وهناك طريقة لتقييم كمي لاستجابة الكيميائي من انواع معينة ايليجانس يوصف. كان يعمل A مؤشر الكيميائي (CI) كوسيلة لتقييم بالضبط الرد من الديدان إلى أهداف معينة، ويكون بمثابة منصة للمقارنة بين سلالات والمركبات من الفائدة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
استخدام العديد من الكائنات الحية الكيميائي للبحث عن مصادر الغذاء، وتجنب المواد الضارة، وتجد زملائه. انواع معينة ايليجانس ديه السلوك الكيميائي للإعجاب.
فرضية وراء اختبار استجابة من الديدان إلى الرائحة هي وضعها في منطقة ومراقبة حركة أثار ردا على الرائحة. حتى مع العديد من المقايسات المتاحة، وتحسين دودة انطلاق الموقع النسبي لكلا من التحكم ومناطق اختبار، مع التقليل من التفاعل من الديدان مع بعضها البعض، مع الحفاظ على حجم عينة كبيرة لا يزال التقدم في العمل 1-10. الطريقة الموضحة هنا يهدف لمعالجة هذه القضايا عن طريق تعديل مقايسة التي وضعتها Bargmann وآخرون. 1. وينقسم طبق بتري إلى أربعة أجزاء، وتتم تسمية اثنين من الأرباع مقابل وضع علامة "اختبار" واثنين من "السيطرة". يتم وضع مخدر في جميع مواقع المراقبة والاختبار. يتم وضع الديدان في وسط لوحة مع circlه ملحوظ في جميع أنحاء المنشأ للتأكد من أن الديدان غير متحركة سيتم تجاهل. الاستفادة من وجود نظام أربع رباعي بدلا من واحد أو اثنين 2 1 يزيل التحيز في حركة الديدان، كما هي على مسافة واحدة من اختبار ومراقبة العينات، بغض النظر عن أي جانب من أصل بدأوا. هذا تلتف مشكلة الديدان إجبارهم على السفر من خلال مجموعة من الديدان الأخرى للرد على الرائحة، والتي يمكن أن تؤخر الديدان أو إجبارهم على اتخاذ طريقا غير مباشر، مما أسفر عن تفسير غير صحيح من طريق وجهتهم. يظهر هذا الأسلوب أيضا المزايا العملية من خلال وجود حجم عينة أكبر والسماح للباحث لتشغيل مقايسة غير المراقب ويسجل الديدان مرة واحدة انتهت صلاحية الوقت المحدد.
المقدمة
جناح أول من طور الفحص الكيميائي في عام 1973 5، ومنذ ذلك الحين، بعيدة المدى التطبيقات. بيولوجيا الأعصاب هو حقل واحد التي استفادت من استخدام مجموعة متنوعة من المقايسات الكيميائي. وقد تجلى تكيف حاسة الشم، وهو شكل بسيط من التعلم والذاكرة، في C. ايليجانس باستخدام المقايسات الكيميائي 6. كما تم استخدامها لاظهار ان C. يمكن ايليجانس تطوير الإيثانول التسامح، وهي النتيجة التي يوضح ليس فقط اللدونة السلوكية للديدان، ولكن هذا يدل أيضا على أن الديدان يمكن أن تكون مفيدة جدا في دراسة إدمان الكحول في البشر 3. وقد جرى حتى وضعت فحوصات للتدليل على قدرة C. ايليجانس لتخزين القصير وا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. إعداد / غسل الديدان
- مزامنة الديدان إلى الشباب البالغين 11.
- ماصة 2 مل من بصل S الصعود إلى 5 سم لوحة الانجذاب الكيميائي من نظموا الديدان التي مسحت مجرد حشيش OP50 E. القولونية. إمالة لوحة حسب الحاجة لضمان تغسل الديدان من سطح لوحة في المخزن المؤقت.
- ماصة 1 مل من محلول دودة-S بصل إلى أنبوب microcentrifuge.
- أجهزة الطرد المركزي لمدة 10 ثانية باستخدام PicoFuge في 6،600 دورة في ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
مقارنة البرية من نوع (N2) C. ايليجانس إلى ODR-10 (KY10) متحولة.
كنا ثنائي الأسيتيل، وهي المعروفة C. ايليجانس جاذب كيميائي، لمقارنة الديدان wildtype إلى أن من الطافرة التي تفتقر إلى مستقبلات للثنائي الأسيتيل 1،12. لwildtype (N2) الديدان ارتفع مؤشر الكيميائي 0.100 ± 0.066 إلى الإيثانول، و0.839 ± ،031-،5٪ ثنائي الأسيتيل. كما هو متوقع، ثنائي الأسيتيل يثير استجابة chemoattra.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الكيميائي، على الرغم من أن تسيطر عليها مجموعة معقدة من الآليات العصبية والخلوية، ويمكن بسهولة وبشكل موضوعي كميا باستخدام المقايسات الكيميائي. للحصول على أفضل النتائج من المقايسات، يجب اتخاذ بعض الخطوات الحاسمة. أولا، تنظيم الديدان أمر أساسي في تحقيق نتائج متسقة التجريبية. الديدان في مراحل الحياة المختلفة تتصرف بشكل مختلف 13؛ الديدان مرحلة مختلطة بحيث قد تحرف النتائج التجريبية. ثانيا، ضمان جميع E. يتم غسلها القولونية قبالة الديدان أمر بالغ الأهمية، كما .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدينا شيء في الكشف عنها.
شكر وتقدير
نشكر علوم الحياة وكلية الآداب والعلوم في جامعة كوينز لتمويل هذا العمل. كذلك، نشكر مختبر تشين سانج لتوفير الكواشف اللازمة والمعدات والدعم التقني. كما نشكر QGEM 2011، خصوصا توني لمساهمته في المناقشة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| S Basal (- cholesterol) [5.8 g NaCl; 1 M K phosphate buffer, pH 6.0; dH2O إلى 1 لتر.] مجهر | |||
| PicoFuge | Stratagene | 400552 | |
| المجاهر | Leica | ||
| التشريح | Leica | ||
| ماسورة P1000 | Gilson | ||
| ماسورة P10 | Gilson | ||
| 0.5 M Sodium Azide | |||
| Chemotaxis Agar [1.6٪ BBL-agar (Benton-Dickinson) أو 2٪ Difco-agar. مجهر. إضافة 5 ملي مولار من فوسفات البوتاسيوم، pH 6.0؛ 1 ملي مولار من CaCl2، 1 ملي مولار من MgSO4] | |||
| Ethanol/Distilled Water | |||
| مركبات الاختبار (مثل 0.5٪ diacetyl) | |||
| Agar | Bio-Rad | 166-0600 | |
| NH4Cl | Amresco | CA97062-046 | |
| MOPS | VWR | CA12001-120 | |
| NH4OH | BDH | CABDH8641-2 | |
| 0.25٪ Tween 20 | Bio-Rad | 170-6531 |
المراجع
- Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans. Cell. 74, 515-527 (1993).
- Bargmann, C. I., Horvitz, H. R. Chemosensory neurons with overlapping functions direct chemotaxis to multiple chemicals in....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
