نحن تصف تشريح الجهاز العصبي من الأرنب البحر البحرية Aplysia بعد التخدير، وعزل الخلايا العصبية للثقافة الأجل القصير الأنسجة، وتسجيلات لاحد التيارات ايون خلية عبر تقنية المشبك التصحيح.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
البحرية بطني الأرجل الرخويات Aplysia californica لديها تاريخ الجليلة كنموذج من وظيفة الجهاز العصبي، مع أهمية خاصة في دراسات التعلم والذاكرة. التحضيرات نموذجية لمثل هذه الدراسات هي تلك التي يتم ترك الحسية والعصبونات الحركية سليمة في تشريح الحيوان الحد الأدنى، أو تفصيلا تقنيا العصبية الثقافة المشتركة الحسي للفرد والعصبونات الحركية. أقل شيوعا هو إعداد الخلايا العصبية معزولة في الذي مجموعات صغيرة من الخلايا العصبية المتجانسة أبعاده هي نأت إلى خلايا مفردة في الثقافة على المدى القصير. مثل هذه الخلايا المعزولة هي مفيدة لتوصيف البيوفيزيائية من التيارات أيون باستخدام تقنيات المشبك التصحيح، وتعديل المستهدفة من هذه المواصلة. يوصف بروتوكول لإعداد مثل هذه الثقافات. بروتوكول يستفيد من التعرف عليها بسهولة الخلايا العصبية الحسية الجلوتاميرجي من العقد الجنبي والشدق، ويصف التفكك والحد الأدنى من الصيانة طثقافة ن لعدة أيام دون المصل.
المقدمة
كان الرخوي opistobranch البحرية، Aplysia، وهذا نموذج العصبية الحيوية مفيدة لعدة عقود. ومن المعروف أنها نموذج من التعود وتكييف الكلاسيكية 7، 8. فاز دراسات عن التعلم والذاكرة في هذا النموذج على جائزة نوبل في علم وظائف الأعضاء أو الطب في عام 2000 لاريك كاندل R.، في الجائزة التي تقاسمها مع أرفيد كارلسون وبول غرينغارد 10. دراسات شملت التسجيلات الكهربائية من انخفاض الاستعدادات، التي يتم تشريح عناصر الجهاز العصبي من هذه اللافقاريات من الحيوان مع الأعصاب والعضلات غادر المرفقة، وقد ساعدت توضيح أدوار الخلايا العصبية الفردية في Aplysia. تحديد الآليات الجزيئية الدقيقة التي تشكل التعلم في Aplysia ومع ذلك، غالبا ما تستخدم أسلوب آخر، على المدى الطويل المشترك الثقافات من الخلايا العصبية الحسية والعصبون الحركي، التي تم الحصول عليها واحدا تلو الآخر من الحيوانات المانحة الفردية وسمح لتشكيل المشبك في صحن الثقافة 21 .
نحن وغيرنا 1، 3، 6، 14، 15، 16 لقد استغل السهولة التي تم تحديدها يمكن استهداف الخلايا العصبية في هذا النموذج، وكذلك قدرتهم على التحمل في تجارب طويلة الأمد لجعل الثقافات المدى القصير فصلها من مجموعات من الخلايا العصبية المتجانسة أبعاده التي ندرس التيارات الأيونية تحت المشبك الجهد في تكوين المشبك التصحيح. العديد من الخلايا العصبية Aplysia الوقوف في جولات متكررة من التصحيح لقط لإتاحة الوقت للالتلاعب التجريبية طويلة الأمد. هذه التقنية مفيدة للخلايا العصبية مثل الخلايا الإفرازية العصبية كيس من العقدة في البطن، والخلايا العصبية الحسية في العقد الجنبي والشدق التي تفارق وصفنا هنا، ولكن ليس لالخلايا العصبية كبيرة جدا> 60 ميكرومتر في القطر، مثل L7 أو R2 من العقدة في البطن. نحن لا توظف Aplysia المصل في ثقافاتنا، على عكس الحسية العصبون الحركي المشترك الثقافات صفه في مكان آخر. ومعظم الخلايا العصبية التي تم الحصول عليها باستخدام هذا الإجراء أن يكون من دون عمليات لركان أول الموارد البشرية 48 في الثقافة، وتسهيل كامل الخلية تسجيل الجهد، ولكن بعد ذلك سوف تنبت وبلورة المحاور وغيرها من العمليات لحوالي 14 يوما قبل أن يموت من نقص المواد الغذائية و / أو عوامل النمو.
هذه التقنية تنتج الثقافات الأولية من 50-100 الخلايا العصبية في طبق من مناطق موثقة من الناحية الفسيولوجية من العقد الشدق والجنبي. هذا البروتوكول هو مفيد للباحثين دراسة جوانب من علم وظائف الأعضاء خلية واحدة في التجارب التي تتطلب العديد من التجارب مكررات لكل حيوان. وتنتج زوج متطابق من الثقافات بسبب الفصل التشريحي للخلايا المستهدفة في hemiganglia اليسار واليمين، والسماح الدراسات التي تستفيد من العلاج الملائمة والثقافات السيطرة.
بروتوكول يستهدف الشدق S الكتلة (BSC) الخلايا العصبية من العقدة الشدق، والجنبي ventrocaudal (PVC) الخلايا العصبية من العقدة الجنبي. هذه الخلايا هي الحجم المناسب للتسجيلات كله جهد الخلية وrobus العرضر استجابات الجلوتاميرجي. المنهجية التي نوقشت هي مناسبة لمعظم العقد في الجهاز العصبي Aplysia.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. إعداد الخلية
- في يوم 1، وتزن تخدير الحيوان.
- تزن 30 جم، 1 كجم الحيوان. تخدير في حجم الحيوان 5-10 1:1 مياه البحر: MgCl متساوي التوتر. 6H 2 لمدة 1 ساعة مع تحريك مثل مضخة الهواء حوض السمك الكهربائية مع airstone المرفقة 0.
- إعداد لوازم تشريح.
- تجميع علبة تشريح نظيفة مع الفولاذ المقاوم للصدأ الدبابيس المستقيمة، مثل المسامير النسيج. تجميع عدة أطباق بتري تحتوي على مياه البحر الاصطناعي (ASW؛ انظر الجدولين 1 و 3) + البنسلين / الستربتوميسين (P / S).
- هل لديك استعداد لمجهر ضوئي بقوة خفيفة. هل لديك أدوات تشريح نظيفة جاهزة، مثل الأنف مضلع وملقط جراحي غرامة، والغرامة ومقص جراحي كبير. رش الصكوك مع 70٪ isopropol الكحول قبل استخدام والسماح ليجف.
- حيوان موقف على علبة تشريح.
- موقف الحيوان الجانب البطني أسفل في علبة تشريح. الحيوان دبوسمن خلال حواف جدار الجسم والحدود parapodial، ولكن تجنب الذيل والرأس، لفضح السطح الظهري والأخدود الأعضاء التناسلية
- شطف السطح الظهري في بطء تشغيل ماء الصنبور البارد. تطبيق تيار ضوء من 70٪ isopropol الكحول من زجاجة ضغط على طول الأخدود الأعضاء التناسلية وعلى الجزء العلوي من الرأس.
- جعل شق الأولي.
- باستخدام المجهر منخفضة الطاقة (انظر الجدول رقم 2) والضوء المنعكس لمراقبة نقطة حيث ينشأ أخدود الأعضاء التناسلية من الهامش قذيفة الأمامي، عقد بانشداد مع ملقط مضلع الأنف أضعاف من الأنسجة إلى اليسار من هذا الأصل، بينما القص ضحل حفرة على طول الطريق من خلال، مساحة الشقة السلس للجدار الجسم فقط إلى يمين الأخدود الأعضاء التناسلية مع مقص الزاوية غرامة.
- ينبغي مراعاة الدملمف لتصب من الحفرة، تحمل أحيانا معها العقدة في البطن والمعدة.
- توسيع شق.
- استخدام مقص كبير لتوسيع اله شق الأمامية إلى نقطة بين rhinophores، في حين سحب التصاعدي مع انخفاض شفرة لتجنب الخدش القناة الهضمية. وسيراعى في الأعضاء الداخلية لسفك للخروج من شق.
- إزالة العقد.
- إعادة الدرج وإعادة تركيز المجهر على منطقة الرأس.
- باستخدام ملقط نظيفة ومقص غرامة، وإزالة العقد رئيس بقطع عند نقطة واحدة في الأعصاب التي تشكل العقد رئيس في حلقة حول المريء لإزالة الجنبي-دواسة والدماغية العقد كمجموعة.
- إزالة العقدة الشدق أن تلتزم الجانب البطني من المريء.
- إزالة العقدة في البطن عن طريق قطع 4 أدوات الوصل العصبية الكبيرة هذه المسألة من هذه العقدة.
- عزل العقد من الفائدة.
- تقليم العقد الرأس بعيدا، وترك طول من حروف العطف تعلق على كل عقدة من الفائدة التي تساوي على الأقل القطر من العقدة، وهذا سوف تؤخر انزيم الإفراط في الهضممن الخلايا من الفائدة في الخطوة التالية.
- وضع كل العقدة الهدف من خلال 2 يشطف من ASW + P / S، والانتقال بين يشطف مع ملقط نظيفة.
- إذا استهداف الخلايا PVC، وترك hemiganglion الجنبي حق تعلق على حق hemiganglion دواسة، وترك بالمثل hemiganglion الجنبي اليسار تعلق على hemiganglion دواسة اليسار.
- تجاهل العقد غير المرغوب فيها وبقية الحيوانات وفقا للممارسة البحوث المقبولة.
- هضم إنزيمي في العقد.
- لكل عقدة، وإعداد 1 مل من محلول أنزيم تتألف من 3.75 ملغ dispase، 1 ملغ هيالورونيداز و 0.3 غرام كولاجيناز نوع الحادي عشر لكل مل من ASW + P / S في 15 مل أنبوب البولي بروبلين المخروطية.
- مكان تشطف العقد في حل الانزيم ونعلق الغطاء بإحكام. وضع أنبوب على جانبها على شاكر دوارة (انظر الجدول رقم 2) على سرعة بطيئة ل13-5 ساعة بين عشية وضحاها في حوالي 23 درجة مئوية (درجة حرارة الغرفة).
- إعدادأطباق الثقافة.
- قبل تسليخ مجهري (يوم 2)، وإعداد بولي-D-يسين (PDL) المغلفة أطباق الثقافة في نسيج الثقافة هود. إضافة ~ 0.5 مل PDL (0.2 ملغ / مل من الماء المعقم) إلى وسط صحن 35 ملم ل~ 25 دقيقة.
- شطف PDL 3x مع الماء المعقم. السماح ليجف. الأشعة فوق البنفسجية تعقيم لوحات.
- يوم 2 عزل الخلايا العصبية.
- ملء وسط 35 ملم الأطباق التي كانت PDL المغلفة والأشعة فوق البنفسجية معقم مع ما يقرب من 0.5 مل من ASW + P / S لإنشاء جزيرة وسائل الإعلام داخل صحن جاف خلاف ذلك. ويمكن أن يتم هذا على مقاعد البدلاء، خارج نسيج الثقافة هود. وينبغي إعداد طبق واحد عن كل مجموعة الخلايا التي تنشأ من hemiganglion.
- هل لديك استعداد ل100 مم طبق تشريح أدلى به sylgard طلاء وعلاج لمدة 5 مم عميق سطح تشريح، تجهيزه مع دبابيس تشريح غرامة من عدة أحجام لأن تستخدم الدبابيس وتحقيقات (انظر الجدول 3). شطف هذا الطبق مع 70٪ isopropol الكحول، ثم مع ASW + P / S، وأخيرا فايليرة لبنانية مع ASW + P / S.
- إعداد تسليخ مجهري من العقد هضمها.
- من أجل حل الانزيم الذي يحتوي على هضمها الجنبي-دواسة والشدق العقد في طبق تشريح.
- ضع الطبق على مرحلة من مراحل المجهر ضد السطح الأسود تحت الضوء المنعكس.
- استخدام النسيج الضام المرفقة، أحدد كل الجنبي-دواسة hemiganglion الجانب الظهري تصل. فإن الأنسجة تكون لينة وغير متسامحة من التمدد.
- Microdissect الخلايا العصبية PVC.
- باستخدام 2 أزواج من ملقط غرامة نظيفة، وعقد دبوس تشريح غرامة في زوج واحد من ملقط باعتباره التحقيق، عزل الخلايا PVC من hemiganglion الجنبي. انزيم الهضم سيكون قد إزالة أو تمزق غلاف النسيج الضام الذي يغطي كتلة PVC، ومع ذلك فإن الخلايا سوف تلتزم واحد آخر.
- استخدام مسبار لفصل هذه الخلايا من الضام دواسة الجنبي 18، ثم السماح للسقوط كتلة الخلية إلى الجزء السفلي من تشريحطبق.
- نقل الخلايا العصبية إلى صحن الثقافة.
- نقل الكتلة الخلية إلى المعدة 35 مم طبق الثقافة عن طريق مص بلطف صعودا الكتلة إلى غيض من النار قليلا مصقول ماصة باستير الزجاج القابل للتصرف، ثم الاستغناء ببطء في الجزيرة وسائل الاعلام في صحن الثقافة، والحرص على تجنب إدخال فقاعات الهواء في ماصة. تكرار العزلة من الكتلة PVC من hemiganglion وأماكن أخرى في طبق ثقافة منفصلة.
- Microdissect ونقل الخلايا العصبية BSC.
- يعلقون بها على الشدق العقدة الجانب البطني أعلى، مع الحرص على تجنيب خلايا الفائدة. كرر الخطوة 1.12 مع 2 BSC مجموعات الخلايا من العقدة الشدق 10.
- سوف عزل PVC وBSC الخلايا العصبية تنتج 4 أطباق الثقافة التي تحتوي على مجموعات الخلايا العصبية: 2 الأطباق التي تحتوي على مجموعات BSC و 2 الأطباق التي تحتوي على مجموعات PVC. تجاهل بقية العقد وتوضع جانبا على طبق 100 ملم تشريح.
- DissocIATE المجموعات الخلية.
- وضع طبق الثقافة التي تحتوي على خلايا في مرحلة مجهر ضوئي بقوة خفيفة وإزالة الغطاء.
- فصل الكتلة PVC بواسطة عبها بلطف الجزء السفلي من صحن الثقافة المتاخمة للكتلة الخلية مع دبوس تشريح غرامة عقد في ملقط. عبها يتم حفر غيض من دبوس في البلاستيك من الجزء السفلي من طبق كما لو تحاول انتشال البقعة من البلاستيك. عندما الاحتكاك مع البلاستيك تطلق نقطة دبوس، وينتج موجة قرع من خلال وسيلة أن ينهار في أجمة القريبة من الخلايا.
- قد تكون هناك حاجة إلى ما يقرب من 5-10 نقرات تنأى تماما الخلايا، ولكن من الأفضل أن تترك مجموعات صغيرة من الخلايا بدلا من نفض الغبار كثيرا لئلا يتم تدمير الخلايا عن طريق محض الميكانيكية.
- محل تغطية وكرر مع أطباق ثقافة أخرى.
- تخزين الثقافات الخلية.
- ضع الأطباق الثقافة التي تحتوي على الجزر وسائل الإعلام في مراكزهم مع فصل الخلايا فيوعاء كبير أن يسمح دوران الهواء، مثل × 25 ملم جولة البلاستيك طبق بتري 150، ووضع هذا الطبق في مجموعة حاضنة إلى 17 درجة مئوية.
- تثبيت في غرفة مفتوحة طبق من الماء كمصدر للرطوبة. ترك بين عشية وضحاها دون عائق. الخلايا سوف تتمسك طلاء بولي-D-يسين في وسط الطبق.
- أطباق ثقافة الفيضانات.
- في يوم 3، والفيضانات بلطف الأطباق مع 2.5 مل من ASW + P / S. دراسة وعد الخلايا باستخدام المجهر مقلوب خلية ثقافة. متجر في 17 درجة مئوية الحاضنة.
2. الكهربية
الأسلوب هو معيار التصحيح لقط التي تم وصفها في النصوص العديدة (مثل Sakmann وNeher، 1995) 16. سوف يشكل هذا البروتوكول يعمل على خلايا ≤ 100 السعة PF، أو خلايا <60 ميكرومتر في القطر خلال أيام 3 و 4 من البروتوكول. الخلايا دون العمليات هي الأمثل للتسجيل. وconsiderat الخاصة التاليةتطبيق أيونات:
- يمكن استيعاب الخلايا أكبر مع إعداد التكوين على مكبر للصوت 200B Axopatch لتعيين β = 0.1. تفعيل تيارات كبيرة جدا قد يسبب الخلايا للهروب المشبك الجهد. حلول ASW بديلا عن محتوى الملح (على سبيل المثال جزء من كلوريد الصوديوم كلوريد استبداله مع كتيمة N-methy-D-glucamine) يمكن استخدامها للحد من كامل السعة الحالية الخلية.
- الألياف المليئة ماصات التصحيح البورسليكات سحبت على مجتذب ماصة وردم في منتصف الطريق مع الحل داخل الخلايا (ICS)، ويتألف من 450 ملي بوكل والأملاح الأخرى (انظر الجدول 1) هي مناسبة، وينبغي أن يكون مقاومة من حوالي 0.5-1 MOhms. إذا كان المطلوب عزل التيارات الأيونية محددة، على سبيل المثال، نا + يمكن استبدال التيارات في غياب التيارات K، K + في هذا الحل مع الأيونات الأخرى مثل جيم +. هناك ما يبرر استبدال ICS مع أنيون impermeant أيضا إذا هو المطلوب ICS أكثر طبيعية - CL9.
- كانت الخلايا قوية مع> 1 تسجيلات لمدة ساعة ممكن في درجة حرارة الغرفة. تسجيل هو الأمثل في أيام 3 و 4 من البروتوكول، أي ما يعادل 24-48 ساعة في الثقافة. بعد 48 ساعة هناك صعوبة تشكيل الأختام gigaOhm، ربما بسبب وضع الكنان السكري على سطح الخلية، والمشاكل الناجمة عن المشبك الفضاء ثمرة عملية. الخلايا هي مفيدة، ولكن لدراسات المشبك غير التصحيح، مثل علم السموم، والتي يمكن الانتهاء منها في <14 د.
- ASW وغيرها من الحلول إلى الاستغناء عن بالجاذبية جهاز حل، فضلا عن حل داخل الخلايا، يجب أن تتم تصفيته من خلال حقنة محمولة على 0.2 ميكرومتر Acrodisk مرشح (الجدول 3) للقضاء على الجسيمات الدقيقة التي تتداخل مع gigaOhm تشكيل الختم.
- تحدث الحساسية عند استخدام منبهات مثل D-الأسبارتات (D-ASP)، ولذلك ~ 1-2 دقيقة بين التطبيقات من منبهات ويوصى. وعلى العكس، وغالبا ما لوحظ التقوية مع تطبيق صحيفة السريع المتكررةالموجبة للمنبهات مثل L-الغلوتامات (L-غلو).
- ناهض التيارات تفعيلها مثل L-غلو يمكن دراستها عن طريق تطبيق منبهات مع picospritzer ماصة. يتم سحب هذه ماصة نفس ماصة التصحيح ويحتوي ناهض في ASW. عندما يتم وضع هذا غيض من ماصة تحت أنبوب تدفق خطورة الاحتياطي الفيدرالي جهاز حل، وعلى زاوية 45 درجة من أنبوب تدفق (الشكل 2F)، وناهض غسلها بسرعة بعيدا عن الخلية، وسوف يكون الحد الأدنى الحساسية. يجب ماصة ناهض خلق بزاوية 90 درجة أو أكثر نسبة إلى ماصة التصحيح.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
مواقع الخلايا العصبية الحسية في العقد التي تستهدف في هذا البروتوكول، وتظهر الخلايا العصبية BSC وPVC في الشكل 1. توجد الخلايا العصبية BSC في 2 مجموعات متناظرة البيضاوي على الجانب البطني من العقدة الشدق، والسطح الذي يواجه بعيدا عن الكتلة الشدق في العقدة سليمة (الشكل 1A). الخلايا العصبية PVC تشكل، على شكل V مجموعات الثنائية التي يلتف حول السطح الظهري من العقدة الجنبي نحو المحور المركزي (1B الشكل). هذه الخلايا العصبية الحسية لديها ميز...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
التقنيات تفارق الموصوفة هنا تسفر الثقافات الخلايا العصبية الحسية التي تحتوي على الخلايا العصبية معزولة 50-100 تتخللها أعداد صغيرة من الخلايا الدبقية والخلايا الأخرى مجهولة الهوية. الخطوات الأكثر أهمية في البروتوكول هي المرة تبقى العقد في حل الانزيم، والتحريك، وتفارق من مجموعات الخلايا هضمها لتحطيم الكتلة إلى الخلايا الفردية. يجب أن يكون الأمثل انزيم الهضم (الخطوة 1.8) في درجة الحرارة المتاحة. في 23 درجة مئوية مع الهز بطيئة، 13 ساعة كافية لهضم BSC مجموعات while15 الموارد البشرية هو...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
شكر وتقدير
بتمويل من المعاهد الوطنية للصحة P40 OD010952، ومؤسسة Korein، في جامعة ميامي زمالة إلى SLC وزمالة مايتاغ إلى ATK. المؤلفين الامتنان موظفي الموارد الوطنية للAplysia، وكذلك لورين Simonitis وهانا بيك، الذين قدموا الميكروسكوب لشخصية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مياه البحر الاصطناعية ASW | Sigma-Aldrich | (مللي متر): 417 كلوريد الصوديوم ، 10 كيلو كلوريد ، 10 كلوريد أمليوم < فرعي >2< / فرعي > (2 ساعة < فرعية > 2 < / فرعية > ، 5 ملغ كلوريد < فرعي > 2 < / فرعي > (6 ساعات < فرعية > 2 < / فرعي > ، 15 هيبيس-هيدروكسيد الصوديوم ، درجة الحموضة 7.6 | |
| محلول داخل الخلايا | سيجما | متنوع | (مللي مول): 450 كيلو كلوريل ، 2.9 CaCl2 (2 H2O), 2.5 MgCl2 (6 H2O), 5 Na2ATP, 10 EGTA, و 40 HEPES-KOH, pH 7.4 |
| Poly-D-lysine | Sigma | P6407 | |
| تمت إضافة البنسلين / الستربتومايسين إلى ASW في الساعة 1:100 | Lonzo Walkersville، Inc. | 17-603E | 5,000 وحدة / مل البنسلين بالإضافة إلى 5,000 مجم / مل من الستربتومايسين |
| التباين المحايد II | Roche Diagnostics | 10165859001 | |
| هيالورونيداز | سيجما ألدريتش | H4272 | |
| نوع الكولاجيناز الحادي عشر | سيجما ألدريتش | C9407 | ؛ |
| L-Glutamate (L-Glu) | Sigma-Aldrich | 49601-100G | |
| D-Aspartate (D-Asp) | Sigma-Aldrich | 11200-10G | |
| N-methyl-D-aspartate (NMDA) | Biomol | 100002-268 | |
| L-Asp | Sigma | A6683-25G | |
| ألفا أمينو-3-هيدروكسيل-5-ميثيل-4-إيزوكسازول-حمض بروبيونيك (AMPA) | سيجما | A6816-5MG | |
| خصوم L-Glu R | مختلفة | مختلفة | |
| agar | |||
| kynurenate | Sigma-Aldrich | 61250 | |
| APV | سيجما ألدريتش | A5282 | ؛ |
| حمض DL-2-أمينو-5-فوسفونوبينتانويك (مضاد NMDAR) | |||
| 2-بروبانول | VWRSP | BDH1133 | |
| محلول كلوريديج | سيجما | متنوع | 25 جم FeCl 3 < / sub > + 25 مل HCl مركز + 50 مل H2< / sub>O |
| سيليكون سيليكون 2 جزء بوليمر | أدوات الدقة العالمية (WPI) | SYL184 | يوفر سطحا دبوسيا لأطباق التشريح |
| الصغيرة 0-40x مجهر تكبير التكبير للتشريح | Wild | & nbsp ؛ | |
| Techniquip 150 واط الألياف البصرية الإضاءة | ميكروبصرية من فلوريدا | TQ FOI-150 | ؛ |
| روتوميكس 50800 خلاط | |||
| مجهر نيكون ديافوت مقلوب بتباين الطور مع أهداف 4x و 20x (اختياري) و 40x | Research Ltd. | Eyelink II | |
| راسم الذبذبات الرقمي Tektronix | SR Research Ltd. | ||
| pClamp 10 برامج الحصول على البيانات وتحليلها | الأجهزة الجزيئية | ||
| جهاز كمبيوتر يعمل بنظام التشغيل Windows XP أو أعلى | PC Solutions | Thinkserver مع محركات أقراص صلبة ذات حالة صلبة (80 جيجابايت) وشاشات منخفضة الضوضاء | |
| مشتعل / براون P87 مجتذب ماصة | صغيرة Sutter Instruments, Novato, CA | & nbsp; | |
| المشبك Axopatch 200B من Axon Instruments مع نطاق تعويض السعة من 1-1000 pF ؛ | الجزيئية المضخم المسبق ، Sunnyvale ، CA | & nbsp ؛ | |
| مجموعة حامل القطب الكهربائي لأدوات Axon 200B Preamplifier | الأجهزة الجزيئية ، Sunnyvale ، CA | CV203BU | ؛ |
| Digidata 1200 A / D محول | الأجهزة الجزيئية ، Sunnyvale ، CA | & nbsp ؛ | |
| Picospritzer ، مدعوم من N2 قابل للتعديل للضغط والمدة | Parker Hannifin ، كليفلاند ، أوهايو | & nbsp ؛ | |
| TMC Micro-G طاولة عزل الاهتزاز | Ametek | ||
| فاراداي قفص | تصنيع مخصص | ||
| Burleigh Piezoelectric صدفي Micromanipulators | أدوات Burleigh ؛ Thorlabs | حاليا PCS-5000 ؛ -6000 سلسلة + يتصاعد | |
| Narishige M-152 معالجات يدوية (لنظام التروية و picospritzer) | Narishige USA | & nbsp ؛ | |
| زجاج ماصة خيوط ، 1.5 مم OD ، معرف 0.84 مم - | WPI | 1B150-3 | & nbsp ؛ |
| 3 بوصة | |||
| Ag / AgCl نصف خلية | WPI | EP4 | ؛ |
| أنابيب الطرد المركزي سعة 15 مل ، 35-2097 BD Falcon * أنابيب الطرد المركزي | VWRSP | 21008-918 | ؛ |
| العلوم الدقيقة للمقص الزاوي | 15006-09 | ||
| Dumostar ملقط دقيق | أدوات العلوم الدقيقة | 11295-00 | |
| 35 مم أطباق ثقافة أنسجة الصقر | VWRSP | 25382-064 | ؛ |
| أطباق زراعة الأنسجة Falcon 150 × 25 مم ؛ 1013 | VWRSP | 1013 | يمكن أيضا تحويلها إلى أطباق تشريح صغيرة باستخدام sylgard |
| sylgard | WPI | SYL184 | ؛ |
| صينية تشريح | مختلفة | ||
| أنابيب الطرد المركزي سعة 15 مل ، 35-2097 BD Falcon | VWRSP | 21008-918 | لنظام التروية الذي يتم تغذيته بالجاذبية ذو 6 تجويف |
| مقاطع ألومنيوم مع نهايات ثقب المسمار | متجر | لنظام التروية | |
| 23 إبر قياس (نقاط إيقاف الملف يدويا) | VWRSP | لنظام التروية | |
| أنابيب البولي إيثيلين 0.022 "معرف × 0.042" OD ؛ 427411 | بيكتون ديكنسون | ل نظام التروية | |
| H-7 حامل / حامل ماصة لمجموعة التروية الصغيرة | Narishige الولايات المتحدة الأمريكية | لنظام التروية | |
| صمامات | لنظام التروية | ||
| Drummond Microcaps 1 & mu ؛ ل | VWRSP | لنظام التروية | |
| 18 إبر قياس للشفط (إيداع قبالة النقاط) | ؛ | ||
| أنابيب البولي إيثيلين | كول بارمر | 4.27436E + 11 | ؛ |
| دبابيس تشريح دقيقة | أدوات العلوم الدقيقة | 26002-20 | |
| أنابيب شعرية | Kimble 71900-100 | مصقولة بالنار وعلى شكل حرف U في لهب موقد بنسن ومليئة بأجار 3٪ في | |
| الحرف | اليدوية للنمذجة | ECS ؛ | |
| حامل طبق لمرحلة المجهر مع حمام | تصنيع | ||
| مخصص ماصات باستور | VWRSP | 14672-412 | ؛ |
| لمبات الماصة | VWRSP | 53283-911 | ؛ |
| مرشحات حقنة acrodisk | VWRSP | 28144-040 | |
| خيوط البورسليكات بقطر 1.5 مم سميك | الجدران WPI | 1B150F-3 | & nbsp ؛ |
| أسطوانة النيتروجين عالية النقاء ومنظم | ؛ | ||
الجداول 1-3. قوائم الكواشف والمواد والمعدات. |
المراجع
- Buttner, N., Siegelbaum, S. A. Antagonistic modulation of a hyperpolarization-activated Cl(-) current in Aplysia sensory neurons by SCP(B) and FMRFamide. J. Neurophysiol. 90 (2), 586-598 (2003).
- Byrne, J. H., Castellucci, V. F., Kandel, E. R. Contribution of individual mechanoreceptor sensory neurons to defensive gill-withdrawal reflex in Aplysia. J. Neurophysiol. 41 (2), 418-431 (1978).
- Carlson, S. L., Fieber, L. A. Physiological evidence that D-Aspartate activates a current distinct from ionotropic glutamate receptor currents in Aplysia californica. J. Neurophysiol. 106 (4), 1629-1636 (2011).
- Carlson, S. L., Kempsell, A. T., Fieber, L. A. Pharmacological evidence that D-Aspartate activates a current distinct from ionotropic glutamate receptor currents in Aplysia californica. Br. Behav. 2 (4), 391-401 (2012).
- Fieber, L. A. Characterization of Na+ and Ca2+ currents in bag cells of sexually immature Aplysia californica. J. Exp. Biol. 201 (5), 745-754 (1998).
- Fieber, L. .A., Carlson, S. L., Capo, T. R., Schmale, M. C. Changes in D-Aspartate ion currents in the Aplysia nervous system with aging. Br. Res. 1343, 28-36 (2010).
- Glansman, D. L. Habituation in Aplysia: The Cheshire Cat of neurobiology. Neurobiol. Learn. Mem. 92, 147-154 (2009).
- Hawkins, R. D., Abrams, T. W., Carew, T. J., Kandel, E. R. A Cellular Mechanism of Classical Conditioning in Aplysia: Activity-Dependent Amplification of Presynaptic Facilitation. Science, New. 219 (4583), 400-405 (1983).
- Ichinose, M., Sawada, M., Maeno, T., McAdoo, D. J. Effect of acetylcholine on ventrocaudal sensory neurons in the pleural ganglia of Aplysia. Cell Mol. Neurobiol. 9, 233-245 (1989).
- Kandel, E. R. Cellular basis of behavior. , W.H. Freeman. New York. (1976).
- Kandel, E. R. The molecular biology of memory storage: a dialog between nerves and synapses. Science. 294 (5544), 1030-1038 (2001).
- Kupfermann, I., Castellucci, V., Pinsker, H., Kandel, E. Neuronal correlates of habituation and habituation of the gill-withdrawal reflex in Aplysia. Science. 167 (3926), 1743-1745 (1970).
- Magoski, N. S. Regulation of an Aplysia bag-cell neuron cation channel by closely associated protein kinase A and a protein phosphatase. J. Neurosci. 24 (30), 6833-6841 (2004).
- R, E. Neuronal transcriptome of Aplysia: neuronal compartments and circuitry. Cell. 127, 1453-1467 (2006).
- Nick, T. A., Kaczmarek, L. K., Carew, T. J. Ionic currents underlying developmental regulation of repetitive firing in Aplysia bag cell neurons. J. Neurosci. 16 (23), 7583-7598 (1996).
- Single-channel recording. Sakmann, B., Neher, E. , Plenum Press. NY. (1995).
- Tam, A. K., Geiger, J. E., Hung, A. Y., Groten, C. J., Magoski, N. S. Persistent Ca2+ current contributes to a prolonged depolarization in Aplysia bag cell neurons. J. Neurophysiol. 102 (6), 3753-3765 (2009).
- Schacher, S., Proshansky, E. Neurite regeneration by Aplysia neurons in dissociated cell culture: modulation by Aplysia hemolymph and the presence of the initial axonal segment. J. Neurosci. 3 (12), 2403-2413 (1983).
- Walters, E. T., Byrne, J. H., Carew, T. J., Kandel, E. R. Mechanoafferent neurons innervating tail of Aplysia. I. Response properties and synaptic connections. J. Neurophysiol. 50 (6), 1522-1542 (1983).
- Wilson, G. F., Richardson, F. C., Fisher, T. E., Olivera, B. M., Kaczmarek, L. K. Identification and characterization of a Ca(2+)-sensitive nonspecific cation channel underlying prolonged repetitive firing in Aplysia neurons. J. Neurosci. 16 (11), 3661-3671 (1996).
- White, B. H., Nick, T. A., Carew, T. J., Kaczmarek, L. K. Protein kinase C regulates a vesicular class of calcium channels in the bag cell neurons of Aplysia. J. Neurophysiol. 80 (5), 2514-2520 (1998).
- Wilson, G. F., Magoski, N. S., Kaczmarek, L. K. Modulation of a calcium-sensitive nonspecific cation channel by closely associated protein kinase and phosphatase activities. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95 (18), 10938-10943 (1998).
- Zhao, Y., Wang, D. O., Martin, K. C. Preparation of Aplysia sensory-motor neuronal cell cultures. J. Vis. Exp. (28), e1355(2009).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
