مقالة منهجية

عزل الخلايا الجذعية من دليل الدهنية المشتقة من Lipoaspirates الإنسان

DOI:

10.3791/50585

⸱

سبتمبر 26, 2013

 ,  ,  ,  , 
1Cytori Therapeutics Inc, 2Division of Cardiac Surgery, Department of Surgery, David Geffen School of Medicine at UCLA, 3Division of Plastic and Reconstructive Surgery, Department of Surgery, David Geffen School of Medicine at UCLA, 4Department of Orthopedic Surgery, David Geffen School of Medicine at UCLA, 5Regenerative Bioengineering and Repair Laboratory, David Geffen School of Medicine at UCLA

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في عام 2001، وصف الباحثون في جامعة كاليفورنيا عزل السكان من الخلايا الجذعية البالغة، ووصف الخلايا الجذعية المشتقة الدهنية أو ASCS، من الأنسجة الدهنية. توضح هذه المقالة عزلة ASCS من lipoaspirates باستخدام دليل، بروتوكول الهضم الأنزيمية باستخدام كولاجيناز.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في عام 2001، وصف الباحثون في جامعة كاليفورنيا، لوس أنجلوس، وعزل السكان جديدة من الخلايا الجذعية البالغة من liposuctioned الأنسجة الدهنية التي أسموه في البداية خلايا Lipoaspirate المصنعة أو خلايا جيش التحرير الشعبى الصينى. منذ ذلك الحين، تم إعادة تسمية هذه الخلايا الجذعية الخلايا الجذعية الدهنية كما مشتقة أو ASCS وذهبت لتصبح واحدة من خلايا جذعية للبالغين الأكثر شعبية للسكان في مجالات أبحاث الخلايا الجذعية والطب التجديدي. وصف الآلاف من المقالات الآن استخدام ASCS في مجموعة متنوعة من النماذج الحيوانية التجدد، بما في ذلك تجديد العظام، وإصلاح الأعصاب الطرفية والهندسة القلب والأوعية الدموية. وقد بدأت المقالات الأخيرة لوصف عدد لا يحصى من الاستخدامات لASCS في العيادة. ويحدد البروتوكول هو موضح في هذه المقالة الإجراء الأساسي لليدويا وإنزيمي عزل ASCS من كميات كبيرة من lipoaspirates تم الحصول عليها من الإجراءات التجميلية. يمكن بسهولة أن تحجيم هذا البروتوكول أعلى أو لأسفل لaccommodأكلت حجم lipoaspirate ويمكن تكييفها لعزل ASCS من الأنسجة الدهنية التي تم الحصول عليها من خلال abdominoplasties وإجراءات أخرى مماثلة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في عام 2001، وقد وصفت مجموعة من السكان المفترضة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات من الأنسجة الدهنية في مجلة هندسة الأنسجة 1. أعطيت هذه الخلايا اسم معالجتها Lipoaspirate أو جيش التحرير الشعبى الصينى الخلايا بسبب اشتقاقها من الأنسجة المصنعة lipoaspirate الحصول عليها من خلال الجراحة التجميلية. واستند أسلوب العزل الموضحة في هذه المقالة على الاستراتيجيات القائمة الأنزيمية للعزلة من انسجة الوعائية الكسر (صندوق التبرعات الخاص) من الأنسجة الدهنية 2. تم تعريف صندوق التبرعات الخاص باعتباره الحد الأدنى من السكان معالجة خلايا الدم الحمراء، والخلايا الليفية، الخلايا البطانية وخلايا العضلات الملساء، pericytes وقبل الخل....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بروتوكول المعروضة هنا يصف العزلة دليل ASCS من lipoaspirates الحصول عليها من خلال العمليات التجميلية باستخدام الهضم الأنزيمي والتفاضلية الطرد المركزي. تم نشر هذا البروتوكول لأول مرة في مجلة هندسة الأنسجة في عام 2001 1، حيث كانت تسمى الخلايا الناتجة خلايا Lipoaspirate المصنعة أو خلايا جيش التحرير الشعبى الصينى بسبب عزلتهم من lipoaspirates. ومع ذلك، فقد تم استبدال الآن الخلية جيش التحرير الشعبى الصينى الأمد مع الأجل المستمدة الدهنية الخلايا الجذعية أو ASCS لإعطاء المجال نوعا من المطابقة من حيث التسمية. وقد تبين أن الخلايا المعزولة من خلال هذا البروتوكول من قبل العديد من لامتلاك إمكانات أرومية متوسطة سوا....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مخطط بروتوكول أعلاه يصف، طريقة الأنزيمية دليل للعزلة من صندوق التبرعات الخاص من عينة كبيرة الحجم lipoaspirate. في هذا SVF العديد من سكان الخلية، بما في ذلك ASC. العديد من الدراسات تقترح أن زراعة هذا صندوق التبرعات الخاص في ظل ظروف زراعة الأنسجة القياسية سنختار السكان الليفية تمسكا المرجح أن تتكون أساسا من نوع ASC. واتساقا مع ذلك، لقد أظهرنا، وذلك باستخدام التدفق الخلوي والمناعي، أن الكريات صندوق التبرعات الخاص مثقف تصبح خالية أساسا من الخلايا الكبرى تلويث أنواع، وهي كرات الدم الحم.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأنسجة الدهنية لعزل ASCS يمكن أن يأتي في أشكال كثيرة: من قطعة صلبة من الأنسجة التي تم الحصول عليها من خلال استئصال أو رأب الشحم إلى قطع أصغر الحصول عليها عن طريق إما استخراج حقنة أو بمساعدة شفط رأب الشحم (أي شفط الدهون). ما إذا كان المزيد من الخلايا صندوق التبرعات الخاص (وبالتالي ASCS) يمكن الحصول عليها من العينات الدهنية مقطوعة أو يستنشق غير واضح كما تم عرض الدراسات المتضاربة 16، 17. فمن الممكن أن إما شكل الأنسجة الدهنية أكثر من مناسبة لعزل الخلايا صندوق التب.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

واضعو هذه المخطوطة هي المخترعين المشارك على براءة اختراع تمتلكها الحكام من جامعة كاليفورنيا ومرخصة لCytori التداوي.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب أود أن تقر وأشكر هؤلاء الأفراد البحوث الإضافية التي ساهمت في تطوير بروتوكول صفها وعزلتها من ASCS، بما في ذلك: الدكتور H. بيتر لورنز، دكتوراه في الطب، الدكتور هيروشي Muzuno، دكتوراه في الطب، الدكتور جيري هوانغ، MD الدكتور آدم كاتز، دكتوراه في الطب، والدكتور وليام Futrell، دكتوراه في الطب، الدكتور رونغ تشانغ، DDS، دكتوراه، والدكتور لاريسا رودريجيز، دكتوراه في الطب، الدكتور زيني ألفونسو، دكتوراه، والدكتور جون فريزر، دكتوراه. وقد مولت النتائج المقدمة، في جزء منه، من خلال المنح البحثية المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة، بما في ذلك NIAMS ومعاهد NIDCR.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Reagent
DMEM (Dulbecco&# 8217; s تعديل النسر &# 8217 ؛ s متوسط)Mediatech Cellgro10-013-CVمع 4.5 جم / مل جلوكوز ، L-جلوتامين ، بيروفات الصوديوم
البنسلين / الستربتومايسينMediatech Cellgro30-002-CI10,000 وحدة دولية / مل البنسلين / 10,000 & # 956 ؛ جم / مل ستربتومايسين
أمفوتريسين بميدياتك سيلجرو30-003-CF250 &# 956 ؛ جم / مل أمفوتريسين B
10X PBS (محلول ملحي مخزن بالفوسفو)Mediatech Cellgro25-053-CIبدون كالسيوم ، بدون مغنيسيوم
Trypsin / EDTAMediatech Cellgro20-031-CV0.25٪ تريبسين / 2.21 ملي مولار EDTA
نوع الكولاجيناز IA (من المطثية هيستوليتيكوم) تحضيرخام سيجماC2674؛ 125 وحدة هضم الكولاجين / ملغ صلب
FBS (مصل الأبقار الجنينية) معطل حرارياGemini Bioproducts100106مصدر وزارة الزراعة الأمريكية ، معطل بالحرارة
10 مل ماصات مصليةGenesee Scientific12-104
25 مل ماصات مصليةGenesee Scientific12-106
50 مل أنابيب الطرد المركزي من مادة البولي بروبيلينGenesee Scientific21-106
أطباق زراعة الأنسجة 100 ممGenesee Scientific25-202
أطباق زراعة الأنسجة 150 ممGenesee Scientific25-203
500 مل Stericup Filter UnitsMilliporeSCGPU05REPES غشاء ، 0.22 & # 956 ؛ م
مصافي خليةالمسام FisherBrand22-363-549100 &# 956 ؛ م شبكة نايلون
ديكساميثازون - قابل للذوبان في الماءسيجماD-2915
L-حمض الأسكوربيك 2 فوسفاتسيجماA-8960
& # 946 ؛ - ملح ثنائي الصوديوم جليسيروفوسفات SigmaG-9422المعروف أيضا باسم الأنسولين الجليسرفوسفات
SigmaI-6634المصنوع من البنكرياس البقري
إندوميتاسينSigmaI-7378
apo-transferrinSigmaT-4382
TGF &# 946 ; 1R& D Systems240-B-002بشري مؤتلف
أحمر OSigmaO-0625
Alcian BlueSigmaA-5268
نترات الفضةSigmaS-0319
حمض الهيدروكلوريكفيشر ScientificA144
ParaformaldehydeFisher Scientific30525-89-4يتم توفيره كمخزون
[header]
شفاط السلامة الحيوية من الفئة الثانية A / Bيضمن غطاءأن غطاء المحرك يحتوي على خطوط فراغ للشفط
الطرد المركزيHermle LabnetZ383الدوار المتأرجح للخارج لأنابيب 50 مل المطلوبة ، قادر على 1200 جرام
حمام مائي فيشر Scientific IsotempS52602Qسعة 5-10 لتر ، قادر على 37 درجة مئوية
مساعدات الماصات الآليةDrummond Pipette Aid XL4-000-105
CO2< / sub> حاضنةThermo ScientificForma 310حرارة مباشرة أو مغلفة بالماء
زيت بنسبة 16٪< td colspan = "4" ><قوي>المعدات المطلوبة< / قوية> المحرك الحراري العلمي جهاز

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zuk, P. A., et al. Multi-lineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Engineering. 7 (2), 211-226 (2001).
  2. Rodbell, M. Metabolism of isolated fat cells. J. Biol. Chem. 239, 375-380 (1964).
  3. Poznanski, W. ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة