مقالة منهجية

بسرعة وكفاءة توليد الخلايا العصبية من الخلايا الجذعية المحفزة الإنسان في تنسيق اللوحة Multititre

DOI:

10.3791/4335

⸱

مارس 5, 2013

 ,  , 
1Max Planck Institute for Molecular Biomedicine, 2Medical Faculty, University of Münster

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بروتوكولات لتمايز الخلايا العصبية من الخلايا الجذعية المحفزة الإنسان (hPSCs) وغالبا ما تكون وقتا طويلا وتتطلب مهارات كبيرة ثقافة الخلية. هنا، تكيفنا صغيرة الداخلي القائم على التمايز جزيء إلى تنسيق وحة multititre، مما يسمح للجيل بسيطة وسريعة، وفعالة من الخلايا العصبية الإنسان في الطريقة التي تسيطر عليها.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

البروتوكولات القائمة لتوليد الخلايا العصبية البشرية من الخلايا الجذعية المحفزة (hPSCs) وغالبا ما تكون مملة في أن تكون إجراءات متعددة الخطوات التي تنطوي على العزل والتوسع في الخلايا العصبية السلائف، قبل التمايز النهائي. بالمقارنة مع هذه النهج تستغرق وقتا طويلا، وجدنا مؤخرا أن تثبيط مجتمعة من ثلاثة مسارات الإشارات، TGFβ/SMAD2، BMP/SMAD1، وجمعية جيل المستقبل / ERK، ويعزز الحث السريع في الأديم الظاهر العصبي من hPSCs، تليها تمايز الخلايا العصبية فوري في وظيفية. هنا، تكيفنا إجراءاتنا إلى تنسيق رواية وحة multititre، لزيادة تعزيز وتكرار لجعلها متوافقة مع منتصف الإنتاجية التطبيقات. وهي تتألف من أربع أيام من تشكيل الأديم الظاهر العصبي في مجالات العائمة (الهيئات مضغي الشكل)، تليها أربعة أيام مزيد من التمايز في الخلايا العصبية في ظل ظروف ملتصقة. معظم الخلايا التي تم الحصول عليها مع هذا البروتوكول ويبدو أن الخلايا العصبية الحسية الثنائي القطب. وعلاوة على ذلك،هذا الإجراء هو ذات كفاءة عالية، لا تتطلب مهارات خاصة الخبراء، ويستند إلى وسيلة بسيطة محددة الصفات كيميائيا مع فعالة من حيث التكلفة جزيئات صغيرة. بسبب هذه الميزات، قد الإجراء بمثابة منصة مفيدة لتحقيق مزيد الفنية وكذلك لخلية القاعدة التي تتطلب فحص الخلايا العصبية الحسية يقترب الإنسان أو الخلايا العصبية من أي نوع.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

hPSCs، تضم الجنين المستمدة من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) والخلايا الجذعية المحفزة التي يسببها (hiPSCs)، هي معنى المحفزة التي يمكن أن تؤدي إلى خلية مختلف الأنساب في المختبر 1-2. وقد استمدت العديد من أنواع الخلايا المتمايزة من hESCs حتى الآن، مما يدعم فكرة أن هذه الخلايا تقديم أدوات قيمة للبحث العلمي والنهج القائم على الفحص الخلية، وتبشر الخلايا المستندة إلى التداوي.

بروتوكولات تمايز الخلايا العصبية لوعادة ما تكون معقدة hESCs ومضيعة للوقت وتعتمد في كثير من الأحيان على مصير عموما لأول حمل العصبية، تليها عزلة دليل من الأسلاف العصبية، والتمايز النهائي لاحقة إلى نوع معين من الخلايا العصبية الفائدة 3-6. في بعض الصدد، هذا التعقيد ليس من المستغرب وحتمية بالنظر إلى أن مثل هذه الدولة من بين الفن بروتوكولات توجيه التمايز التدريجي تميل إلى تقليد التنمية البشرية في وقت مبكر، حركتيح هو في حد ذاته في غاية التعقيد. من ناحية أخرى، قد يكون في جزء تعكس أيضا افتقارنا إلى فهم العمليات الجزيئية الكامنة، مما أدى إلى تمايز البروتوكولات التي لا تزال بعيدة عن الأمثل تماما.

فيما يتعلق بتحويل hPSCs غير متمايزة في الأديم الظاهر العصبي، بيرا وآخرون. وجدت أن قمع BMP / SMAD1/5/8 الإشارات العصبية من تحريض يعزز hESCs 7. وعلاوة على ذلك، فقد تبين من تعطيل SMAD2 / 3 إشارات لتعزيز تشكيل الأديم الظاهر العصبي 8. وبناء عليه، تعطيل الجمع بين هذه المسارات من 2 يميل إلى أن يؤدي إلى تحريض العصبية أكثر كفاءة من hPSCs 4،9. وفي الآونة الأخيرة، وقد أظهرت لنا أن مسار الإشارات الثالث، FGF / ERK، بمثابة كاظمة قوية من أقرب الخطوات التزام عصبي في hESCs. وعلى العكس، القمع المتزامن لجميع المسارات الثلاثة هذه تؤدي إلى شبه متجانسة تحويل hESCs في الأديم الظاهر العصبي معفي الأيام الأربعة فقط 10. بعد ذلك، لوحظ كفاءة عالية التمايز إلى خلايا عصبية طرفية وظيفية في غضون ثمانية أيام. وكانت الخلايا العصبية التي تم الحصول عليها من المرجح أن تكون الخلايا العصبية الحسية في الجهاز العصبي المحيطي، والتي قد تساهم جزئيا في تفسير اشتقاقها السريع 10. ويعتبر وجود عيوب في الصيانة الخلايا العصبية الحسية سببا للاضطرابات بشرية معينة مثل خلل الوظائف المستقلة العائلية 11. لنمذجة هذه الأمراض يعتمد على التكنولوجيا hiPSC 12، لتوصيف وظيفي أخرى، وكذلك لأغراض تطبيق لا تتطلب أي نوع معين من الخلايا العصبية، قد يكون هذا الإجراء التمايز تقديم أساسا مفيدا.

ومع ذلك، أدت استراتيجية التمايز استخدمناها في الأصل تشكيل الهيئات المعنية الجنينية (EBS) من كتل من المستعمرات hESC 10، وهذا في درجة لا بأس به من عدم التجانس فيما يتعلق بأحجام EB، وأيضا ظهرت لتقديم تنازلات الخلايا العصبية في بعض الكفاءة تشكيل مليرة لبنانية خطوط. وعلاوة على ذلك، ونظرا لعدم التجانس في أحجام EB، يبدو أن القدرة على اختبار منهجية آثار عوامل النمو إضافية أو جزيئات صغيرة أثناء وبعد تشكيل الخلايا العصبية ليكون مرتبك بعض الشيء.

في هذا التقرير، وتكييفها ونحن لدينا الإجراء السابق إلى وسيلة الإنتاجية المتوافقة مع تقنية التجميع على أساس أجبروا على توليد EBS بطريقة حجم تسيطر عليها إلى حد كبير، كما هو مبين أيضا في سياقات أخرى 13. وبعد ذلك، EBS ولدت في الخامس على شكل لوحات الآبار 96-جيدا ونقل إلى مرفق منخفضة للغاية على شكل U 96-وحات جيدة، لبدء تشكيل الأديم الظاهر العصبي في التعليق. بعد أربعة أيام، يمكن أن يصفح عن EBS من الخلايا العصبية مما يؤدي إلى التمييز في شفائهم عالية الكفاءة والتجانس. بدلا من ذلك، كانت يوم EBS-4 فصلها إلى خلايا واحد ومطلي من هذا النحو، مما أدى إلى انخفاض الكثافة monolayers من الخلايا العصبية البشرية. وبالتالي النتائج التي تم الحصول عليها حتى الآن متماسكة مع دي مستقل 2خطوط hESC rived، وHuES6 NCL3.

كشرط مسبق، كانت ناجحة تشكيل EB تعتمد بشكل صارم على استخدام البوليمر الاصطناعية، وبولي فينيل الكحول (PVA)، جنبا إلى جنب مع مثبط ROCK Y-27632 المعروفة لتعزيز بقاء hESC 13-14. وتعززت بشكل كبير نتيجة لذلك، تجانس EBS التي تشكلت في 96-V-لوحات مقارنة تشكيل EBS، لأن الحضارات الشامل على أساس تقنيات تقسيم عشوائي. هذا النظام يوفر بالتالي منصة تحسنت بشكل ملحوظ عن تشكيل الأديم الظاهر العصبي في الثقافة التعليق، تليها تشكيل الخلايا العصبية تسيطر عليها في ظل ظروف غاية ملتصقة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. إعداد Matrigel المغلفة لوحات وسائل الإعلام

  1. وقد وجد إعداد لوحات Matrigel Matrigel المغلفة لتكون ركيزة المفضل لمرفق التفرقة EBS وتعزز أيضا ثمرة كفاءة الخلايا العصبية من هذه 10.
    1. تحسن 10 مل من Matrigel بين عشية وضحاها على الجليد.
    2. اليوم التالي، تمييع الهلام مثل Matrigel مع مجلدين من الجليد الباردة DMEM/F-12 وإعداد مأخوذة من 1 مل مل في أنابيب prechilled المخروطية ال 15 التي يمكن تخزينها في -20 درجة تجمد C.
    3. البت شكل لوحة للتمايز الخلايا العصبية. على سبيل المثال، كنقطة انطلاق، نوصي لإجراء الجولة الأولى من تمايز في شكل 12-أيضا. قبل باردة 4 12-وحات جيدة في C. ° 4 حل 1 قسامة من Matrigel المجمدة عن طريق إضافة 9 مل من قبل المبردة DMEM/F-12 تليها pipetting صعودا وهبوطا حتى كل Matrigel prediluted وإذابة والمنحل.
    4. ثمونقل المحتويات إلى أنبوب جديد 50 مل تحتوي على 15 مل من DMEM/F-12 على الجليد (النهائي Matrigel التخفيف: 1:75). ثم، إضافة 0.5 مل من المخفف Matrigel إلى كل بئر من لوحات 12-جيدا قبل المبردة. لوحات التفاف مع Parafilm واسمحوا الوقوف بين عشية وضحاها في RT.
    5. اليوم التالي، نقل إلى لوحات C. ° 4 ويمكن تخزين لوحات مغلفة لعدة أسابيع قبل الاستخدام.
  2. وسائل الإعلام

EB المتوسطة تشكيل (~ 15 مل اللازمة لأداء التمايز في لوحة واحدة 96-جيدا - انظر الجدول (1) ومخطط في الشكل 2):
DMEM/F-12 مع 0.4٪ (PVA)
1X N2
1X B27
0.05٪ BSA
20 نانوغرام / مل FGF2
10 ميكرومتر Y-27632
1X PenStrepGln

متوسطة التمايز (~ 30 مل اللازمة لأداء التمايز في لوحة واحدة 96-حسنا، تليها تشكيل الخلايا العصبية في لوحة واحدة 12-Matrigel المغلفة جيدا، انظر الجدول 1):
DMEM/F-12
1X N2
1X B27
0.05٪ BSA
0.5 ميكرومتر PD0325901
SB431542 ميكرومتر 15
0.5 ميكرومتر Dorsomorphin
1X PenStrepGln

2. اضطر EB تشكيل

  1. تنمو في ظل ظروف hPSCs الخاص المغذية خالية المفضل. نستخدم MEF مكيفة المتوسطة على لوحات 6 Matrigel المغلفة جيدا 15. ومع ذلك، ينبغي لنظم أخرى مثل الثقافة أو تجارية محلية الصنع وسائل الإعلام تعريف العمل أيضا. في وقت بدء تجربة التمايز، يجب أن يكون hPSCs شبه متموجة وبنشاط متزايد.
  2. إزالة المستعمرات ميكانيكيا بشكل عفوي متباينة باستخدام ماصة معقمة تلميح البلاستيك تحت المجهر ستيريو.
  3. غسل المستعمرات غير متمايزة المتبقية باستخدام PBS، وهضم للخلايا التي تحتوي على واحد باستخدام Accutase 1X Y-27632. بيليه الخلايا بواسطة الطرد المركزي واحد في 200 x ج لمدة 2 دقيقة، resuspend في وحدة تخزين صغيرة من تشكيل EB المتوسطة وتحديد عيار الخلايا باستخدام عدادة الكريات.
  4. إضافة إلى قسامة من الخلاياتشكيل EB المتبقية المتوسطة أن يؤدي إلى ما بين 40،000 عيار و 80،000 خلية لكل مل.
  5. باستخدام ماصة الأقنية، نقل 100 ميكرولتر لكل بئر لوحة 96V القاع، مما أدى إلى 8،000 في 4،000 خلايا لكل بئر. تدور بشكل جيد 96-وحة لوحة أجهزة الطرد المركزي في أرجوحة المغادرة في 400 x ج لمدة 1 دقيقة لجمع الخلايا في أسفل الآبار، ونقل إلى الخلية الحاضنة الثقافة. سوف تشكل EBS بين عشية وضحاها، كما هو مبين في الشكل 1.

3. الأديم الظاهر العصبي الحث

  1. اليوم التالي (يوم 0)، وجمع من EBS وحة 96V تحت المجهر ستيريو، ونقل في وحدة تخزين صغيرة في طبق البكتيرية التي تحتوي على 3.5 سم 2 مل من المتوسط ​​التمايز. تستنهض الهمم بلطف طبق لعدة ثوان لغسل EBS.
  2. إضافة 100 ميكرولتر من تمايز المتوسطة لكل بئر من أسفل-U-البالغة الانخفاض المرفقات 96-وحة جيدا. تحت stereomicroscope، EBS نقل كميات صغيرة في طبق الغسيل من 96U في الآبار (واحد لكل EB نحنليرة لبنانية). لوحة 96U مكان في الخلية الحاضنة الثقافة لمدة 4 أيام للسماح بتشكيل الأديم الظاهر العصبي.

4. الخلايا العصبية تشكيل

  1. في يوم 4، إعداد طبق الغسيل كما في الخطوة 3.1 و استبدال بالإضافة إلى ذلك DMEM/F-12 في لوحة قبل تحسنت 12-Matrigel المغلفة جيدا بواسطة متوسطة التمايز (1 مل لكل بئر).
  2. الطلاء من EBS
    1. جمع EBS من لوحة 96U، وغسل هذه البذور على النحو الوارد أعلاه، وبعناية واحدا تلو الآخر في بئر من لوحة 12-Matrigel المغلفة جيدا (حوالي 8 EBS لكل بئر): يجب EBS موزعة بالتساوي داخل الآبار للسماح ثمرة من دون عائق الخلايا العصبية خلال الأيام القليلة المقبلة (انظر "اليوم 5" الصورة في الشكل 2).
    2. قبل نقل الجزء الخلفي لوحة 12-جيدا في الحاضنة، والسماح لEBS إرفاق فضفاضة لحوالي 10 دقيقة في RT. ثم، بعناية نقل 12-وحة جيدا إلى الخلية الحاضنة الثقافة. سوف تنمو الخلايا العصبية الخروج من EBS مطلي بطريقة شعاعي داخل 4 أيام القادمة، كما SHOWN في الشكل 2 ("يوم 8" الصورة على اليمين).

5. الخلايا العصبية وتشكيل Monolayers

  1. كبديل للخطوات النقطة 4)، في يوم 4 من هذا الإجراء، جمع EBS في طبق البكتيرية التي تحتوي على 3.5 سم 2 مل من المتوسط ​​التمايز، ثم نقل EBS في حجم صغير لطبق PBS المحتوية على، ومن ثم إلى طبق آخر يحتوي على Accutase.
  2. السماح لخلايا الهضم واحدة، الطرد المركزي في 200 x ج لمدة 2 دقيقة، resuspend في وحدة تخزين صغيرة من متوسطة التمايز وتحديد عيار الخلايا باستخدام عدادة الكريات. ضبط عيار إلى الخلايا 6 1-2X10 لكل مل باستخدام المتوسطة التمايز (بدون Y-27632).
  3. لوحة الخلايا في مرحلة ما قبل حرارة 12-وحة Matrigel المغلفة جيدا (1 مل لكل بئر)، ونقل إلى الخلية الحاضنة الثقافة. ولوحظ تشكيل الخلايا العصبية كما monolayers بين 7 أيام إلى 8 (الشكل 3C). وتجدر الإشارة، مع ذلك، أن هذا البديل أحادي الطبقة منلم يتم إجراء الأمثل تماما فيما يتعلق بقاء الخلية والركيزة أكثر ملائمة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في تقريرنا السابق، وذلك تمشيا مع العديد من الآخرين، يمكن أن تتولد من EBS hPSCs ببساطة عن طريق replating المجاميع على تقسيم الروتيني للhPSCs في المرفقات أطباق منخفضة 10. هذه النتائج عادة في توزيع واسعة من الأحجام EB الناتجة (الشكل 1C، أعلى). مشكلة أخرى تنتج عن ذلك هو أن تحتفظ في التعليق EBS تميل إلى تجميع مع بعضها البعض، مما يؤدي إلى عدم تجانس أكبر من الأحجام EB. للتحايل على هذه المشاكل، لذلك حاولنا لتوليد EBS من الطلاء hPSCs واحد في المرفقات الآبار منخف...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتستند معظم البروتوكولات التي تنطوي على تمييز تشكيل EB من hPSCs، بما في ذلك إجراء نشرت سابقا لدينا 10، على الخط أو بمساعدة إنزيم حصاد hESCs والمجاميع، الأمر الذي يؤدي حتما إلى عدم التجانس في أحجام EB. هذه الحقيقة يؤدي إلى التباين في كفاءة تمايز مع بعض خطوط الخلايا، مما يجعل من الصعب تحليل منهجي، لا سيما على نطاق والإنتاجية المتوسطة. وعلاوة على ذلك، الدليل هو تشريح كثيفة العمالة والتي في حد ذاته يضر تطويره.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل جمعية ماكس بلانك.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
اسم كاشف شركة كتالوج رقم تعليقات
Matrigel HC بيكتون ديكنسون 354263 انظر النص للحصول على تفاصيل حول التعامل مع
DMEM/F-12 الحياة تكنولوجيز 21331-020
بولي (فينيل الكحول) سيجما 363170 حل عند 0.4٪ في DMEM/F-12 باستخدام الموجات فوق الصوتية بالحمام المائي / تجنب ارتفاع درجة الحرارة / يمكن أن تظل في 4 درجات مئوية لعدة أسابيع
N2 الملحق الحياة تكنولوجيز 17502-048 100X، وتخزين مأخوذة المجمدة
B27 الملحق الحياة تكنولوجيز 12587-010 50X، المخزن كما مأخوذة المجمدة
الأبقار مصل الزلال سيجما A1595 10٪ = 500X، المخزن كما مأخوذة المجمدة
الجلوتامين L-البنسلين / الستربتوميسين PAA P11-013 أو ما يعادلها
FGF2 Peprotech 100-18B حل في 10 ميكروغرام / مل في 0.1٪ BSA / PBS = 1000X، المخزن كما مأخوذة المجمدة
ROCK المانع Y-27632 abcamBiochemicals ASC-129 حل بنسبة 10 ملم في DMSO = مخزن، كما 1000X مأخوذة المجمدة
PBS PAA H15-002 أو ما يعادلها
Accutase PAA L11-007
96-V-أسفل جيدا لوحات نونك 277143
PD0325901 محور عصبي Medchem محور عصبي 1408 حل عند 0.5 ملم في DMSO = مخزن، كما 1000X مأخوذة المجمدة
SB431542 abcamBiochemicals ASC-163 حل في 15 ملم في DMSO = مخزن، كما 1000X مأخوذة المجمدة
Dorsomorphin سانتا كروز SC-200689 حل عند 0.5 ملم في DMSO = مخزن، كما 1000X مأخوذة المجمدة
96-U-أسفل جيدا لوحات المرفقات منخفضة للغاية كورنينج 7007
بيتا-III الأجسام المضادة تويولين (الماوس) سيجما T8660 استخدام في 1:1000
بيتا-III تويولين الأجسام المضادة (ارنب) كوفانس PRB-435P استخدام في 1:2000
BRN3A (POU4F1) الأجسام المضادة سانتا كروز SC-8429 استخدام في 1:500
الجدول 1. </ STRONG> الكواشف محددة والمعدات.

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Thomson, J. A., et al. Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts. Science. 282, 1145-1147 (1998).
  2. Takahashi, K., et al. Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors. Cell. 131, 861-872 (2007).
  3. Koch, P., Opitz, T., Steinbeck, J. A., Ladewig, J., Brustle, O. A rosette-type, self-renewing human ES cell-derived neural stem cell with potential for in vitro instruction and synaptic integration. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 3225-3230 (2009).
  4. Chambers, S. M., et al. Highly efficient neural conversion of human ES and iPS cells by dual inhibition of SMAD signaling. Nat. Biotechnol. 27, 275-280 (2009).
  5. Lee, G., et al. Isolation and directed differentiation of neural crest stem cells derived from human embryonic stem cells. Nat. Biotechnol. 25, 1468-1475 (2007).
  6. Li, X. J., et al. Specification of motoneurons from human embryonic stem cells. Nat. Biotechnol. 23, 215-221 (2005).
  7. Pera, M. F., et al. Regulation of human embryonic stem cell differentiation by BMP-2 and its antagonist noggin. J. Cell Sci. 117, 1269-1280 (2004).
  8. Smith, J. R., et al. Inhibition of Activin/Nodal signaling promotes specification of human embryonic stem cells into neuroectoderm. Dev. Biol. 313, 107-117 (2008).
  9. Greber, B., Lehrach, H., Adjaye, J. Control of early fate decisions in human ES cells by distinct states of TGFbeta pathway activity. Stem Cells Dev. 17, 1065-1077 (2008).
  10. Greber, B., et al. FGF signalling inhibits neural induction in human embryonic stem cells. EMBO J. 30, 4874-4884 (2011).
  11. Anderson, S. L., et al. Familial dysautonomia is caused by mutations of the IKAP gene. Am. J. Hum. Genet. 68, 753-758 (2001).
  12. Lee, G., et al. Modelling pathogenesis and treatment of familial dysautonomia using patient-specific iPSCs. Nature. 461, 402-406 (2009).
  13. Burridge, P. W., et al. Improved human embryonic stem cell embryoid body homogeneity and cardiomyocyte differentiation from a novel V-96 plate aggregation system highlights interline variability. Stem Cells. 25, 929-938 (2007).
  14. Watanabe, K., et al. A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells. Nat. Biotechnol. 25, 681-686 (2007).
  15. Xu, C., et al. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells. Nat. Biotechnol. 19, 971-974 (2001).
  16. Burridge, P. W., et al. A universal system for highly efficient cardiac differentiation of human induced pluripotent stem cells that eliminates interline variability. PLoS One. 6, e18293(2011).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Neuron DifferentiationNeuroectoderm FormationEmbryoid Body FormationSmall Molecule InhibitionMatrigel CoatingImmunofluorescence StainingSensory Neuron MarkersEB Formation Medium

مقالات ذات صلة