مقالة منهجية

الطرق التجريبية لاختبار آثار الببتيد عصبية، ADNF-9، ضد موت الخلايا المبرمج الناجم عن الكحول أثناء فترة الحمل في C57BL / 6 الفئران

DOI:

10.3791/50092

⸱

أبريل 24, 2013

1Department of Pharmacology, College of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, University of Toledo

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التصاميم التجريبية المقترحة هنا التركيز على دراسة آثار التعرض للكحول في موت الخلايا المبرمج وتطبيق الببتيد العصبي أثناء فترة الحمل في دماغ الجنين. يوصف وصفا مفصلا من تربية لجمع العقول الجنين. موصوفة تقنيات لتحديد الخلايا أيضا بالتفصيل.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تصاميم تجريبية للتحقيق في الآثار المترتبة على التعرض للكحول قبل الولادة خلال المراحل الجنينية المبكرة في نمو دماغ الجنين تشكل تحديا. هذا يرجع في معظمه إلى صعوبة تسليخ مجهري من أدمغة الأجنة وباجتزاء من أجل تحديد الخلايا أفكارك التي يسببها التعرض قبل الولادة للكحول. التجارب الموصوفة هنا توفر تقنيات تصور من الفئران تربية لتحديد موت الخلايا في الجنين أنسجة المخ. استخدمت في هذه الدراسة C57BL / 6 الفئران كنموذج حيواني لدراسة التعرض للكحول الجنين ودور الببتيد الغذائية ضد الخلايا الناجم عن الكحول. يتكون تربية نافذة حصيرة 2 ساعة لتحديد المرحلة الدقيقة من عمر الجنين. وقد استخدم الجنين نموذج التعرض للكحول التي أنشئت في هذه الدراسة إلى تحديد آثار التعرض للكحول قبل الولادة في أدمغة الأجنة. وهذا ينطوي على حرية الوصول إلى الكحول أو الزوج التي تغذيها النظم الغذائية السائلة كمصدر وحيد من المواد المغذية للفئران الحوامل.

ق = "jove_content"> موصوفة التقنيات التي تنطوي على تشريح الأجنة وتسليخ مجهري من أدمغة الأجنة بعناية، لأن هذا الأخير يمكن أن يكون تحديا. تسليخ مجهري يتطلب stereomicroscope ملقط وغاية في الدقة. يتم توفير إجراءات خطوة بخطوة لتشريح أدمغة الأجنة بصريا. يتم تشريح أدمغة الجنين من قاعدة البصلة الشمية منشم إلى قاعدة الدماغ التالي.

للتحقيق في موت الخلايا المبرمج، هي جزء لا يتجزأ أدمغة الأجنة لأول مرة في الجيلاتين باستخدام قالب التقشير بعيدا لتسهيل باجتزاء مع جهاز vibratome. أدمغة الأجنة جزءا لا يتجزأ من وثابتة في بارافورمالدهيد هي مقطوع بسهولة، ويمكن تركيبه المقاطع التعويم الحر في superfrost الشرائح بالإضافة لتحديد الخلايا أو موت الخلية.

وقد استخدمت مقايسة لتحديد موت الخلية أو الخلايا أفكارك:؛ TUNEL (محطة deoxynucleotidyl ترانسفيراز TDT TDT بوساطة dUTP نيك نهاية وصفها). ومن الجدير بالذكر أن APوتتميز optosis والسمسة الخلية بوساطة من قبل تفتيت الحمض النووي. وهكذا، فإن إيجابية الخلايا TUNEL تصور تدل على موت الخلية أو الخلايا أفكارك.

التصاميم التجريبية هنا تقديم معلومات حول استخدام نظام غذائي السائلة التي أنشئت لدراسة آثار الكحول ودور الببتيد العصبي أثناء فترة الحمل في أدمغة الأجنة. وهذا ينطوي على تربية وتغذية الفئران الحوامل، microdissecting أدمغة الأجنة، وتحديد موت الخلايا المبرمج. معا، قد تكون هذه التقنيات البصرية والنصية مصدر للتحقيق التعرض قبل الولادة لعوامل ضارة في أدمغة الأجنة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الهدف من الطرق التجريبية وصفها هنا هو تقييم آثار اعصاب من الببتيدات الغذائية في نموذج التعرض للكحول الجنين باستخدام العديد من التقنيات التي تنطوي على تربية، تغذية، microdissecting، وكشف عن موت الخلايا. العمل من مختبرنا قد ينطوي على حمية سائلة مختلطة مع الكحول كنموذج للشرب الكحول المعتدل، والتي قد تكون مشابهة لنموذج الشرب الإنسان في فترة من كمية الكحول المستهلكة 1-5. وقد حددت نحن وآخرون ثلاثة المشتقات الببتيد التي هي اعصاب ضد الآثار الضارة للتعرض الكحول الجنينية. دراسات التحقيق التعرض للكحول خلال المراحل الجنينية باستخدام نماذج حيوانية قد يؤدي إلى تحديد الآليات المحتملة من العصبية وتسمح للوضع إجراءات التدخل. قد توفر ه....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. تربية الحيوانات ومعالجة اغتذائية الببتيد

  1. C57BL/mice تولد عن طريق وضع الفئران الإناث (~ 6 أسابيع من العمر، ومتوسط ​​الوزن 20 غ) في أقفاص المنزل الذكور لمدة 2 ساعة.
  2. تحقق من وجود المكونات الحيوانات المنوية و / أو اللطاخة المهبلية بعد ذلك على الفور.
  3. إذا إيجابية، تعين هذه النقطة الوقت الذي الجنينية اليوم 0 (E0).
  4. على E7، وزن مباراة الإناث الحوامل لمجموعات العلاج السيطرة و(3 مجموعات) يتم تعيين ك....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الطرق التجريبية وصفها هنا تبين أن نافذة تربية 2 ساعة أمر ضروري لتقدير مرحلة الحمل دقيقة. لقد أظهر تشريح الأجنة في سن ال E13. أثبتنا أيضا تسليخ مجهري من أدمغة الأجنة في E13. الإجراء ينطوي على عدة مراحل (AC)، كما هو موضح في الشكل رقم 1. يتم تشريح أدمغة الجنين من قاعدة البصلة الشمية منشم إلى قاعدة الدماغ التالي (الشكل 1). ثم يتم إصلاح أدمغة الأجنة في بارافورمالدهيد 4٪ للكشف immunochemical. بعد التثبيت، هي جزء لا يتجزأ أدمغة الأجنة في 10٪ الجيلاتين وإ.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المنهجية والتكنولوجيا المقدمة في هذه الدراسة تثبت آثار التعرض قبل الولادة للكحول في أدمغة الأجنة ودور الببتيد التغذية في الوقاية من هذه الآثار. قد توفر هذه المعلومات على كيفية دراسة أدوية أخرى من سوء المعاملة أو المواد الكيميائية السامة الأخرى في أدمغة الجنين خلال مراحل الحمل المختلفة.

في ما يخص نموذج التربية، في بعض الحالات قد لا يكون ملحوظا في الكشف عن المكونات الحيوانات المنوية. في هذه المرحلة، من المهم لاختبا.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لا الإفصاحات في هذا الشأن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا المشروع البحثي من قبل جائزة عدد R21AA017735 (يس) من المعاهد الوطنية لتعاطي الكحول والإدمان على الكحول. المحتوى هو فقط من مسؤولية الكاتب ولا تعبر بالضرورة عن وجهة النظر الرسمية للمعهد الوطني لتعاطي الكحول والإدمان على الكحول أو المعاهد الوطنية للصحة. ويود الكاتب أيضا أن أشكر تشاريس مونتغمري لتحرير هذه المخطوطة.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Superfrost Plus SlidesVWR48311-703
PAP PENResearch Products Int. Corp.195506
5-Plend Open Mailer Heathrow Scientific، LLCHS 15983G
انزع قوالب التضمين علومالمجهر الإلكتروني70182
طقم الكشف عن موت الخلايا في الموقع ، PODRoche Diagnostics، Inc11684817910
Hanks 'Balanced Salt SolutionInvitrogen14170-120
الجيلاتين من النوع AFisherScientificG8-500
المجهر المجسمW. NUHSBAUM، IncLeica M60، KL 200 LED
Micro-VibratomeLeica، IncLeica VT 1000S
Moria Ultra Fine Fallps أدوات العلومالدقيقة 11370-402 زوج
من أنابيب التغذية الخريجة 30 ملDyets، Inc900012
Vitamin Mix Bio-Serv. Inc.F8031
ميكس معدنيبيو سيرف.F8598
مالتوز دكسترينبيو سيرف.3650
كحول إيثيلي 190 برهان ، 5 جالونات111000190-SS05Pharmco-AAPER
مجهر عموديW. NUHSBAUM، IncLEICA DM 4000

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sari, Y. Activity-dependent neuroprotective protein-derived peptide, NAP, preventing alcohol-induced apoptosis in fetal brain of C57BL/6 mouse. Neuroscience. 158 (4), 1426-1435 (2009).
  2. Sari, Y., Chiba, T., Yamada, M., Rebec, G. V., Aiso, S.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

TUNEL

مقالات ذات صلة