هنا، نقدم طريقة لتحليل المجهر الضوئي للخلايا القصبة الهوائية في محطة ذبابة الفاكهة اليرقات. هذا الأسلوب يسمح للفحص السريع للفرع والتشكل التجويف في الحيوانات كلها وسيكون من المفيد تحليل المسوخ الفردية أو شاشات لالطفرات التي تؤثر على تطور الخلايا الطرفية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
شكل الخلية أمر بالغ الأهمية لوظيفة الخلية. ومع ذلك، على الرغم من أهمية مورفولوجيا الخلايا، لا يعرف إلا القليل حول كيفية الخلايا الفردية توليد الأشكال محددة. ذبابة الفاكهة الخلايا محطة القصبة الهوائية أصبحت نموذجا الوراثية قوية لتحديد وتوضيح دور كل من الجينات المطلوبة لتوليد الأشكال التضاريسية الخلوية. الخلايا محطة هي مكون من مكونات شبكة أنبوبية متفرعة، ونظام القصبة الهوائية الذي يعمل على توريد الأكسجين إلى الأنسجة الداخلية. الخلايا محطة هي نموذج ممتاز للتحقيق في الأسئلة من شكل الخلية كما أنها تمتلك اثنين من أبنية الخلوية متميزة. أولا، خلايا محطة لها مورفولوجيا متفرعة تفصيلا، على غرار الخلايا العصبية المعقدة، وثانيا، يتم تشكيل فروع الخلية محطة وأنابيب رقيقة وتحتوي على تجويف داخل الخلايا غشاء محدد. التحليل الكمي من محطة الخلية رقم الفرع، تنظيم فرع وشكل فرع الفردية، ويمكن استخدامها لتقديم معلومات حول دور الميكانيكية وراثية محددةanisms في صنع خلية متفرعة. تحليل تشكيل أنبوب في هذه الخلايا يمكن أن تكشف عن آليات الحفظ من tubulogenesis مشتركة لشبكات أنبوبي الأخرى، مثل الأوعية الدموية الفقارية. نحن هنا وصف التقنيات التي يمكن استخدامها لإصلاح بسرعة، صورة، وتحليل كل أنماط المتفرعة وتشكيل أنبوب في الخلايا الطرفية داخل يرقات ذبابة الفاكهة. هذه التقنيات يمكن استخدامها لتحليل الخلايا الطرفية في البرية من نوع ومتحولة الحيوانات، أو الفسيفساء الوراثية. بسبب الكفاءة العالية من هذا البروتوكول، وأيضا مناسبة تماما لأنها وراثية، المستندة إلى رني، أو شاشات المخدرات في النظام القصبة الهوائية ذبابة الفاكهة.
المقدمة
شكل الخلية هو أمر حاسم لوظيفة الخلايا الفردية داخل الكائن الحي، وكذلك الخلايا التي وظيفة كجزء من النسيج أو العضو. نحن نستخدم خلايا ذبابة الفاكهة محطة القصبة الهوائية، وهو مكون من الجهاز التنفسي الحشرات، للتحقيق في الآليات الجزيئية التي تشارك في السيطرة على نوعين الحفظ من التشكل الخلوي: المتفرعة وتشكيل أنبوب (lumenogenesis). وتقع محطة الخلايا على نصائح من شبكة من أنابيب متفرعة الذي يعمل على إيصال الأوكسجين إلى الأنسجة الداخلية (1) ولها مورفولوجيا متفرعة معقدة والتي تعتمد على مسار الإشارات جمعية جيل المستقبل التي تسيطر عليها مستويات الاوكسجين المحلية داخل الأنسجة المستهدفة 2. فروع الخلية محطة هي أنا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. الجيل فسيفساء
- الصليب الوراثية
ث FRT 19A الحوض: GAL80 FLP 122 / Y؛ زجاجة، GAL4، UAS GFP-(ذكور) X * FRT 19A / بال (الإناث)، حيث * يمثل متحولة لفحصها. ملاحظة: إعداد عبور يوم واحد على الأقل قبل التجربة، وهذا يسمح للحيوانات لزميله بشكل مناسب. - قبل العلمانيين: تحويل الصليب إلى قارورة يطير الغذاء مع مسحة صغيرة من معجون الخميرة الطازجة وضعها على وسائل الإعلام. السماح لوضع لمدة 1 ساعة عند 25 درجة ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وتظهر النتائج في الشكل 2. مجموعة الوحشي واحدة (LG) خلية محطة يظهر المتفرعة التحت خلوية واسعة النطاق (تصور من قبل GFP؛ A) والتجويف التحت خلوية مليئة بالغاز من خلال تشغيل كل فرع من الفروع (تصور من قبل المجهري brightfield؛ B). وقد جمعت هذه الصور من فسيفساء L3 يرقة، تم إنشاؤها باستخدام نظام MARCM المبينة في القسمين 1 و 2، وحرارة ثابتة وتصويرها، كما هو موضح في البابين 3 و 4. لوحات C & D إظهار أثر NeuronJ ولدت، كما هو موضح في القسم 5، من فروع والتجويف على التوالي من.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تقنية تثبيت حرارة الموصوفة هنا هي أداة سريعة ومريحة للتصوير ذبابة الفاكهة اليرقات الخلايا محطة القصبة الهوائية. هنا، ونحن نستخدم هذه التقنية لدراسة المتفرعة ونمط التجويف من الخلايا من النوع البري. خلايا القصبة الهوائية معربا عن GFP، مدفوعا المروج محددة القصبة الهوائية لاهث، يمكن تصور بسهولة من خلال بشرة اليرقات بعد تثبيت الحرارة. أنماط معينة من الخلايا المتفرعة محطة الفردية، فضلا عن تلك لمعة مليئة بالهواء، ويمكن أن يكون سريعا تصور وقياسها باستخدام هذا الأسلوب. وي.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن الكتاب أن لديهم أي مصلحة مالية المتنافسة.
شكر وتقدير
نشكر جيليان ستانفيلد للتعليق على المخطوطة. ويدعم TAJ من جامعة يوتا علم الوراثة تدريب جرانت T32-GM007464 من NIGMS المعاهد الوطنية للصحة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الطالب دومون # 5 ملقط | أدوات علمية دقيقة | 91150-20 | |
| Leica MZ16 مجهر تشريح (أو ما يعادله) | Leica | MZ16 | |
| AxioImager M1 (أو ما يعادله) | كارل زايس | مجهز ب AxioCam MRm و A-PLAN 10X / 0.25 و EC PLAN-NEOFLUAR20X / 0.5 ، مجموعة المرشحات 38HE | |
| 100٪ Glycerol | BioExpress | M152-4L | |
| الجيني لمخزون | الذبابة: ث FRT19A الحوض: GAL80 FLP122 ؛ Btl-GAL4 ، UAS-GFP y w FRT19A | ||
| النمط الجيني لمخزون | الذبابة: y w FRT19A |
المراجع
- Manning, G., Krasnow, M. A. Development of the Drosophila Tracheal System. The Development of Drosophila melanogaster. , 609-685 (1993).
- Jarecki, J., Johnson, E., Krasnow, M. A. Oxygen regulation of airway branching in Drosophila is mediated by branchless FGF. Cell.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
