Photothrombosis هو وسيلة سريعة وتقنية الحد الأدنى الغازية لإحداث احتشاء الصغيرة وكذلك بفواصل في المجالات ذات الاهتمام بطريقة استنساخه للغاية. انها مناسبة خاصة لدراسة الاستجابات الخلوية والجزيئية الكامنة وراء اللدونة الدماغ في الفئران المعدلة وراثيا.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نقص التروية Photothrombotic: A الضوئية نموذج الآفات القشرية المناظير وقابلة للتكرار للدراسات السكتة الدماغية ماوس
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ويهدف نموذج السكتة الدماغية photothrombotic للحث على الأضرار الدماغية داخل منطقة القشرية يعطى عن طريق الصور تفعيل صبغة حساسة للضوء حقن سابقا. بعد إضاءة، يتم تنشيط الصبغة وينتج الأكسجين القميص أن مكونات أضرار من أغشية الخلايا البطانية، مع تراكم الصفائح الدموية وتكوين الجلطات اللاحقة، والذي يحدد في نهاية المطاف انقطاع تدفق الدم المحلية. تم تحسين هذا النهج، اقترح في البداية من قبل روزنبلوم وش الصبان في عام 1977، في وقت لاحق من قبل واطسون في عام 1985 في دماغ الفئران وتعيين أساس النموذج الحالي. أيضا، ساهمت زيادة توافر خطوط الماوس المعدلة وراثيا أخرى لرفع الفائدة على نموذج photothrombosis. لفترة وجيزة، يتم حقن صبغة حساس (روز البنغال) الغشاء البريتونى ويدخل مجرى الدم. عندما تضاء بواسطة مصدر ضوء بارد، يصبح صبغ تنشيط ويدفع الضرر البطانية مع تنشيط الصفائح الدموية وتخثر الدم، مما أدى إلى المحليةتدفق انقطاع الدم. يمكن تطبيقها مصدر الضوء على الجمجمة سليمة مع عدم وجود الحاجة من حج القحف، والذي يسمح استهداف أي منطقة القشرية ذات الاهتمام بطريقة متكررة وغير الغازية. ثم يتم خياطة الماوس وسمح ليستيقظ. تقييم الأضرار الدماغية يمكن أن يتحقق بسرعة عن طريق كلوريد ثلاثي فينيل-تترازوليوم أو الكريزيل تلطيخ البنفسجي. هذه التقنية تنتج احتشاء من صغر حجمها وحدودها جيدا محدد، وهو أمر مفيد للغاية لتوصيف خلية دقيقة أو دراسات وظيفية. وعلاوة على ذلك، انها مناسبة خاصة لدراسة الاستجابات الخلوية والجزيئية الكامنة وراء اللدونة الدماغ في الفئران المعدلة وراثيا.
المقدمة
في بداية القرن 21th، السكتة الدماغية هو اضطراب المدمر الذي يمثل السبب الثاني للإعاقة على المدى الطويل (1) والسبب الثاني للوفيات في جميع أنحاء العالم، والتي تمثل في السكتة الدماغية لحوالي 5،7 مليون حالة وفاة في عام 2004 2. على الرغم من الجهود العديدة التي وضعت في، لا يوجد حتى الآن علاج فعال المتاحة لتحسين الانتعاش وظيفية بعد السكتة الدماغية. وتستخدم النماذج الحيوانية من السكتة الدماغية على نطاق واسع في مجال البحث السكتة الدماغية لأنها تسمح النمذجة من الفيزيولوجيا المرضية لنقص تروية الضرر واختبار فعالية استراتيجيات اعصاب مختلفة في الجسم الحي. معظم هذه النماذج تهدف للحث على احتشاء اسعة النطاق عن طريق....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. بعد الجراحة قبل
- زن روز البنغال في أنبوب 1.5 مل وتذوب في محلول ملحي معقم حتى التوصل إلى تركيز النهائي من 15 ملغ / مل. فلتر تعقيم من خلال مرشح ميكرون 0.2 وتخزينه في الظلام في درجة حرارة الغرفة لمدة أقصاها شهران.
- تعقيم جميع الأدوات الجراحية بواسطة التعقيم. يجب تعقيم منطقة العمليات الجراحية أقل من ساعة واحدة قبل الشروع في عملية جراحية.
- تسجيل وزن الجسم الماوس لضبط جرعة من روز البنغال ليتم حقنه. نحن حقن 10 ميكرولتر / غرام من وزن الحيوان في الإ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
سوف يشكل هذا البروتوكول تنتج الآفة القشرية التي هي بالفعل واضحة على تشريح من القشرة للعين المجردة (أرقام 1A-1C). الآفة photothrombotic يتطور في الطبقات القشرية سطحي وعميق في الأنسجة التي هي شفافة بما فيه الكفاية للسماح الصور تفعيل روز البنغال. قياس مدى احتشاء دماغي لا يمكن أن يؤديها بسرعة عن طريق تلطيخ النسيجية مع كلوريد ثلاثي فينيل-تترازوليوم (TTC) على الأنسجة الطازجة أو البنفسجي الكريزيل بعد التثبيت في بارافورمالدهيد 4٪ (PFA). قبل TTC الحضانة، يتم وضع الدماغ تشر.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
التعديلات والتبديلات
بسبب ذروة امتصاصه في 562 نانومتر، ليزر الضوء الأخضر من مصباح قوس الزينون تصفيتها تم اختياره أصلا لأشرق على حساس روز البنغال. على الرغم من الإثارة ليزر بوساطة كانت لا تزال تستخدم recently5، ويمكن أن تحل محلها مصباح ضوء الباردة التي تضمن أيضا الإثارة صبغ 10،15. الألياف البصرية ضوء الباردة هي أسهل للتلاعب وأقل تكلفة من مصادر الليزر. ومع ذلك، يجب أن يكون لاحظت أن أشعة الليزر تستخدم عادة ل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
نشكر أناليزا بوفو للحصول على اقتراحات بصيرة والتعليقات، وماوريتسيو Grassano، مارينا Boido وإرميرا Pajaj لاطلاق النار. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل FP7-MC-214003-2 (ماري كوري الأولية تدريب شبكة AXREGEN) وكمبانيا دي سان باولو، مشروع gliarep.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسم
الشركة
رقم فهرسي
التعليقات
البصرية جهاز التحكم في درجة الحرارة التدفئةالأكسجين والنيتروجين عالمية
| solutions and chemicals< / strong> | |||
|---|---|---|---|
| Rose Bengal | Sigma ، إيطاليا | 330000 | |
| Isoflurane Vet | Merial | 103120022 | |
| Betadine | Asta Medica | ||
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | |
| المواد والمعدات الجراحية | |||
| فلتر Fluosorber | Havard | 340415 | |
| 150W إضاءة الألياف | الضوئية | PL3000 | |
| للوحة جهاز TCAT-2DF | Havard | 727561 | |
| أداة Stereotaxic | Stoelting | 51950 | |
| مجهر التشغيل | Takagi | OM8 | |
| وسادة | |||
| أدوات جراحة غاز | |||
| أداة | دقيقة | صنابير الألياف البصرية والقناع مصنوعة حسب الطلب |
المراجع
- Lopez, A. D., Mathers, C. D., Ezzati, M., Jamison, D. T., Murray, C. J. Global and regional burden of disease and risk factors. Lancet. 367, 1747-1757 (2001).
- Mathers, C. D., Boerma, T., Ma Fat, D. Global and regional causes of death. Br. Med. Bull. 92, 7-32 (2009).
- Rosenblum, W. I., El-Sabban....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
