة قاضية في الجزر الفئران المعزولة 4،7-15. هنا، نقدم طريقة للتلاعب الجيني باستخدام تنبيغ الفيروسة الغدانية وتقييم تكرار جزيرة وظيفة خلايا بيتا في جزر الفئران المعزولة (الشكل 1). وقد استخدمت هذه الطريقة سابقا لتحديد أهداف جديدة أن تعدل بيتا تكرار خلية أو وظيفة 5،6،8،9،16،17.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الفيروسة الغدانية تنبيغ والتثقيف من الجزر الجرذ

  1. إعداد 6-جيدا لوحة ثقافة غير الأنسجة المغلفة بإضافة 2 مل من وسائل الاعلام (RPMI 1640 وسائل الإعلام التي تحتوي على نسبة الجلوكوز في 8 مم، 10٪ مصل بقري جنيني، والوحدات 50 / البنسلين مل، و 50 ميكروغرام / الستربتومايسين مل) على العدد المطلوب من الآبار. على سبيل المثال، قد يكون تجربة نموذجية تتطلب ثلاثة آبار - واحد في كل لسيطرة أي من الفيروسات، ومكافحة فيروس (على سبيل المثال، في التعبير عن GFP اتش)، والمجموعة التجريبية.
  2. تدفئة لوحة إلى 37 درجة مئ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تأسيس مسارات التي يمكن أن تكون منظم لحفز تكرار وتعزيز وظيفة خلايا بيتا ذات الصلة على حد سواء الأشكال الرئيسية لداء السكري. لأن كتلة خلايا بيتا وظيفي يعتمد على وجود وظيفة الانسولين إفراز الخلايا، وتقييم هذه المحددات لديها في وقت واحد مزاياه. هذا البروتوكول يصف بروتوكول مبسطة لتحديد ما إذا overexpression أو قمع من البروتين يؤدي إلى تغييرات وظيفية في بيتا كتلة الخلايا في المختبر، ومن ثم يمكن اختبار فعالية في الجسم الحي.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل من قبل منحة DK078732 من المعاهد الوطنية للصحة (لPTF).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
اسم كاشف شركة فهرس العدد تعليقات
RPMI 1640 وسائل الاعلام Gibco 11879
البنسلين / الستربتومايسين Gibco 15140
6 كذلك لوحة BD-الصقر 35-1146 غير TC المعالجة
[الميثيل-3 H]-ثيميدين بيركن إلمر NET027Z001MC 1 زارة التجارة والصناعة / مل
الدقيقة أنابيب الطرد المركزي Denville C2170 1.7 مل
كلوريد الصوديوم سيغما 59888
بوكل Acros 42409
KH 2 </ الفرعي> PO 4 Acros 20592
MgSO 4 Acros 41348
CaCl 2 Acros 34961
HEPES سيغما H0887 1 م حل
جيش صرب البوسنة 35٪ سيغما A7979
NaHCO 3 Acros 42427
D-جلوكوز سيغما G8769
TCA فيشر العلمية SA9410-1 10٪ وزن /
هيدروكسيد الصوديوم Acros 12426
التلألؤ عد أنبوب Sarstedt 58،536 7 مل، PP
قبعة التلألؤ أنبوب عد Sarstedt 65،816
ECONO-الآمن كوكتيل عد RPI 111175
الانسولين ريا شركة سيمنز TKIN2
BCA الفحص كيت الحرارية العلمية 23250
معدات
نبذ إيبندورف 5415R
التلألؤ عد رف أنبوب Sarstedt 93.1431.001
السائلة التلألؤ عداد بيركن إلمر ثلاثي كارب 2910TR

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ferrannini, E. beta-Cell function in subjects spanning the range from normal glucose tolerance to overt diabetes: a new analysis. J. Clin. Endocrinol. Metab. 90, 493-500 (2005).
  2. Weyer, C., Bogardus, C., Mott, D. M., Pratley, R. E.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Beta Cell FunctionAdenoviral TransductionIsolated Rat IsletsInsulin Secretion AssayTritiated Thymidine IncorporationGlucose HomeostasisFunctional Beta Cell MassAdenoviral OverexpressionGene Expression ManipulationCell Replication Analysis

Related Articles