يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

حقن مكروي التجسيمي من ناقلات فيروسية وإذ تعرب عن لجنة المساواة العرقية recombinase البكتيري المحور إلى دراسة دور الجينات المستهدفة في الكوكايين مكيفة مكان ميول

18.2K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/50600

⸱

يوليو 30, 2013

 , 
1Graduate Program in Neuroscience, Weill Cornell Graduate School of Biomedical Sciences, 2Division of Pediatric Neurology, Department of Pediatrics, Weill Cornell Medical College

في هذه المقالة

ملخص

توضح هذه المقالة كيفية microinject ناقلات فيروسية في مخ الفأر ثم اختبار في تفضيل مكان الهواء نموذج يتضمن مرحلة الاستحواذ، وإعادة الانقراض.

الملخص

Microinjecting المؤتلف الفيروسية (rAAV) ناقلات adenoassociated معربا عن لجنة المساواة العرقية في recombinase البكتيري المحور الماوس متميزة مناطق الدماغ إلى انتقائية الجينات خروج المغلوب من الفائدة يسمح لتعزيز الرقابة زمانيا ومحددة إقليميا من حذف الجينات، مقارنة مع الأساليب القائمة. بينما الشرطي حذف يمكن أيضا أن يتحقق من خلال التزاوج الفئران التي تعبر عن لجنة المساواة العرقية recombinase البكتيري المحور تحت سيطرة المروجين جين معين مع الفئران يحمل الجين floxed، حقن مكروي التجسيمي يسمح لاستهداف مناطق الدماغ منفصلة في نقاط زمنية مجرب محدد من الفائدة. في سياق الكوكايين الهواء تفضيل مكان، وغيرها من النماذج السلوكية مثل الكوكايين الإدارة الذاتية أو التوعية الحركية التي يمكن أن تنطوي على الانسحاب، وانقراض و / أو إعادة مراحل، هذه التقنية مفيدة بشكل خاص في استكشاف مساهمة فريدة من الجينات المستهدفة لهذه متميزة مراحل من النماذج السلوكية للاللدونة الكوكايين التي يسببها. على وجه التحديد،هذا الأسلوب يسمح للالاجتثاث الانتقائي من الجينات المستهدفة خلال مراحل منفصلة من سلوك لاختبار مساهمتها في السلوك عبر الزمن. في نهاية المطاف، هذا الفهم يسمح للعلاجات أكثر المستهدفة التي هي الأقدر على معالجة عوامل الخطر الأكثر فعالية التي تطرح نفسها خلال كل مرحلة من مراحل السلوك الادمان.

المقدمة

الكوكايين هو منبه نفسي يعزز إلى حد كبير. بعد التعرض المتكرر، تحدث العديد من التعديلات الجزيئية والخلوية في الثواب ذات الصلة دوائر الدماغ التي يعتقد أنها تؤدي إلى القهري المخدرات سلوك التماس، مما دفع ارتفاع معدلات الانتكاس التي تشكل مشكلة خطيرة السريرية 1. الكوكايين تمارس هذه الآثار السلوكية طويلة الأمد من خلال تنظيم التعبير الجيني. لدراسة التعديلات التي تنشأ عن استخدام الكوكايين المزمن، وقد استخدمت نماذج القوارض قبل السريرية على نطاق واسع. واحدة من هذه النموذج هو تفضيل مكان الهواء (CPP) نموذج. هذا النموذج ينطوي على تطوير جمعية المستفادة بين بيئة محايدة سابقا وخصائص مجزية من الكوكايين. بعد عدة أزواج من الكوكايين مع غرفة خاصة، ويسمح الحيوانات لاستكشاف البيئات الكوكايين مقترن وغير الكوكايين تقرن بحرية وإذا كانوا يفضلون المقصورة المخدرات إرفاقها، ويقال أنها قد حصلت على تناو التي يسببها الكوكايينه تفضيل. وعلاوة على ذلك، وبعد فترة التدريب الانقراض، هذا النموذج يمكن استخدامه لدراسة إعادة سياق محددة من الكوكايين في سلوك التماس.

بالمقارنة مع النماذج السلوكية الأخرى للسلوك الادمان مثل، مثل التوعية الحركية، والتي تستخدم لدراسة طويلة الأمد التي يسببها الكوكايين السلوكية واللدونة الجزيئية 2،3 والإدارة الذاتية (SA)، التي يعتقد أنها أكثر دقة تقليد الادمان مثل السلوك وجدت في البشر، ونموذج CPP هو إجراء بسيط لدراسة الكوكايين التعلم السياقية 4. بروتوكولات CPP يمكن تمديد ملائم لتشمل الانقراض ومراحل إعادة، على غرار SA، والتي تسمح للتحقيق في الآليات الكامنة وراء حنين المخدرات، ويعتقد 5-7 الانتكاس والتي لألخص جوانب ما يحدث في الإنسان المخدرات سلوك التماس والمخدرات - وجديلة الناجم عن الانتكاس 8-10.

واحدة آلية والذي أدى إلىالكوكايين التي يسببها اللدونة السلوكية التي هي من سمات كل مرحلة من المراحل المتميزة من حزب الشعب الكمبودي، بما في ذلك الاستحواذ، انقراض، وإعادة، هو تفعيل التواقيع فريدة في التعبير الجيني داخل مناطق الدماغ المختلفة. لاختبار مباشرة التي الجينات داخل مناطق الدماغ ذات الصلة مكافأة توسط الكوكايين التي يسببها التغيرات السلوكية، فمن المفيد أن تكون قادرة على التلاعب بها بشكل انتقائي بطريقة محددة إقليميا. طريقة واحدة لتحقيق ذلك هو microinject المؤتلف الفيروسية ناقلات adenoassociated (rAAV) التي تعبر عن لجنة المساواة العرقية recombinase البكتيري المحور باستخدام جراحة التجسيمي، في مناطق الدماغ متميزة من الفئران التي لديها جينات المستهدفة يحيط بها مواقع LoxP (الفئران floxed). هذه الطريقة تسمح للسيطرة الزمانية والإقليمية دقيقة جدا على متى وأين يتم ذاب الجينات، في كل من الخلايا العصبية الانقسام وعدم تقسيم، دون إحداث الاستجابات المناعية 11-13. هذا المستوى من السيطرة يمثل ميزة هامة عبر تقنية جنة المساواة العرقية، LoxP التقليدية لتربية الفئران floxed ثالفئران إيث معربا عن لجنة المساواة العرقية recombinase البكتيري المحور تحت السيطرة على المروج الجين الذاتية، في أن توقيت وتوزيع حذف الجينات يمكن تنظيم أكثر إحكاما. بالإضافة إلى ذلك، ناقلات فيروسية بوساطة الجينات خروج المغلوب تلتف المحتملة الآثار التعويضية التنموية التي قد تحدث باستخدام استراتيجيات خروج المغلوب التقليدية.

بالإضافة إلى الكوكايين CPP، الذي يوصف هنا، Microinjection من rAAV-لجنة المساواة العرقية في الدماغ من الفئران floxed لتقييم دور جينات معينة يمكن تطبيقها بتواجد مطلق لنماذج السلوك التي تنطوي على مراحل منفصلة، ​​بما في ذلك الإدارة الذاتية والتوعية الحركية. على سبيل المثال، مختبرنا وقد استخدمت هذه التكنولوجيا rAAV-لجنة المساواة العرقية لدراسة دور الكالسيوم V 1.2 لتر من نوع كا 2 + قنوات في الكوكايين الحركية توعية 14. على وجه التحديد، تم microinjected rAAV-جنة المساواة العرقية في النواة المتكئة (NAC) من الفئران مع الجينات ترميز كا V 1.2 floxed، لإثبات أن كا الخامس 1.2 يتصرف في هذه المنطقة تتوسط مرحلة التعبير عن التوعية الحركية 14،15. ومع ذلك، لا يمكن لاستراتيجية rAAV-لجنة المساواة العرقية أن تستخدم إذا الفئران مع الجينات floxed من مصلحة لا وجود لها، كما كان تجربتنا عند تقييم دور الكالسيوم V 1.3 لتر من نوع كا 2 + قنوات في التوعية الحركية. وبالتالي، وجود قيود على استخدام rAAV-لجنة المساواة العرقية يطرح نفسه حالة عدم وجود الفئران مشروط لجين معين من الفائدة. ومع ذلك، rAAVs التي تعبر عن سيرنا يمكن استخدامها لضربة قاضية الجينات المستهدفة، كما فعلنا لدراسة دور الكالسيوم V 1.3 قنوات 14،15.

Microinjecting rAAV-جنة المساواة العرقية في مناطق الدماغ منفصلة من الفئران floxed ثم اختبارها في نموذج CPP يسمح للتحقيق في الجينات المحددة التي توسط في مراحل مختلفة من السلوك الادمان مثل وحيث أنهم يتصرفون. استخدام هذا النموذج ساعد في فهمنا لكيفية إدارة الكوكايين المتكررة في جوهر يخطف مكتب الاتصالات الراديويةاهلية ت دائرة الإثابة تسبب تغيرات غير القادرة على التأقلم في الجزيئية مسارات نقل الإشارة والتعبير الجيني التي تؤدي إلى حالة المدمنين 1،16،17.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وتجرى جميع الإجراءات وفقا لكلية طب وايل كورنيل المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام القواعد.

1. إعداد والإعداد لالتجسيمي تسليم ناقلات فيروسية

  1. إذا الملوثة صك، مسحة معقمة، أو من ناحية ارتداء القفازات المعقمة قبل ملامسة سطح غير معقمة، وتجاهل أو إعادة تعقيم أداة باستخدام حبة تعقيم الساخنة، وتجاهل مسحة أو تغيير لقفازات معقمة جديدة.
  2. ضع قفص الفأر مع الفراش على كتلة الحرارة لتدفئة للانتعاش بعد الجراحة.
  3. إعداد الحلاقة الكهربائية لحلق الرأس والإيثانول واليود لتعقيم فروة الرأس.
  4. مسح أسفل القضبان الأذن والفم عقد من stereotax مع الايثانول 70٪.
  5. باستخدام 5 ميكرولتر حقنة هاميلتون، ووضع 5 ميكرولتر من ناقلات فيروسية (1 × 10 6 الجسيمات الفيروسية / ميكرولتر) والتي أنشئت في حامل حقنة على stereotax.
  6. وسادة تسخين الميكروويف أو إيقاف وحة كهربائية علىالمركز الثاني على stereotax. تغطية مع لوحة ماصة نظيفة للحد من خطر الحروق. رصد الماوس درجة حرارة الجسم (بين 97 حتي 99،5 ° F) بشكل متكرر طوال الإجراء.
  7. حقن الفأر (وزنها بين 22-35 جرام) مع خليط من الكيتامين (100 ملغ / كلغ) وزيلازين (20 ملغ / كلغ). مرة واحدة في الفأر هو تخدير، قرصة طرف الذيل للتحقق من ردود الفعل الماوس، وملاحظة أي حركة أو استجابة للتأكد من أن الفأر هو تخدير كاف.
  8. حلق الرأس بين الأذنين والعينين.
  9. تنظيف حليق الرأس بالتناوب مع تطبيقها الإيثانول واليود القطن المعقم.
  10. نقل الماوس لوحة ساخنة على stereotax.

2. حقن مكروي التجسيمي من ناقلات فيروسية

  1. ارتداء القفازات المعقمة في جميع أنحاء عملية جراحية. إذا كانت ملوثة القفازات في أي لحظة عن طريق لمس أسطح غير معقمة، تغيير القفازات.
  2. صفر شريط الأسنان وموازين شريط الأذن.
  3. تعيين الأسنان في شريط الأسنان.
  4. المسمار في كمامة. إذا التلوي أو التحرك الطوليويلاحظ منة في أي وقت، إدارة جرعة معززة IP (~ 0.05 سم مكعب) من مزيج من الكيتامين (100 ملغ / كلغ) وزيلازين (20 ملغ / كلغ).
  5. المسمار في الحانات الأذن.
  6. تليين العينين مع PuraLube.
  7. قطع فروة الرأس مفتوحة للخلف الأذنين مع مشرط.
  8. مكان كليب بلدغ على زوايا فروة الرأس لقشر الجلد بعيدا عن الجمجمة. و bregma امدا يجب أن تكون مرئية بسهولة.
  9. جعل متأكد من خياطة bregma لامدا يتم محاذاة على التوالي. إذا الخيط هو إعادة تكييف تحديد المواقع ملتوية من الرأس.
  10. تحقق للتأكد من وركزت جميع الإعدادات على stereotax.
  11. وضع إبرة في طرف المكان في bregma.
  12. قياس جميع الإحداثيات على حد سواء و bregma امدا. وهذا يشمل ظهري / بطني، الإحداثيات وسطي / الوحشي والأمامي / الخلفي.
  13. ضبط رئيس حتى إحداثيات بطني لو bregma امدا ضمن 0.02 ملم من بعضها البعض.
  14. مرة واحدة الانحياز، من bregma تذهب إعلامي الخروج إلى إحداثيات سطي / الوحشي (M / L). تأكديتم محاذاة الجانبين الأيسر والأيمن في غضون 0.02 ملم من بعضها البعض.
  15. في وسط إعادة طرف الإبرة على و bregma من هناك تحرك في الاتجاه الأمامي / الخلفي (A / P) للالأمامي / الخلفي تنسيق المطلوب.
  16. إذا لزم الأمر، إبرة زاوية في اتجاه واحد وتأكد من تأمين stereotax. الخروج إلى اليسار M / L تنسيق (+ / - 1.52)
  17. قياس موقف بطني من الجزء العلوي من الجمجمة لاستخدامها كمرجع بعد حفر البئر.
  18. حفر بئر باستخدام العقيمة قمة الحفر في الإحداثيات المطلوبة. تحقق من أن الإبرة يمكن أن يدخل دون انقطاع من خلال الجمجمة.
  19. خفض الإبرة إلى تنسيق بطني المطلوب.
  20. مرة واحدة يتم الوصول إلى تنسيق، وتراجع 0.015 مم أدناه ل~ 10 ثانية لخلق جيب صغير لناقلات الفيروسية.
  21. حقن حجم المطلوب من ناقلات الفيروسية بمعدل 0.1 ~ ميكرولتر / دقيقة. انتظر 3 دقائق لناقلات الفيروسية لنزع فتيل تماما. رفع إبرة غيض 0.015 ملم والانتظار لمدة 2 دقيقة إضافية.
  22. تراجع الإبرة (إذا فعل الحقن الزاوية) في الاتجاه المعاكس. مرة أخرى، وتسجيل موقف بطني كمرجع لأعلى الجمجمة.
  23. كرر نفس الخطوات على الجانب الأول لحقن النواقل الفيروسية على الجانب الآخر (إذا فعل الحقن الثنائية).
  24. تطبيق الشمع العظام على حد سواء الثقوب لختم لهم باستخدام نهاية خشبي من القطن المعقم طرف قضيب.
  25. خياطة فروة الرأس.
  26. تطبيق إحصار العصب إلى منطقة الجرحى.
  27. إزالة الماوس من stereotax ومكان في قفص تحسنت في كتلة الحرارة لاسترداد لمدة 45 دقيقة.
  28. رصد لعلامات الألم بما في ذلك: انخفض النشاط العام أو الأرق، وانخفاض استهلاك الغذاء والماء أو زيادة النطق. البوبرينورفين (0،05 حتي 0،2 ملغ / كلغ) ويمكن أن تدار مرتين يوميا لمدة أسبوع إذا كان ذلك ضروريا للألم. بدائل مقبولة تشمل: الميبيريدين (20-60 ملغ / كلغ)، بنتازوسين (10 ملغ / كلغ)، نالبوفين (4-8 ملغ / كلغ).

3. مكيفة مكان المفضل: AcquisitioN، الانقراض، وإعادة التنصيب

  1. مكان الفئران في الغرفة المركزية للثلاثي غرفة مكان جهاز تفضيل (ميد شركاه المحدودة، ألبانز، VT، الولايات المتحدة الأمريكية) لثانية فترة التعود 60 مع الأبواب مقصلة مغلقة.
  2. بعد التعود، والأبواب مفتوحة وتسمح المقصلة الفئران استكشاف خالية من جميع الغرف 3 ل1،200 ثانية، مع الوقت الذي يقضيه في كل غرفة يتم تسجيلها باستخدام MedPC الرابع البرمجيات (ميد شركاه، وشركة).
  3. تعيين الفئران إلى الغرف تكييف هواء بناء على أدائهم خلال فترة ما قبل الاختبار. باستخدام تصميم، الدواء الزوج منحازة خلال 3 أيام لاحقة مع المقصورة التي كانت الأقل تفضيلا خلال خط الأساس قبل الاختبار.
  4. خلال الأيام تكييف 3 القادم، حقن الفئران مع الكوكايين (10 ملغ / كغ؛ IP) خلال الجلسة الصباحية وحصرها في الغرفة المخصصة لهم ل1،200 ثانية مباشرة بعد الحقن. عودة الفئران لأقفاص وطنهم بعد الدورة. بعد 4 ساعات، حقن الفئران بمحلول ملحي (0.01 مل / زوزن الجسم) وجودهم مقتصرا على غرفة المعاكس للدورة بعد الظهر ثوانى 1،200.
  5. لاختبار اكتساب، مكان الفئران في الغرفة المركزية مع الأبواب مقصلة مغلقة لفترة ثانية التعود 60. الأبواب مفتوحة وتسمح المقصلة استكشاف مجانية ل1،200 ثانية، مع الوقت الذي يقضيه في جميع الدوائر التي سجلتها MedPC الرابع البرمجيات (ميد شركاه، وشركة). حساب تفضيل وذلك بطرح مقدار الوقت الذي يقضيه في قاعة المالحة الاقتران من مقدار الوقت الذي يقضيه في غرفة الكوكايين المقترنة.
  6. لإطفاء تفضيل مكان، فضح الفئران لمدة 20 دقيقة من جلسات استكشاف يومية مجانية في نفس الجهاز، مفصولة لا يقل عن 2 ساعة، ابتداء من 24 ساعة بعد اختبار لاكتساب. الوقت الذي يقضيه في كل الدوائر يجب أن تسجل مرة أخرى ويجب مقارنة حجم CPP الأولي مع أن كل دورة الانقراض.
  7. تحديد ما إذا كانت الفئران قد انطفأت تفضيل المخدرات التي يسببها من خلال تقييم ما إذا كان تفضيل قدم المساواةغرفة حتديدا عبر يومين متتاليين الانقراض هو أقل بكثير بالمقارنة مع النتيجة أفضلية الاستحواذ.
  8. إعادة الفئران بجرعة فتيلة من الكوكايين (5 أو 10 ملغ / كغ؛ IP) وإعادة فضح لجهاز الاستكشاف السماح الحرة وتسجيل الوقت الذي يقضيه في كل مقصورة.
  9. إدارة حل القتل الرحيم Euthasol (150 ملغ / كلغ). يروي Transcardially الفئران مع بارافورمالدهيد 4٪ (PFA) وإجراء الفحص النسيجي للتحقق من صحة الصحيح موضع حقن مكروي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

CPP

بعد أداء CPP على الفئران microinjected، ينبغي للمرء أن تحقق من أن الفوج من السيطرة حقن (rAAV-GFP) الفئران قد اكتسبت عادة تفضيل للغرفة التجارية المقترنة المخدرات (الشكل 1A، 1B). تعتبر الفئران لاكتسبوا تفضيلها لغرفة خاصة عندما تفضيل الكوكايين (الوقت الذي يقضيه في غرفة الكوكايين تقرن ناقص الوقت الذي يقضيه في قاعة المالحة إقران) هو أعلى بكثير بالمقارنة مع درجة تفضيل خط الأساس (الشكل 1B، A مق...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

إقليميا وزمنيا محددة الاجتثاث الجيني عبر حقن مكروي التجسيمي من ناقلات فيروسية جنبا إلى جنب مع CPP يتضمن الانقراض ومراحل إعادة يسمح للتحقيق في المساهمات المحددة من الجينات إلى ثلاث مراحل متميزة من السلوك الادمان مثل. في حين خروج المغلوب الشرطي الذي يتحقق الاستفادة من نظام لجنة المساواة العرقية-LoxP التقليدية ينص على المكانية والزمان محدود الاجتثاث الجينات، microinjecting stereotaxically جنة المساواة العرقية، recombinase البكتيري المحور في مناطق الدماغ منفصلة من الفئران floxed تسمح ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

فإن الكتاب أود أن أشكر انى لي ومورين بيرن لمساعدتهم في تأسيس الهواء بروتوكول تفضيل مكان الموسعة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
غرف نشاط تفضيل المكان المكيفة MedAssociates، Inc. ، St. Albans ، VT ، الولايات المتحدة الأمريكيةMED-CPP-MS
نظام محاذاة تجسيمي للماوسDavid Kopf Instruments ، Tujunga ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكيةموديل 900
محاقن هاميلتونشركة هاميلتون ، رينو ، نيفادا ، الولايات المتحدة الأمريكية7634-01
rAAV2-Cre-GFPVector BioLabs ، فيلادلفيا ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكية7016
rAAV2-GFPVector BioLabs ، فيلادلفيا ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكية7004

المراجع

  1. Nestler, E. J. Molecular neurobiology of addiction. American Journal on Addictions. 10 (3), (2001).
  2. Thomas, M. J., Kalivas, P. W., Shaham, Y. Neuroplasticity in the mesolimbic dopamine system and cocaine addiction. British Journal of Pharmacology. 154 (2), (2008).
  3. Robinson, T. E., Browman, K. E., Crombag, H. S., Badiani, A. Modulation of the induction or expression of psychostimulant sensitization by the circumstances surrounding drug administration. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 22 (2), (1998).
  4. Tzschentke, T. M. Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade. Addiction Biology. 12 (3-4), (2007).
  5. Mueller, D., Stewart, J. Cocaine-induced conditioned place preference: reinstatement by priming injections of cocaine after extinction. Behavioural Brain Research. 115 (1), (2000).
  6. Itzhak, Y., Martin, J. L. Cocaine-induced conditioned place preference in mice: Induction, extinction and reinstatement by related psychostimulants. Neuropsychopharmacology. 26 (1), (2002).
  7. Kreibich, A. S., Blendy, J. A. cAMP response element-binding protein is required for stress but not cocaine-induced reinstatement. Journal of Neuroscience. 24 (30), (2004).
  8. Obrien, C. P., Childress, A. R., McLellan, T., Ehrman, R. Integrating systematic cue exposure with standard treatment in recovering drug dependent patients. Addictive Behaviors. 15 (4), (1990).
  9. O'Brien, C. P., Childress, A. R., McLellan, A. T., Ehrman, R. A learning model of addiction. Research publications - Association for Research in Nervous and Mental Disease. 70, (1992).
  10. Stewart, J. Psychological and neural mechanisms of relapse. Philosophical Transactions of the Royal Society B-Biological Sciences. 363 (1507), (2008).
  11. Bueler, H. Adeno associated viral vectors for gene transfer and gene therapy. Biological Chemistry. 380, (1999).
  12. Xiao, X., Li, J., McCown, T. J., Samulski, R. J. Gene transfer by adeno-associated virus vectors into the central nervous system. Experimental Neurology. 144 (1), (1997).
  13. Alexander, I. E., Russell, D. W., Spence, A. M., Miller, A. D. Effects of gamma irradiation on the transduction of dividing and nondividing cells in brain and muscle of rats by adeno-associated virus vectors. Human Gene Therapy. 7 (7), (1996).
  14. Schierberl, K., Hao, J., Tropea, T. F., Ra, S., Giordano, T. P., Xu, Q., Garraway, S. M., Hofmann, F., Moosmang, S., Striessnig, J., Inturrisi, C. E., Rajadhyaksha, A. M. Ca(v)1.2 L-Type Ca2+ Channels Mediate Cocaine-Induced GluA1 Trafficking in the Nucleus Accumbens, a Long-Term Adaptation Dependent on Ventral Tegmental Area Ca(v)1.3 Channels. Journal of Neuroscience. 31 (38), (2011).
  15. Schierberl, K., Giordano, T., Satpute, S., Hao, J., Kaur, G., Hofmann, F., Moosmang, S., Striessnig, J., Rajadhyaksha, A. Ca(v)1.3 L-type Ca2+ channels mediate long-term adaptation in dopamine D2L-mediated GluA1 trafficking in the dorsal striatum following cocaine exposure. Channels. 6 (1), 11-17 (2012).
  16. Nestler, E. J., Bergson, C. M., Gultart, X., Hope, B. T. Regulation of neural gene expression in opiate and cocaine addiction. NIDA Research Monograph. 125, (1993).
  17. Hyman, S. E., Malenka, R. C. Addiction and the brain: The neurobiology of compulsion and its persistence. Nature Reviews Neuroscience. 2 (10), (2001).
  18. Lee, A. S., Ra, S., Rajadhyaksha, A. M., Britt, J. K., De Jesus-Cortes, H., Gonzales, K. L., Lee, A., Moosmang, S., Hofmann, F., Pieper, A. A., Rajadhyaksha, A. M. Forebrain elimination of cacna1c mediates anxiety-like behavior in mice. Molecular Psychiatry. 17 (11), (2012).
  19. Li, X., Wolf, M. E. Visualization of virus-infected brain regions using a GFP-illuminating flashlight enables accurate and rapid dissection for biochemical analysis. Journal of Neuroscience Methods. 201 (1), 177-179 (2011).
  20. Ahmed, B. Y., Chakravarthy, S., Eggers, R., Hermens, W., Zhang, J. Y., Niclou, S. P., Levelt, C., Sablitzky, F., Anderson, P. N., Lieberman, A. R., Verhaagen, J. Efficient delivery of Cre-recombinase to neurons in vivo and stable transduction of neurons using adeno-associated and lentiviral vectors - art. no. 5. BMC Neuroscience. 5, (2004).
  21. Kaspar, B. K., Vissel, B., Bengoechea, T., Crone, S., Randolph-Moore, L., Muller, R., Brandon, E. P., Schaffer, D., Verma, I. M., Lee, K. F., Heinemann, S. F., Gage, F. H. Adeno-associated virus effectively mediates conditional gene modification in the brain. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (4), 2320-2325 (2002).
  22. Neve, R. L., Neve, K. A., Nestler, E. J., Carlezon, W. A. Use of herpes virus amplicon vectors to study brain disorders. Biotechniques. 39 (3), 9(2005).
  23. Pohl, M., Braz, J. Gene therapy of pain: emerging strategies and future directions. European Journal of Pharmacology. 429 (1-3), (2001).
  24. Rinaldi, A., Marshall, K. R., Preston, C. M. A non-cytotoxic herpes simplex virus vector which expresses Cre recombinase directs efficient site specific recombination. Virus Research. 65 (1), (1999).
  25. Choi, V. W., McCarty, D. M., Samulski, R. J. AAV hybrid serotypes: Improved vectors for gene delivery. Current Gene Therapy. 5 (3), (2005).
  26. Passini, M. A., Dodge, J. C., Bu, J., Yang, W., Zhao, Q., Sondhi, D., Hackett, N. R., Kaminsky, S. M., Mao, Q. W., Shihabuddin, L. S., Cheng, S. H., Sleat, D. E., Stewart, G. R., Davidson, B. L., Lobel, P., Crystal, R. G. Intracranial delivery of CLN2 reduces brain pathology in a mouse model of classical late infantile neuronal ceroid lipofuscinosis. Journal of Neuroscience. 26 (5), (2006).
  27. Samulski, R. J., Chang, L. S., Shenk, T. Helper-free stocks of recombinant adeno-associated viruses - normal integration does not require viral gene-expression. Journal of Virology. 63 (9), (1989).
  28. Kaplitt, M. G., Leone, P., Samulski, R. J., Xiao, X., Pfaff, D. W., Omalley, K. L., During, M. J. Long-term gene-expression and phenotypic correction using adenoassociated virus vectors in the mammalian brain. Nature Genetics. 8 (2), (1994).
  29. Johansen, J. P., Hamanaka, H., Monfils, M. H., Behnia, R., Deisseroth, K., Blair, H. T., LeDoux, J. E. Optical activation of lateral amygdala pyramidal cells instructs associative fear learning. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (28), (2010).
  30. Zhang, F., Gradinaru, V., Adamantidis, A. R., Durand, R., Airan, R. D., de Lecea, L., Deisseroth, K. Optogenetic interrogation of neural circuits: technology for probing mammalian brain structures. Nature Protocols. 5 (3), (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

حقن مكروي التجسيمي من ناقلات فيروسية وإذ تعرب عن لجنة المساواة العرقية recombinase البكتيري المحور إلى دراسة دور الجينات المستهدفة في الكوكايين مكيفة مكان ميول
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.