$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
يجب أن يتم تنفيذ التجارب على نطاق صغير لتصبح مألوفة مع الإجراء بأكمله.
1. جمع إناث والذكور العذراء السذاجة
أبسط نسخة من التجربة المذكورة تتكون من أربعة أنواع من الصلبان الأولية، التي تنطوي على التركيبة التالية من البالغين: أ) W الأفراد 1118 من أجل جمع الإناث عذراء؛ ب) الأفراد أوريغون-R من أجل جمع الذكور إشارة ساذجة؛ ج ) P {} SW الذكور والإناث متماثلة اللواقح عذراء من خط السيطرة الذي يحمل المنظمة من النوع البري من SDIC من أجل جمع الذكور التجريبية السذاجة (النوع الأول)، ود) P {} SW الذكور متماثلة اللواقح وSDIC-SW-الحذف التي تحمل الإناث العذراء من أجل جمع الذكور التجريبية الساذجة التي تحمل نقص SDIC-SW (النوع الثاني).
- إعداد قوارير متعددة تحتوي على 8-10 إناث و 5 ذكور لكل منهما. السماح للإناث لوضعالبيض ونقل أشخاص إلى قارورة جديدة كل 3-5 أيام. استخدام زجاجات بدلا من قوارير إذا لزم الأمر، ودائما استخدام المواد الغذائية الطازجة. وعدد من قوارير المطلوبة تعتمد على عدد من أنواع ذكر التجريبية قيد الدراسة وعدد من الأفراد يقدر أن يكون من الضروري كشف الفروق (الجدول 1). أكثر من 10 من الإناث في قارورة قد تؤدي إلى الإفراط في الازدحام خلال نمو اليرقات، والتي قد تسبب التباين في خصوبة النسل. قارورة مخزن عند 25 درجة مئوية في غرفة التحكم في درجة حرارته.
- البدء في جمع الإناث والذكور عذراء ساذجة في الأيام ال 11 و 12 ال بعد إعداد الصلبان الأولي. فترة الانتظار تتغير وفقا لدرجة الحرارة، وانخفاض درجات الحرارة في نتيجة قتا أطول التنموية تأخير مجموعة من الأفراد. وثمة عامل آخر يؤثر على توقيت لeclosion هو نوع من المتوسط. الطعام المغذي، مثل دقيق الذرة متوسطة-29 الخميرة، ويؤكد تطور السليم للبالغينالجهاز التناسلي، مما يسهل التزاوج. جمع unmated تطير كل 4-6 ساعة. عندما جمع، تخدير الذباب عن طريق إدخال CO 2 في قارورة، والاستفادة من الذباب إلى أسفل، والجنس منهم تحت stereomicroscope (الشكل 2). وضع الذباب المطلوب في قوارير مختلفة حسب الجنس والنمط الظاهري وتسمية قارورة بشكل مناسب.
ملاحظة 1. يبدأ روتين جمع في الصباح قبل التخلص من البالغين التي برزت خلال الليلة السابقة. جمع الإناث والذكور العذراء السذاجة مرة واحدة أو مرتين خلال النهار. عادة، D. الذكور البطن تصبح ناضجة جنسيا 8 ساعة بعد eclosion عند 25 ° C 30. إذا تمسك الذباب تحت 12:12 ساعة الضوء / الظلام دورات، ومن المتوقع قمتين من eclosion: خلال ساعة الأولى 1-2 بعد تشغيل الضوء على، وخلال ساعة 2 قبل تشغيل ضوء قبالة. يحدث في غضون 24 ساعة Eclosion بعد يظلم خادرة.
ملاحظة 2. لا يزيد عن 10 من الإناث SHتوضع ولد في نفس القارورة لمنع الإفراط في الازدحام. هذا يحد أيضا من فقدان للإناث في حالة لديهم ليتم التخلص منها لأن واحدا منهم على الاقل ليس العذراء.
ملاحظة 3. من أجل جمع العدد المناسب من الإناث والذكور عذراء ساذجة في فترة زمنية قصيرة، ويمكن اعتماد التدابير التالية. إعداد قنينة من 15-20 ث 1118 لإجراء التجارب التي تنطوي على نوعين من الذكور التجريبية (الجدول 1). رش بخفة على سطح وسائل الإعلام وإضافة بضع المجففة الكريات الخميرة نشطة لتسهيل وضع البيض. نقل الآباء على الأقل 4 مرات في أيام متتالية. لزيادة السطح المتاحة للالتشرنق في كل قارورة، إدراج ورقة متعددة مطوية (7 × 5 سم) خلال اليوم الخامس عشر 4 أو 5 بعد يتم تحويل الآباء إلى قارورة أخرى (الشكل 3). وإذا كان عدد البالغين خرجت من الصلبان الأولي لا يكفي، والانتظار لبضعة أيام وجمع األفرادALS من القنينات التي أقيمت في تواريخ مختلفة. خطة لتنفيذ التجارب على مدى عدة أيام متتالية حتى خارج عبء العمل.
2. تجارب نقرا مزدوجا التزاوج
ويبين الشكل 4 خطوات الرئيسية التي تشارك في التجارب نقرا مزدوجا التزاوج التي أجريت في 14.
- في صباح يوم 1، إعداد التزاوج الأول. الذكور أوريغون-R هي أول لزميله في مقايسة جريمة.
- باستخدام الشافطة، إعداد قارورة تحتوي على 10 أبيض العينين ث الإناث عذراء 1118 4-5 يوما و 10 أحمر العينين أوريغون-R الذكور السذاجة لكل منهما. يتم تعيين اثنين إلى ثلاثة قوارير تصل يوميا لمدة 5 أيام متتالية. قد تختلف عدد القنينات التي ستنشأ اعتمادا على عدد من الأفراد المتاحة. السماح للذباب لزميله لمدة 2 ساعة.
- تجاهل الذكور أوريغون-R وتضع كل أنثى في قارورة جديدة باستخدام الشافطة (الشكل 5). لا يمكن أن يتحقق تحديد الجنس عن طريق التفتيش البصري من عدد قليل منالاختلافات المورفولوجية (الشكل 2). تسمية كل قارورة بشكل مناسب وترك الأنثى في قارورة لمدة 2 يوم (الآخرة "V1").
- في يوم 3، وإعداد التزاوج الثاني. يجب أن يتم تنفيذ مجموعة من الذكور وعبر إعداد عشوائيا من أجل تقليل أي تحيز محتمل تجاه أي من أنواع ذكر التجريبية.
- قبل ساعتين من تشغيل ضوء قبالة، ونقل مرة أخرى الأنثى إلى قارورة جديدة مع الشافطة. تسمية القارورة الجديدة بشكل مناسب (الآخرة "V2").
- أعرض ثلاثة ذكور التجريبية 5-6 أيام من العمر من نفس النمط الجيني إلى V2.
- كرر 2.2.1 و 2.2.2 لكل أنثى.
- في يوم 4، ساعتين الحق قبل ضوء في وضع التشغيل (أي ما لا يزيد عن 12 ساعة بعد 2.2.1)، وتجاهل الذكور باستخدام الشافطة.
- في يوم 6، ونقل كل أنثى مرة أخرى إلى قارورة أخرى جديدة. تسمية قارورة جديدة بشكل مناسب (الآخرة "V3").
- في يوم 10، وتجاهل 1118 ث .
- دراسة السلالات في V2 و v3. يتم تنفيذ عملية التفتيش الأولى بعد 13-15 يوما بعد أن يتم إدخال الأنثى في V2 (أو V3)، على سبيل المثال في يوم 17 بعد أول امرأة في ovipositing بدأت في V2. يتم تنفيذ عملية التفتيش الثانية بالضبط بعد 17 يوما. هذا الإطار الزمني يشكل الحدود الزمانية العلوي آمن يضمن أي الجيل الثاني في نفس القارورة. عمليتي تفتيش منع الإفراط في الازدحام مع تسهيل العد ذرية.
- في يوم 17، وفحص V1 وضمان عدم وجود ذرية أحمر العينين الحاضر، وإذا كان لا علامة القارورة وفقا لذلك. جود ذرية بيضاء العينين يشير إلى أن الإناث لم يكن عذراء في وقت التزاوج الأولي في حين لا ذرية يشير إلى أن التزاوج مع الإشارة أو الذكور التجريبية لم يحدث.
- في يوم 17، نفذ أول عملية تفتيش من V2. ظهرت تخدير ذرية في V2 مع CO 2 وفرزها حسب اللون العين والجنس. أرقام ذرية سجل أنجب من الأولى والثانيةالذكور أندو. الشكل 6 يبين الظواهر المتوقعة في ذرية من كل مخطط التزاوج. في هذه التجربة 14 خاصة، فقط ذرية الإناث يمكن تعيين بشكل لا لبس فيه كما انجب من الإشارة أو الذكور التجريبية، وبالتالي فقط على المعلومات من بنات يمكن استخدامها لحساب P 2. إذا مع علامات أخرى في أبوة ذرية من الذكور يمكن تعيين بشكل لا لبس فيه، التهم ذرية من كلا الجنسين يمكن استخدامها في العمليات الحسابية المصب. تجاهل ذرية ولكن يبقى V2 للتفتيش الثاني.
- في يوم 20، والمضي قدما كما هو الحال في 2.5.2 مع السلاله ظهرت حديثا في V2 ثم تجاهل القارورة.
- في يوم 20، وفحص ذرية ظهرت في V3 للمرة الأولى واتبع الخطوة 2.5.2.
- في يوم 23، والمضي قدما كما هو الحال في 2.5.3 مع السلاله ظهرت حديثا في V3.
ملاحظة 1: ونظرا لتأثير محتمل على تضخيم عشرات P أن التزاوج متعددة قد يكون (2.2.2 و 2.2.3)، التزاوجيمكن أن تقتصر على فترة زمنية معينة. والإطار الزمني تعتمد على تردد remating المرتبطة النمط الجيني للإناث والذكور المستخدمة. يتم تقليل احتمال التزاوج متعددة خصيصا من مرة خلال الليل 11.
ملاحظة 2: لا تقم بإضافة حبيبات الخميرة الحية لأن هذا قد يسبب مشاكل بسبب فرط المحتملة من الخميرة عندما يكون عدد الذباب الكبار منخفضة.
3. تحليل البيانات
- وينبغي تنظيم التهم ذرية سجلت مناسب للتفتيش البصرية سهل والتحليل كفاءة مع الحزمة الإحصائية المناسبة (مثل أحزاب اللقاء المشترك من معهد SAS) أو أدوات مجانية على شبكة الإنترنت (على سبيل المثال http://vassarstats.net/ ).
- القدرة التنافسية الحيوانات المنوية. أضف التهم من V2 و v3. الذباب الإناث التي أدت إلى ما لا أو محدودة جدا ذرية (على سبيل المثال <10)، توفي أثناء إجراء، أو كانت بنجاح إلا inseminaتعتبر تيد من قبل واحدة من الذكور اثنان على أنها غير مفيدة ومستثناة من أي تحليل إحصائي المصب (2.5.1 والجدول 2). حساب P 2 درجة لكل أنثى بالمعلومات.
- اختبار ما إذا كانت هناك فروق ذات دلالة إحصائية في القيم P 2 بين الذكور التجريبية مقارنة. ويمكن القيام بذلك باستخدام حدودي (HSD مثل توكي) أو غير المعلمية الاختبارات (مثل الصلب Dwass) اعتمادا على عدة عوامل بما في ذلك عن أي انحراف في توزيع القيم P 2 والتبعية بين التباين والمتوسط. يتم تطبيق التحول الزاوي عادة إلى أبعاد مثل P 2 قبل استخدام الاختبارات المعلمية 31.
- الاختلافات معدل التزاوج (اختياري). لكل نوع من الذكور التجريبية، وحساب عدد الإناث تزاوج على نحو مضاعف، وتلك التي تزاوج فقط مع ذكر الأول (ذكر مرجع في مقايسة الجرم وذكر التجريبية في دefense مقايسة). باستخدام اختبار ثنائي الطرف فيشر الدقيق (متوفر في http://www.langsrud.com/fisher.htm )، وتحديد ما إذا كانت هناك فروق ذات دلالة إحصائية بين هذين النوعين من الذكور التجريبية.
- نسبة الجنس (اختياري). لكل من الذكور التجريبية، استخدم اختبار خي مربع لتحديد ما إذا كانت النسبة بين الجنسين في ذرية من كل ينحرف أنثى من نسبة 1:1 المتوقعة.