مقالة منهجية

المعجل نوع 1 الحث السكري في الفئران عن طريق نقل بالتبني من CD4 + T خلايا سكري

DOI:

10.3791/50389

⸱

مايو 6, 2013

 , 
1Department of Microbiology & Immunology, Pennsylvania State University College of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونحن نقدم طريقة استنساخه للحث على مرض السكري من النوع 1 (T1D) في الفئران خلال أسبوعين من نقل بالتبني من جزيرة مستضد محددة، CD4 + الخلايا التائية الأولية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مرض السكري (NOD) الماوس nonobese يتطور بشكل عفوي السكري الذاتية بعد 12 أسبوعا من العمر، ودرس على نطاق واسع هو نموذج حيواني معظم نوع الإنسان مرض السكري 1 (T1D). وقد أثبتت الدراسات نقل الخلايا في الفئران المتلقية المشع أن الخلايا T تقوم بدور محوري في التسبب في T1D هذا النموذج. وصفنا هنا طريقة بسيطة لبسرعة تحفز T1D بواسطة نقل بالتبني من المنقى، CD4 + الخلايا التائية الأولية من مرحلة ما قبل السكري الفئران المعدلة وراثيا NOD لمستقبلات الخلايا التائية جزيرة محددة (TCR) BDC2.5 في الفئران المتلقية NOD.SCID. أهم مزايا هذه التقنية هي أن العزلة وبالتبني نقل الخلايا T سكري يمكن أن تكتمل في غضون نفس اليوم، غير مطلوب التشعيع من المتلقين، وأثار وجود نسبة عالية من T1D في غضون 2 أسابيع بعد نقل الخلايا التائية. وبالتالي، يمكن أن دراسات المرضية والتدخلات العلاجية في T1D المضي قدما بوتيرة أسرع من مع الأساليب التي تعتمد على غير متجانسة السكان الخلية T أو استنساخالمستمدة من الفئران NOD السكري.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الماوس NOD يتطور مرض السكري المناعة الذاتية بشكل عفوي، واستخدمت على نطاق واسع باعتبارها نموذج حيواني ل1،2 T1D الإنسان. يتميز التسبب في T1D في الفئران NOD بواسطة تسلل، ابتداء من الساعة 3-4 أسابيع من العمر، من البنكرياس الجزر لانكر بواسطة الخلايا الجذعية والضامة، تليها T والخلايا B. هذه المرحلة من غير مدمرة شبه التهاب الجزر يؤدي إلى بطء والتدمير التدريجي للخلايا المنتجة للأنسولين β البنكرياس، مما يؤدي إلى مرض السكري العلني من قبل 4-6 أشهر من العمر 3. وقد ثبت نقل splenocytes 4،5، CD4 + CD8 + 6،7 أو 8،9 T خلايا من الفئران NOD السكري للتوسط السكري في الفئران المناعة NOD، مشيرا إلى أن الخلايا T جزيرة التفاعلي تلعب دورا محوريا في التسبب T1D. اعتمادا على الظروف التجريبية، وضعت السكري في الفئران المتلقية ببطء، على مدى عدة أسابيع في هذه الدراسات. وبالمثل، ومختلف الحيوانات المستنسخة الخلايا التائية، التي يجنيها تستغرق وقتا طويلا ومكلفازراعة الخلايا T سكري، تم الإبلاغ عن التوسط السكري بعد عدة أسابيع نقل في الفئران المتلقية 7،10. مع توافر الفئران المعدلة وراثيا معربا عن TCRS المستمدة من CD4 أو CD8 المقيدة سكري استنساخ الخلايا التائية، العديد من المختبرات أظهرت لاحقا أن الخلايا T الطحال من هذه الفئران كانت قادرة على نقل مرض السكري إلى المستلمين 11-13. على وجه التحديد، BDC2.5 NOD الفئران المعدلة وراثيا هي لBDC2.5 TCR، والتي هي محددة لكروموغرانين A، وهو بروتين في خلايا بيتا في البنكرياس 14-16. ونقل في المختبر تنشيط أو إلغاء تنشيط كله أو مجزأ خلايا الطحال من السكري بشكل علني أو [برديبتيك BDC2.5 الفئران نقل السكري لحديثي الولادة أو العوز المناعي الفئران NOD في الكفاءة متفاوتة 11،17-19.

نحن تصف طريقة بسيطة التي تستخدم CD4 + الخلايا المعدلة وراثيا تنقية T من مرحلة ما قبل السكري BDC2.5 الفئران للحث على T1D في الفئران المتلقية على كفاءة عالية وconsisteNCY. يتم عزل أعداد كبيرة من السذاجة، جزيرة CD4 مستضد محددة + الخلايا التائية من هذه الفئران عن طريق الفرز مضان تنشيط الخلايا (FACS) لCD4 + + الخلايا التائية CD62L تعبر عن TCR سلسلة Vβ4 المعدلة وراثيا. ثم يتم نقل تنقية الخلايا التائية المعدلة وراثيا دون تفعيل في الفئران NOD.SCID، والتي تفتقر T والخلايا B وظيفية والتهاب الجزر هي والسكري مجانا-20. ويتم رصد الفئران المتلقية لتركيزات مرتفعة من الجلوكوز البول مما يدل T1D، الذي يتطور بسرعة في غضون أسبوعين بعد نقل الخلايا التائية.

وعلى النقيض من الأساليب الأخرى التي نقل خلايا T سكري مع الخصوصيات غير متجانسة، يستخدم بروتوكول لدينا نظام مراقبة الأصول الميدانية فرزها CD4 + الخلايا التائية التي تعبر بشكل حصري تقريبا على سكري BDC2.5 TCR. ونظرا لتماثلها، وسيتطلب الأمر فقط أعداد صغيرة من الخلايا T نقل (~ 1X10 6 خلية / الماوس) لتطوير T1D السريع في غضون اسابيع 2 في الإصابة 100٪. ميزة أخرى لبروتوكول لدينا هو أن irradiatioن من الفئران المتلقية ليست ضرورية كما هو الحال بالنسبة لبعض الطرق الأخرى. وجود قيود المحتملة لهذا الأسلوب هو أنه لا يسمح التحقيق في مساهمة كل من CD4 و CD8 مجموعات فرعية الخلايا التائية CD8 أو على وجه التحديد خلايا T في مرض السكري.

سوف بروتوكول الموصوفة أن تكون مفيدة لدراسة تطوير T1D السريع، بوساطة السذاجة، CD4 + الخلايا التائية أحادي النوعية، فضلا عن الاستراتيجيات العلاجية للتدخل في صاروخ موجه من جزيرة الخلايا ال محددة مستضد إلى الجهاز المستهدف.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. عزل الخلايا T من الطحال والغدد الليمفاوية من الفئران BDC2.5

  1. استخدام 6 أسابيع من العمر ما قبل السكري أنثى BDC2.5 الفئران الجهات المانحة من CD4 + الخلايا التائية سكري. يجب أن تكون خالية من مرض السكري الفئران على النحو الذي يحدده قياس الجلوكوز البول (انظر أدناه).
  2. الموت ببطء كل فأر باستخدام ثاني أكسيد الكربون 2 الاختناق وإزالة العقد اللمفاوية والطحال، إبطي والعضدية تحت ظروف معقمة. لإزالة الطحال، ونقع الفراء مع الايثانول 70٪، ثم خفض وسحب الجلد. سوف الطحال تكون مرئية كجهاز الأحمر الداكن على الجانب الأيسر من الفأرة. جعل شق 1 بوصة في الصفاق باستخدام مقص صغير وفهم بلطف الطحال في وسط مع زوج من ملاقط صغيرة. تقليم بعناية النسيج الضام والدهون المرفقة قدر الإمكان وإزالة الطحال.
  3. جمع الطحال والغدد الليمفاوية في 10 مل متوسط ​​Dulbecco's-التعديل النسر (DMEM) في أنبوب مخروطي 15 مل على الجليد.
  4. إعداد تعليق خلية واحدة باستخدام اله نهاية العقيمة 10 مل حقنة الغطاس إلى الضغط بلطف على الأجهزة اللمفاوية من خلال 70 خلية مصافى ميكرومتر (الطحال واحدة في مصفاة و4-6 الغدد الليمفاوية في مصفاة) في نفس أنبوب 50 مل المخروطية.

خلال هذه العملية، وشطف كل مصفاة مع 1 مل DMEM عدة مرات لتحقيق أقصى قدر من الانتعاش من الخلايا من مصفاة.

  1. نقل الخلايا التي تم جمعها من أنبوب مخروطي 50 مل في أنبوب مخروطي 15 مل وأجهزة الطرد المركزي في XG 300-400 لمدة 7 دقائق في RT.
  2. إلى ليز خلايا الدم الحمراء، وتجاهل طاف، اعادة تعليق الخلايا في 5 مل الأمونيوم كلوريد البوتاسيوم (ACK) العازلة (درجة الحموضة 7.2)، واحتضان تعليق ACK-خلية في RT لمدة 5 دقائق.
  3. إضافة 10 مل من DMEM إلى تعليق ACK خلايا وأجهزة الطرد المركزي في أنبوب على النحو الوارد أعلاه. غسل الخلية بيليه مرة واحدة في 10 مل DMEM.

2. الفرز مضان تنشيط الخلايا من CD4 + T سكري خلايا من الفئران BDC2.5

  1. اعادة تعليق الخلايا في 5 مل FACS قالحتفاظ العازلة وحساب عدد خلايا قابلة للحياة (باستخدام المجهر النقيض من المرحلة وعدادة الكريات) من خلال التريبان الأزرق صبغ الاستبعاد.
  2. باستخدام نظام مراقبة الأصول الميدانية العازلة، وضبط حجم التعليق الخلية إلى 5 × 10 7 خلية / مل. إزالة ~ 1 × 10 6 خلايا في السيطرة تلطيخ (1 لا وصمة عار، 3 البقع واحد). وصمة عار على عينة لCD4 المعدلة وراثيا غير المنشط + الخلايا التائية مع المضادة للCD4 (APC)، ومكافحة TCR Vβ4 (FITC) والمضادة للCD62L (PE) الأجسام المضادة وحيدة النسيلة (ماب) في أنبوب مل 15. أداء تلوين الخلية باستخدام تركيزات خريطة موقع المقترح من قبل المصنع لمدة 20-30 دقيقة على 4 درجات مئوية في الظلام.
  3. غسل العينة والضوابط وصمة عار واحد مع نظام مراقبة الأصول الميدانية العازلة عند> 3X حجم رد فعل تلطيخ. أجهزة الطرد المركزي في أنبوب 300-400 XG، وإزالة طاف، وإعادة تعليق الخلايا في نظام مراقبة الأصول الميدانية العازلة (1-2 × 10 7 خلية / مل لفرز عينة و 300 ميكرولتر للضوابط وصمة عار واحد) ومتجر على الجليد حتى اليوم التالي الخطوة.
  4. تمرير عينة الخلية من خلال خلية ميكرون 35مصفاة غطاء أنبوب لإزالة كتل الخلية. فرز عينات للCD4 + TCR Vβ4 + + CD62L الخلايا على وفارز الخلية مع المشغل المدربين. جمع الخلايا تفرز وتوضع في 3 مل DMEM في أنبوب مل 15. تسمح 2.5-3 الموارد البشرية، بما في ذلك الإعداد، لفرز 1.5 × 10 8 خلايا (العدد التقريبي للخلايا التي تم الحصول عليها من الفئران المانحة 3) بمعدل نوعا من 2 × 10 4 مجموع الأحداث / ثانية. نتوقع ~ 2.5 × 10 6 CD4 المعدلة وراثيا غير المنشط + الخلايا التائية في الماوس بعد فرز الخلايا.
  5. تسجيل العدد المطلق للخلايا فرزها في نهاية الفرز وأجهزة الطرد المركزي لهم لمدة 7 دقائق في 300-400 ز س. تجاهل طاف واعادة تعليق الخلايا (2 × 10 6 خلية / مل) في العقيمة الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) (2 ملغ + / كا 2 + مجاني) لنقل بالتبني الخلايا التائية.

3. نقل بالتبني من CD4 + T سكري خلايا من الفئران BDC2.5

  1. باستخدام حقنة 1 مل و18-1 ½ إبرة قياس، بلطف إعادة تعليق CD4 FACS-تنقيته +خلايا T وتحميل حقنة 1 مل. استعدادا للحقن، استبدال 18-1 ½ إبرة قياس مع 27 ½ إبرة قياس.
  2. فضح 6-8 أسبوع من العمر أنثى الفئران المتلقية NOD.SCID إلى مصباح التدفئة حتى أنها تظهر الاستمالة السلوك.
  3. كبح الفئران المتلقية في كابح ومسح الذيل مع 70٪ (V / V) الايثانول لتطهير مكان الحقن.
  4. حقن 1-2 × 10 6 FACS فرز الخلايا / الماوس (في ما يصل إلى 500 ميكرولتر PBS) في أي من أوردة الذيل الأفقي.

لا قوة على المكبس. إذا كان موجودا في إبرة بشكل مناسب في هذا السياق، فإن حقن تجري مع تقريبا أي مقاومة.

4. رصد الفئران مستلم لارتفاع السكر في الدم وT1D

  1. تبدأ بعد خمسة أيام نقل الخلية T، ويتم رصد الفئران المتلقية NOD.SCID اليومية للجلوكوز البول مرتفعة باستخدام أشرطة الكواشف (باير Diastix) وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. الفئران مع اثنين من urin التواليه قراءات الجلوكوز> 250 ملغ / دل تعتبر السكري.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نتائجنا تظهر عزلة المعدلة وراثيا BDC2.5 الخلايا معربا عن CD62L، وهو أمر حاسم لخلايا T إلى الوطن إلى الأجهزة اللمفاوية الثانوية مثل الغدد الليمفاوية البنكرياس. النتائج التي توصلنا إليها مزيد من إثبات قدرة قوية من هذا أحادي النوعية السكان الخلية T لنقل بسرعة وبكفاءة T1D على الفئران المتلقية NOD.SCID.

ويظهر العزلة من CD4 + الخلايا التائية سكري من BDC2.5 الفئران في الشكل 2. تم الحصول على ما يقرب من 5...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن أن يتسبب T1D في الفئران المتلقي في متفاوتة الكفاءة عن طريق التحويل بالتبني من خلايا الطحال كله أو مجموعات فرعية من الخلايا التائية الفئران NOD السكري أو الفئران المعدلة وراثيا لTCRS المستمدة من الحيوانات المستنسخة سكري الخلايا التائية. نفيدكم هنا طريقة استنساخه للحث على T1D في الفئران المتلقية في غضون أسبوعين في حدوث 100٪ عن طريق نقل FACS-المنقى CD62L + BDC2.5 CD4 + الخلايا التائية المعدلة وراثيا في الفئران NOD.SCID.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتم إيواء جميع الفئران في كلية ولاية بنسلفانيا للطب معينة خالية من مسببات الأمراض (SPF) المرفق وفقا للمبادئ التوجيهية للدولة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام اللجنة بنسلفانيا.

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر الدكاترة. روبرت بونو ونيل كريستينسن لتعليقات مفيدة.

وأيد هذا العمل من قبل ولاية بنسلفانيا كلية جامعة ولاية الأموال الطب.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
BDC 2.5 TCR الفئران المعدلة وراثيا NOD (NOD. Cg-Tg(Tcrα BDC 2.5 ، Tcr &# 946 ؛ BDC 2.5)JAX004460
إيماءة. الفئران SCID (NOD. CB17-Prkdcscid/J)JAX001303
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)Themo ScientificSH30022.01
Bayer DiastixFisher ScientificAM2803
15 مل أنابيب مخروطيةFalcon352095
50 ملFalcon352070
جراحية معقمة
مقص
معقم مقص
70 مو ؛ مصافي الخلايا m22363548فيشر Scientific
35 & mu ؛ أنابيب غطاء مصفاة الخلية mBD Biosciences352235
عازلة0.15 M NH4< / sub>Cl ، 1 ملي مولار KHCO3 ، < / sub>0.1 mM Na2< / sub>EDTA ، درجة الحموضة 7.2 في dH 2< / sub>O
BD FACSFlowTM غمد السائلBD Biosciences342003
FACS تلطيخ المخزنالمؤقتPBS ، 0.2 ملي مولار EDTA ، 0.5٪ BSA / FCS ، مرشح
معقم مجهر
الطور مقياس كثافة الدم الأزرق
المضاد ل CD4 (APC) mAbBiolegend1005616استنساخ RM4-5
Anti-TCR V & # 946 ؛ 4 (FITC) mAbBD Biosciences553365استنساخ KT4
Anti-CD62L (PE) mAbBD Biosciences553151استنساخ MEL-14
فارز الخلاياBD Biosciencesعلى سبيل المثال< / em> BD FACSAria III
مصباح
مصفاة
1 مل محاقنBecton Dickinson309602
18-1 & frac12 ؛ إبر القياس (معقمة)Becton Dickinson305196
27 & frac12 ؛ إبر القياس (معقمة)Becton Dickinson305109
ملاقط زوج صغيرزوج كبير معقم الأمونيوم وكلوريد البوتاسيوم (ACK) تباينحراريالماوس

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Makino, S., et al. Breeding of a non-obese, diabetic strain of mice. Jikken Dobutsu. 29, 1-13 (1980).
  2. van Belle, T. L., Coppieters, K. T., von Herrath, M. G. Type 1 diabetes: etiology, immunology, and therapeutic strategies. Physiol. Rev. 91, 79-118 (2011).
  3. Delovitch, T. L., Singh, B. The nonobese diabetic mouse as a model of autoimmune diabetes: immune dysregulation gets the NOD. Immunity. 7, 727-738 (1997).
  4. Wicker, L. S., Miller, B. J., Mullen, Y. Transfer of autoimmune diabetes mellitus with splenocytes from nonobese diabetic (NOD) mice. Diabetes. 35, 855-860 (1986).
  5. Bendelac, A., Carnaud, C., Boitard, C., Bach, J. F. Syngeneic transfer of autoimmune diabetes from diabetic NOD mice to healthy neonates. Requirement for both L3T4+ and Lyt-2+ T cells. J. Exp. Med. 166, 823-833 (1987).
  6. Haskins, K., McDuffie, M. Acceleration of diabetes in young NOD mice with a CD4+ islet-specific T cell clone. Science. 249, 1433-1436 (1990).
  7. Christianson, S. W., Shultz, L. D., Leiter, E. H. Adoptive transfer of diabetes into immunodeficient NOD-scid/scid mice. Relative contributions of CD4+ and CD8+ T-cells from diabetic versus prediabetic NOD.NON-Thy-1a donors. Diabetes. 42, 44-55 (1993).
  8. Wicker, L. S., Todd, J. A., Peterson, L. B. Genetic control of autoimmune diabetes in the NOD mouse. Annual Reviews in Immunology. 13, 179-200 (1995).
  9. Serreze, D. V., et al. MHC class I-mediated antigen presentation and induction of CD8+ cytotoxic T-cell responses in autoimmune diabetes-prone NOD mice. Diabetes. 45, 902-908 (1996).
  10. Milton, M. J., Poulin, M., Mathews, C., Piganelli, J. D. Generation, maintenance, and adoptive transfer of diabetogenic T-cell lines/clones from the nonobese diabetic mouse. Methods Mol. Med. 102, 213-225 (2004).
  11. Kurrer, M. O., Pakala, S. V., Hanson, H. L., Katz, J. D. Beta cell apoptosis in T cell-mediated autoimmune diabetes. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 213-218 (1997).
  12. Amrani, A., et al. Perforin-independent beta-cell destruction by diabetogenic CD8(+) T lymphocytes in transgenic nonobese diabetic mice. J. Clin. Invest. 103, 1201-1209 (1999).
  13. Dobbs, C., Haskins, K. Comparison of a T cell clone and of T cells from a TCR transgenic mouse: TCR transgenic T cells specific for self-antigen are atypical. J. Immunol. 166, 2495-2504 (2001).
  14. Haskins, K., Portas, M., Bradley, B., Wegmann, D., Lafferty, K. T-lymphocyte clone specific for pancreatic islet antigen. Diabetes. 37, 1444-1448 (1988).
  15. Katz, J. D., Wang, B., Haskins, K., Benoist, C., Mathis, D. Following a diabetogenic T cell from genesis through pathogenesis. Cell. 74, 1089-1100 (1993).
  16. Stadinski, B. D., et al. Chromogranin A is an autoantigen in type 1 diabetes. Nat. Immunol. 11, 225-231 (2010).
  17. Luhder, F., Chambers, C., Allison, J. P., Benoist, C., Mathis, D. Pinpointing when T cell costimulatory receptor CTLA-4 must be engaged to dampen diabetogenic T cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97, 12204-12209 (2000).
  18. Tang, Q., et al. In vitro-expanded antigen-specific regulatory T cells suppress autoimmune diabetes. J. Exp. Med. 199, 1455-1465 (2004).
  19. Calderon, B., Suri, A., Pan, X. O., Mills, J. C., Unanue, E. R. IFN-gamma-dependent regulatory circuits in immune inflammation highlighted in diabetes. J. Immunol. 181, 6964-6974 (2008).
  20. Shultz, L. D., et al. Multiple defects in innate and adaptive immunologic function in NOD/LtSz-scid mice. J. Immunol. 154, 180-191 (1995).
  21. Waldner, H., Sobel, R. A., Price, N., Kuchroo, V. K. The autoimmune diabetes locus Idd9 regulates development of type 1 diabetes by affecting the homing of islet-specific T cells. J. Immunol. 176, 5455-5462 (2006).
  22. Verdaguer, J., et al. Spontaneous autoimmune diabetes in monoclonal T cell nonobese diabetic mice. J. Exp. Med. 186, 1663-1676 (1997).
  23. Thomas, D. C., Mellanby, R. J., Phillips, J. M., Cooke, A. An early age-related increase in the frequency of CD4+ Foxp3+ cells in BDC2.5NOD mice. Immunology. 121, 565-576 (2007).
  24. Prochazka, M., Gaskins, H. R., Shultz, L. D., Leiter, E. H. The nonobese diabetic scid mouse: model for spontaneous thymomagenesis associated with immunodeficiency. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 3290-3294 (1992).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

CD4 NOD SCID BDC2 5

مقالات ذات صلة