حقن مكروي التجسيمي من ناقلات فيروسية وإذ تعرب عن لجنة المساواة العرقية recombinase البكتيري المحور إلى دراسة دور الجينات المستهدفة في الكوكايين مكيفة مكان ميول

ملخص

توضح هذه المقالة كيفية microinject ناقلات فيروسية في مخ الفأر ثم اختبار في تفضيل مكان الهواء نموذج يتضمن مرحلة الاستحواذ، وإعادة الانقراض.

الملخص

Microinjecting المؤتلف الفيروسية (rAAV) ناقلات adenoassociated معربا عن لجنة المساواة العرقية في recombinase البكتيري المحور الماوس متميزة مناطق الدماغ إلى انتقائية الجينات خروج المغلوب من الفائدة يسمح لتعزيز الرقابة زمانيا ومحددة إقليميا من حذف الجينات، مقارنة مع الأساليب القائمة. بينما الشرطي حذف يمكن أيضا أن يتحقق من خلال التزاوج الفئران التي تعبر عن لجنة المساواة العرقية recombinase البكتيري المحور تحت سيطرة المروجين جين معين مع الفئران يحمل الجين floxed، حقن مكروي التجسيمي يسمح لاستهداف مناطق الدماغ منفصلة في نقاط زمنية مجرب محدد من الفائدة. في سياق الكوكايين الهواء تفضيل مكان، وغيرها من النماذج السلوكية مثل الكوكايين الإدارة الذاتية أو التوعية الحركية التي يمكن أن تنطوي على الانسحاب، وانقراض و / أو إعادة مراحل، هذه التقنية مفيدة بشكل خاص في استكشاف مساهمة فريدة من الجينات المستهدفة لهذه متميزة مراحل من النماذج السلوكية للاللدونة الكوكايين التي يسببها. على وجه التحديد،هذا الأسلوب يسمح للالاجتثاث الانتقائي من الجينات المستهدفة خلال مراحل منفصلة من سلوك لاختبار مساهمتها في السلوك عبر الزمن. في نهاية المطاف، هذا الفهم يسمح للعلاجات أكثر المستهدفة التي هي الأقدر على معالجة عوامل الخطر الأكثر فعالية التي تطرح نفسها خلال كل مرحلة من مراحل السلوك الادمان.

المقدمة

الكوكايين هو منبه نفسي يعزز إلى حد كبير. بعد التعرض المتكرر، تحدث العديد من التعديلات الجزيئية والخلوية في الثواب ذات الصلة دوائر الدماغ التي يعتقد أنها تؤدي إلى القهري المخدرات سلوك التماس، مما دفع ارتفاع معدلات الانتكاس التي تشكل مشكلة خطيرة السريرية ^1. الكوكايين تمارس هذه الآثار السلوكية طويلة الأمد من خلال تنظيم التعبير الجيني. لدراسة التعديلات التي تنشأ عن استخدام الكوكايين المزمن، وقد استخدمت نماذج القوارض قبل السريرية على نطاق واسع. واحدة من هذه النموذج هو تفضيل مكان الهواء (CPP) نموذج. هذا النموذج ينطوي على تطوير جمعية المستفادة بين بيئة محايدة سابقا وخصائص مجزية من الكوكايين. بعد عدة أزواج من الكوكايين مع غر....

البروتوكول

وتجرى جميع الإجراءات وفقا لكلية طب وايل كورنيل المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام القواعد.

1. إعداد والإعداد لالتجسيمي تسليم ناقلات فيروسية

1. إذا الملوثة صك، مسحة معقمة، أو من ناحية ارتداء القفازات المعقمة قبل ملامسة سطح غير معقمة، وتجاهل أو إعادة تعقيم أداة باستخدام حبة تعقيم الساخنة، وتجاهل مسحة أو تغيير لقفازات معقمة جديدة.
2. ضع قفص الفأر مع الفراش على كتلة الحرارة لتدفئة للانتعاش بعد الجراحة.

النتائج

CPP

بعد أداء CPP على الفئران microinjected، ينبغي للمرء أن تحقق من أن الفوج من السيطرة حقن (rAAV-GFP) الفئران قد اكتسبت عادة تفضيل للغرفة التجارية المقترنة المخدرات (الشكل 1A، 1B). تعتبر الفئران لاكتسبوا تفضيلها لغرفة خاصة عندما تفضيل الكوكايين (الوقت الذي يقضيه في غرفة الكوكايين تقرن ناقص الوقت الذي يقضيه في قاعة المالحة إقران) هو أعلى بكثير بالمقارنة مع درجة تفضيل خط الأساس (الشكل 1B، A مق.......

المناقشة

إقليميا وزمنيا محددة الاجتثاث الجيني عبر حقن مكروي التجسيمي من ناقلات فيروسية جنبا إلى جنب مع CPP يتضمن الانقراض ومراحل إعادة يسمح للتحقيق في المساهمات المحددة من الجينات إلى ثلاث مراحل متميزة من السلوك الادمان مثل. في حين خروج المغلوب الشرطي الذي يتحقق الاستفادة من نظام لجنة المساواة العرقية-LoxP التقليدية ينص على المكانية والزمان محدود الاجتثاث الجينات، microinjecting stereotaxically جنة المساواة العرقية، recombinase البكتيري المحور في مناطق الدماغ منفصلة من الفئران floxed تسمح .......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
غرف نشاط تفضيل المكان المكيفة Med	Associates، Inc. ، St. Albans ، VT ، الولايات المتحدة الأمريكية	MED-CPP-MS
نظام محاذاة تجسيمي للماوس	David Kopf Instruments ، Tujunga ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية	موديل 900
محاقن هاميلتون	شركة هاميلتون ، رينو ، نيفادا ، الولايات المتحدة الأمريكية	7634-01
rAAV2-Cre-GFP	Vector BioLabs ، فيلادلفيا ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكية	7016
rAAV2-GFP	Vector BioLabs ، فيلادلفيا ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكية	7004