مقالة منهجية

A انواع معينة ايليجانس النظام النموذجي للدراسات Amylopathy

DOI:

10.3791/50435

⸱

مايو 17, 2013

 , 
1Department of Neuroscience and Cell Biology, Robert Wood Johnson Medical School, University of Medicine and Dentistry of New Jersey

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن تصف أساليب لدراسة جوانب amylopathies في الدودة C. ايليجانس. وتبين لنا كيفية بناء الديدان معربا عن Aβ الإنسان 42 في الخلايا العصبية وكيفية اختبار وظيفتها في المقايسات السلوكية. وتبين لنا كيفية الحصول على مزيد من الثقافات العصبية الأولية التي يمكن استخدامها لاختبار الدوائية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Amylopathy هو المصطلح الذي يصف تركيب غير طبيعي وتراكم اميلويد بيتا (Aβ) في الأنسجة مع مرور الوقت. Aβ هو السمة المميزة لمرض الزهايمر (AD)، ويوجد في الجسم ليوي الخرف، إدراج التهاب العضل في الجسم واعتلال الأوعية الدماغية اميلويد 1-4. Amylopathies تطوير تدريجيا مع مرور الوقت. لهذا السبب الكائنات بسيطة مع أعمار قصيرة قد يساعد في توضيح الجوانب الجزيئية لهذه الشروط. هنا، نحن تصف البروتوكولات التجريبية لدراسة تنكس عصبي Aβ بوساطة استخدام انواع معينة ايليجانس دودة. وهكذا، ونحن بناء الديدان المعدلة وراثيا عن طريق حقن الحمض النووي الترميز Aβ الإنسان 42 إلى الغدد التناسلية المخلوي من المنحرفين الكبار. واستقرت خطوط المحولة من قبل التكامل الطفرات التي يسببها. الديدان الخيطية هي سن متزامنة من خلال جمع وبذر بيضها. يتم اختبار وظيفة الخلايا العصبية معربا عن Aβ 42 في المقايسات السلوكية المناسب (الكيميائي مقايسةق). وتستخدم الثقافات العصبية الأولية التي تم الحصول عليها من الأجنة لاستكمال البيانات السلوكية واختبار آثار اعصاب من المركبات المضادة للأفكارك.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بيتا اميلويد (Aβ) هي الببتيد من 36-43 الأحماض الأمينية التي يتم تشكيلها بعد انشقاق متتابعة من البروتين اميلويد السلائف (APP) بواسطة β γ وsecretases 1. يعالج secretase γ نهاية C-محطة من الببتيد Aβ، وهي مسؤولة عن أطوال متغير ل 5. الأشكال الأكثر شيوعا من Aβ هي Aβ 40 و 42 Aβ، وهذا الأخير مرتبطا أكثر شيوعا لظروف مرضية مثل 5 م. بتركيزات عالية Aβ شكل β-الأوراق التي تتجمع لتشكيل الألياف اميلويد 6. الودائع الألياف هي المكون الرئيسي لويحات خرف المحيطة الخلايا العصبية. ويعتقد أن كلا ويحات وإنتشاري، الأوليغومرات Aβ غير لوحة، لتشكل أشكال المسببة للأمراض الكامنة وراء Aβ.

معقد دراسة مختبرية من amylopathies العصبية من حقيقة أن هذه الشروط التقدم مع مرور الوقت. وبالتالي، فمن مهمر لتطوير الحيوانية لين العريكة وراثيا نماذج تكميلية لالفئران مع قصيرة العمر. هذه النماذج يمكن استخدامها لتوضيح جوانب محددة من amylopathies-عادة الخلوية والجزيئية وبحكم بساطتها، وتساعد على التقاط جوهر المشكلة. الدودة انواع معينة ايليجانس السقوط هو هذه الفئة. لديها فترة حياة قصيرة، ~ 20 يوما وبالإضافة العمليات الخلوية الأساسية بما في ذلك تنظيم التعبير الجيني، والاتجار البروتين، والربط العصبية synaptogenesis، و، إشارة الخلية، والموت تشبه الثدييات 7. ميزات فريدة من الدودة تشمل الوراثة قوية وعدم وجود نظام السفينة، والتي تمكن لدراسة الأضرار العصبية بشكل مستقل عن تلف الأوعية الدموية. من ناحية أخرى، فإن عدم وجود الدماغ يحد من استخدام C. ايليجانس لدراسة جوانب كثيرة من التنكس العصبي. وبالإضافة إلى ذلك، لا يمكن استنساخ وتحديد التوزيعات التشريحية للآفات أن يؤديها في هذا الحي. الحد الأخرىوتشمل ations صعوبة تقييم كل الاختلافات في ملامح التعبير الجيني وضعف السلوك معقدة وظيفة الذاكرة. نحن هنا وصف الطرق لتوليد C. ايليجانس نماذج من amylopathies.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. بناء الديدان المعدلة وراثيا

  1. التحول.
    1. إعداد منصات حقن. وضع قطرة من الملفات الساخنة، 2٪ الاغاروز المذاب في الماء، على ساترة الزجاج. وضع بسرعة ساترة الثاني على انخفاض وبخفة ذلك. بعد عززت agarose، coverslips على الشرائح على حدة، وخبز وسادة ساترة في فرن فراغ في 80 درجة CO / N.
    2. سحب الماصات. نستخدم سوتر P-97 ساحبة لسحب 1/0.5 مم OD / ID البورسليكات الشعيرات الدموية مع خيوط. هي مزورة ماصات مع طرف المغلقة التي مكسورة مفتوحة في مرحلة لاحقة.
    3. إعداد حقن المزيج. جعل الخليط الحقن التي تحتوي على الحمض النووي من الفائدة (20 نانوغرام / ميكرولتر لكل بناء)، بالإضافة إلى الحمض النووي البلازميد فارغة إلى تركيز النهائي من 150 نانوغرام / ميكرولتر. أجهزة الطرد المركزي الخليط الحقن لإزالة أي ملوثات. هذه الخطوة أمر بالغ الأهمية لأن الملوثات تقليل كفاءة التحول. نقل أعلى 5 ميكرولتر (الحطام وغيرها من الملوثات تتجمع في الجزء السفلي) إلى أنبوب جديد لبه المستخدمة في الحقن.
    4. تحميل حقن مزيج من قبل الشعرية. هي مغمورة الجزء السفلي من ماصة في مزيج الحقن. عادة 0.5 ميكرولتر كافية لحقن 100 الديدان.
    5. تحميل حقن ماصة. إدراج ماصة على حامل من مياداة مجهرية وكسرها مفتوحة عن طريق فرك طرفها ضد حافة الانزلاق الغطاء شنت على شريحة زجاجية أو بدلا من الحطام على لوحة الاغاروز. هذا هو خطوة حاسمة عن نصائح كبيرة من الضرر الدودة وانسداد بسهولة نصائح صغيرة جدا. نوعية من طرف مكسورة يمكن الحكم عليها من خلال الشكل والأهم من ذلك وفقا لمعدل التدفق. ويمكن تقييم معدل التدفق حسب حجم الفقاعات التي تتدفق من طرف المفتوحة مغمورة في قطرة من النفط 700 الهالوكربون استجابة لضغط الحقن.
    6. نقل الديدان لوحة الحقن. وضع قطرة من النفط 700 الهالوكربون على وسادة الحقن ونقل العديد من (1 أو 2 للمبتدئين) الديدان للزيت. استخدام دودة اختيار لدفع الديدان أسفل على وسادة حتىY التمسك الاغاروز. يجب أن تكون الديدان الموجهة في الصفوف مع الجانبين بطني تواجه نفس الاتجاه. تجنب لمس رأس الدودة. إذا بعد عدة محاولات يفشل الديدان على الانضمام إلى وسادة، مع استبدال لوحة جديدة أو زيادة سماكة الاغاروز و / أو تركيز.
    7. إدراج ماصة في دودة. عن طريق تحريك المرحلة، وضع دودة تحت ماصة. ضع ماصة في نواة مركزية من الغدد التناسلية بسبب السيتوبلازم لها يتم مشاركتها من قبل العديد من نوى الخلايا الجرثومية. وهذا يزيد من احتمال لتسليم الحمض النووي حقن لكثير من ذرية. ماصة يجب أن تقع موازية تقريبا لدودة (~ 15 درجة -25 درجة زاوية). دفع عموديا غيض من ماصة أسفل جسم الدودة حتى يتم الاكتئاب الجلد. ثم اضغط بلطف على مناور للحث على الإدراج غيض من. للحصول على أفضل النتائج على حد سواء حقن الغدد التناسلية.
    8. حقن محلول الحمض النووي. ممارسة الضغط على لماصة حتى تتضخم الغدد التناسلية. وقف تدفق وسحب دودة قبالة ماصة. اختبار إبرة لتدفق ومن ثم الانتقالإلى دودة المقبلة والخطوات حقن تكرار.
    9. استرداد الديدان: إضافة قطرة (~ 10 ميكرولتر) من العازلة الاسترداد على الديدان واحتضان حتى تبدأ الديدان السباحة. إضافة حجم مساو من M9، انتظر حتى الديدان استئناف السباحة وكرر عدة مرات حتى الحل هو في الغالب M9. نقل فردي الديدان لوحات المصنف.
  2. التكامل.
    1. ضع 40 صحي، تغذية جيدة، L4 الديدان في لوحة جديدة
    2. أشرق مع γ-ray مع 4،000 راد لمدة 40 دقيقة. نقل الديدان المشع (P0) في الطازجة، OP50 لوحات المصنف (4 الديدان / لوحة). ويمكن بدلا من ذلك للإشعاع الديدان مع جرعة من 300 ج / م 2 UVs و.
    3. نقل 10-20 transformants F1 من كل لوحة لوحات الفردية، وتسمية لوحات مع المقابلة P0 المنشأ.
    4. واحد من 2-4 transformants F2 لكل F1 لوحات منفصلة. تحقق من ذرية F3 لنقل 100٪ من علامة التحول. عادة، 1-3٪ من ذرية من فيل دودة المشعl له حدثا التكامل.
    5. جعل الأسهم من ثلاثة أو أكثر من الخطوط المحولة مستقلة.

2. فحوصات السلوكية

  1. العمر التزامن.
    1. تنمو الديدان في معيار 10 سم لوحات NGM + OP50 E. يتم التوصل حتى القولونية عدد كبير من السكان البالغين حامل (3-5 أيام).
    2. جمع الديدان في 50 مل أنابيب فالكون من قبل تعليقها في 1 مل M9 العازلة.
    3. إضافة 5 مل M9 العازلة وأجهزة الطرد المركزي في 450 x ج لمدة 3 دقائق. تجاهل طاف. كرر 3-4X.
    4. في نهاية الطرد المركزي الماضي، إزالة طاف وإضافة 10 مجلدا من محلول هيبوكلوريت الأساسية (0.5 M هيدروكسيد الصوديوم، هيبوكلوريت 1٪ مختلطة طازجة) إلى مكعبات الديدان. في احتضان RT ل~ 10 دقيقة. رد فعل تحلل يمكن رصدها عن طريق وضع قطرة من رد فعل تحلل على ساترة ودراسة الديدان تحت المجهر. عندما يتم تقسيم حوالي 80٪ من الديدان يجب أن تتوقف على رد الفعل.
    5. وقف رد فعل تحلل من قبل الدينز نفس الحجم من العازلة بيضة معقمة.
    6. جمع البيض (والذبائح) بواسطة الطرد المركزي في 450 x ج لمدة 5 دقائق.
    7. غسل البيض مع العازلة بيضة معقمة 2-3X.
    8. احتضان البيض O / N في المخزن M9 والبذور منهم على لوحات NGM القياسية.
  2. الكيميائي الفحص.
    1. إعداد عدة قطع من أجار تقريبا 0.5x0.5x0.5 سم. نحن إيداع أجار في لوحة 10 سم ونقطع قطع أجار من هناك.
    2. نقع قطعة أجار في محلول يحتوي على جاذبة المطلوب (في تشبع، تركيزات شبه تشبع) لمدة 2 ساعة. جاذبة النموذجية هي يسين (0.5 M)، البيوتين (0.2 M).
    3. إيداع صك قطعة أجار في 10 سم لوحة الاختبار الذي تم وضع علامة على مكان وجود بقعة وبقعة اختبار التحكم (الشكل 1A). تسمح موازنة وتشكيل التدرج O / N (الشكل 1B). إعداد 5 لوحات لتجربة واحدة.
    4. قبل التجربة إضافة 10 ميكرولتر من 20 ملي نان 3 (anesthetic) إلى كل بقعة.
    5. وضع 20 الديدان متزامنة العمر في وسط اللوحة. وضع لوحة في الحاضنة عند 20 درجة مئوية.
    6. بعد 1 ساعة، والاعتماد على الحيوانات في الاختبار / مراقبة اماكن وحساب مؤشر الكيميائي، (CI) على النحو التالي: figure-protocol-1 حيث N، N و N اختبار المركز الوطني للاستشعار.، تشير إلى العدد الكلي للحيوانات، وعدد من الحيوانات في بقعة الاختبار وعدد من الحيوانات في بقعة السيطرة.

3. زراعة الخلايا الأولية الجنينية

  1. ليز الديدان كما هو موضح في سن التزامن.
  2. وقف رد فعل تحلل وذلك بإضافة نفس الحجم من العازلة بيضة معقمة وأجهزة الطرد المركزي في 450 x ج لمدة 5 دقائق. تجاهل بلطف طاف والحرص على عدم فقدان البيض مكعبات. كرر 2-3X أو حتى طاف هو واضح.
  3. Resuspend مكعبات البيض (والذبائح) في 2 مل العازلة بيضة معقمة وإضافة 2 مل من العقيمة السكروز 60٪ في المخزن البيض. خلط هذا الحل حتى يتم معلق البيض تماما (لأنها تميل إلى تشكيل كتل تحت الطرد المركزي) باليد أو قبل vortexing.
  4. الطرد المركزي في 450 x ج لمدة 15 دقيقة.
  5. نقل بعناية طاف (يحتوي على بيض) إلى أنبوب العقيمة. تجاهل بيليه الذي يحتوي على الذبائح وغيرها من المنتجات من تحلل.
  6. إزالة السكروز المتبقية عن طريق إعادة التعليق على البيض في المخزن البيض والطرد المركزي في 450 x ج لمدة 5 دقائق. جمع بلطف وتجاهل طاف. كرر 3X.
  7. تحت غطاء محرك السيارة الصفحي resuspend البيض مكعبات في المخزن العقيمة التي تحتوي على البيض 1 U / مل كيتيناز في RT لهضم قشر البيض. بعد 30 دقيقة تبدأ في رصد رد فعل (تحت المجهر مقلوب خلية ثقافة). كل دفعة من كيتيناز لديه نشاط مختلفة قليلا. اكتمال عادة الهضم في 1 ساعة.
  8. عندما يتم هضم ما يقرب من 70-80٪ قشر البيض بواسطة كيتيناز إضافة CM-15 (L-15 خلية ثقافة ميدالبوتاسيوم التي تحتوي على 10٪ مصل بقري جنيني، 50 U / مل البنسلين، و 50 ميكروغرام / مل الستربتوميسين). فصل الخلايا باستخدام حقنة مع مقياس 27. تعليق تصفية الخلية مع 5.0 ميكرون فلتر لإزالة الأجنة سليمة، وكتل من الخلايا واليرقات.
  9. بيليه تعليق خلية فصلها بواسطة الطرد المركزي في 450 x ج لمدة 15 دقيقة. إزالة طاف و resuspend بيليه في CM-15 خلية ثقافة المتوسط.
  10. فصل الخلايا لوحة على غطاء زجاجي زلات المغلفة سابقا مع كتين الفول السوداني (0.1 ملغ / مل) الذائب في الماء ملاحظة: الخلايا يجب أن تلتزم الركيزة من أجل التفريق.
  11. يمكن الحفاظ على الخلايا في RT (16-20 درجة مئوية) في الهواء لمدة أكثر من 2 اسابيع.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مع بروتوكولات لدينا دراسة آثار الإنسان Aβ 42 قليل وحدات في وظيفة الخلايا العصبية 8. وتتسع دائرة أي جزء ترميز Aβ الإنسان (42) وإشارة الببتيد الاصطناعي تسلسل الترميز من النار ناقلات pPD50.52 من بناء PCL12 9 باستخدام بادئات التي ادخلت سما 1 موقع نوكلياز داخلية التقييد في نهايات. ثم تم إدراج جزء في بناء تحتوي على 2،481-BP-6 FLP تسلسل المروج في ناقلات النار pPD95.75 بين فريد سما 1 موقع 10. باستخدام تقنيات التحول هو موضح في...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن هنا وصف نهج موحد، لدراسة الجوانب الخلوية والجزيئية من amylopathies باستخدام C. ايليجانس. مزايا هذا النهج ما يلي: 1) يتم الاحتفاظ منخفضة التكلفة C.elegans في طبق بتري العادية المصنف مع البكتيريا، في درجة حرارة الغرفة. 2) علم الوراثة قوية. ويمكن الحصول على الحيوانات المعدلة وراثيا في بضعة أشهر، ومجموعة واسعة من متواليات المروج هو متاح لدفع التعبير عن الجينات المرغوب في الخلايا العصبية المحددة. 3) بسيطة، وتتميز بشكل جيد، والجهاز العصبي. C. ايليجانس يمتل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر الدكتور شوانغ ليو لقراءة نقدية للمخطوطة. كان PCL12 بناء هدية شكل الدكتور كريستوفر D. رابط. وأيد هذا العمل من قبل اثنين من المنح المؤسسة الوطنية للعلوم (0842708 و 1026958) ومنحة AHA (09GRNT2250529) إلى FS.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

2. عازلة فوسفات البوتاسيوم< / قوي> مقطر < td colspan = "4" >معقم عن طريق التعقيم من الماء < td colspan = "4" ><قوي>4. عازلة البيض (درجة الحموضة 7.3 ، 340 مللي أسم) < / قوي > المقطر < td colspan = "4" > اضبط على 340 مللي أوسالم مع السكروز ثم فلتر معقم في زجاجات معقمة وتخزينها عند 4 درجات ؛ C

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي>1. NGM< / قوي >
كلوريد الصوديومسيجما ألدريتشS58863 جم
أجار بكتريولوجيأمريسكوJ63717 جم
باكتو ببتونأمريسكوJ6362.5 جم
ماءإحضاره إلى 975 مل
كبريتاتالمغنيسيومSigma-AldrichM26431 مل من 1 م مخزون
كلوريد الكالسيومSigma-AldrichC56701 مل من مخزون 1 M
الكوليسترولSigma-AldrichC30451 مل من مخزون 5 مجم / مل (في الإيثانول)
مخزن فوسفات25 مل من مخزون 1M
فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدةسيجما-ألدريتشP5655108.3 جم
فوسفات البوتاسيوم ثنائي القاعدةسيجما-ألدريتشP378635.6 جم
ماءيصل إلى 1 لتر
3. M9 buffer < / قوي >
فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدةSigma-AldrichP56553 جم
فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدةSigma-AldrichS51366 جم
كلوريد الصوديومSigma-AldrichS58865 جم
كبريتات المغنيسيومSigma-AldrichM26431 مل من الماء المقطر 1 متر
المقطرإحضاره إلى 1 لتر
تعقيم عن طريق التعقيم
كلوريد الصوديومسيجما ألدريتشS5886118 ملي
كلوريد البوتاسيومسيجما ألدريتشP540548 ملي
كلوريد الكالسيومسيجما ألدريتشC56702 ملي
كلوريد المغنيسيومسيجما ألدريتشM48802 ملي مولار
هيبسفيشر العلميBP31025 ملم
الماءيصل إلى 1 لتر
معقم عن طريق التعقيم
5. CM-15< / strong>
L-15 متوسطثقافة جيبكو11415450 مل
مصل الأبقار الجنينيجيبكو10437-02850 مل
بنسلينجيبكو1514050 وحدة / مل
ستربتومايسينجيبكو1514050 جم / مل
<قوي>6. الكواشف الأخرى < / قوية >
هالوكربون 700 زيتمنتجات الهالوكربون9002-83-9
5 & م Acrodisc حقنة مرشحPALL Co.4199
كيتينازسيجما ألدريتشC6137-5UN
ليكتين (فول سودي)سيجما ألدريتشL0881-10 ملغ
هيدروكسيد الصوديومفيشر ScientificS320
ليسينسيجما ألدريتشL5501
البيوتينسيجما-ألدريتشB4639
محلولهيبوكلوريت الصوديومسيجما ألدريتش425044
أزيد الصوديومسيجما ألدريتش71289
السكروزسيجما ألدريتشS0389
مقطر < td colspan = "4" > معقم بالتعميم ، ثم أضف العناصر التالية واخلط جيدا البوتاسيوم < td colspan = "4" >

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hardy, J., Allsop, D. Amyloid deposition as the central event in the aetiology of Alzheimer's disease. Trends in Pharmacological Sciences. 12 (10), 383-388 (1991).
  2. Kotzbauer, P. T., Trojanowsk, J. Q., Lee, V. M. Lewy body pathology in Alzheimer's disease. Journal of Molecular Neuroscience. 17 (2), 225-232 (2001).
  3. Greenberg, S. A. Inclusion body myositis: review of recent literature. Current Neurology and Neuroscience Reports. 9 (1), 83-89 (2009).
  4. Revesz, T., et al. Sporadic and familial cerebral amyloid angiopathies. Brain Pathology. 12 (3), 343-357 (2002).
  5. Hartmann, T., et al. Distinct sites of intracellular production for Alzheimer's disease A beta40/42 amyloid peptides. Nature Medicine. 3 (9), 1016-1020 (1997).
  6. Ohnishi, S., Takano, K. Amyloid fibrils from the viewpoint of protein folding. Cellular and Molecular Life sciences: CMLS. 61 (5), 511-524 (2004).
  7. C. elegans II. Cold Spring Harbor Monograph. DL, R. iddle, et al. 1, M. 33, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor. 1222(1997).
  8. Cotella, D., et al. Toxic role of k+ channel oxidation in Mammalian brain. The Journal of Neuroscience: the official journal of the Society for Neuroscience. 32 (12), 4133-4144 (2012).
  9. Link, C. D. Expression of human beta-amyloid peptide in transgenic Caenorhabditis elegans. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (20), 9368-9372 (1995).
  10. Cai, S. Q., Sesti, F. Oxidation of a potassium channel causes progressive sensory function loss during aging. Nature Neuroscience. 12 (5), 611-617 (2009).
  11. Yu, S., et al. Guanylyl cyclase expression in specific sensory neurons: a new family of chemosensory receptors. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 3384-3387 (1997).
  12. Bargmann, C. I., Horvitz, H. R. Chemosensory neurons with overlapping functions direct chemotaxis to multiple chemicals in C. elegans. Neuron. 7 (5), 729-742 (1991).
  13. Caserta, T. M., et al. Q-VD-OPh, a broad spectrum caspase inhibitor with potent antiapoptotic properties. Apoptosis : an international journal on programmed cell death. 8 (4), 345-352 (2003).
  14. Christensen, M., et al. A primary culture system for functional analysis of C. elegans neurons and muscle cells. Neuron. 33 (4), 503-514 (2002).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

C elegans SE GFP

مقالات ذات صلة