مقالة منهجية

A-متعدد القطب نظام التصحيح، المشبك بمساعدة الحاسوب

DOI:

10.3791/50630

⸱

أكتوبر 18, 2013

 , 
1Laboratory of Neural Microcircuitry - Brain Mind Institute, Ecole Polytechnique Federale de Lausanne

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

متعدد القطب التسجيلات التصحيح، المشبك يشكل مهمة معقدة. نحن هنا تظهر كيف، من خلال أتمتة العديد من الخطوات التجريبية، فمن الممكن لتسريع عملية تؤدي إلى تحسن نوعي في الأداء وعدد من التسجيلات.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقنية التصحيح، المشبك هو اليوم الأسلوب الأكثر راسخة لتسجيل النشاط الكهربائي من الخلايا العصبية الفردية أو المقصورات الخاصة التحت خلوية. ومع ذلك، فإن تحقيق التسجيلات مستقرة، حتى من الخلايا الفردية، يبقى إجراء تستغرق وقتا طويلا من التعقيد. أتمتة العديد من الخطوات بالتزامن مع عرض المعلومات فعالة يمكن أن تساعد إلى حد كبير التجريبيون في أداء عدد أكبر من التسجيلات مع زيادة الموثوقية وفي وقت أقل. من أجل تحقيق التسجيلات على نطاق واسع استنتجنا النهج الأكثر فعالية هو عدم تلقائية تماما ولكن عملية لتبسيط الخطوات التجريبية وتقليل فرص الخطأ البشري في حين تتضمن بكفاءة تجربة المجرب وردود الفعل البصري. مع هذه الأهداف في الاعتبار وضعنا نظام بمساعدة الحاسوب الذي يركز كل الضوابط اللازمة لمتعدد القطب تجربة التصحيح، المشبك في واجهة واحدة، والمبادلات التجارغمبد اللاسلكية المتوفرة ially، أثناء عرض المعلومات والإرشادات المتعلقة العظة التجربة على شاشة الكمبيوتر. نحن هنا تصف المكونات المختلفة للنظام الذي سمح لنا لتقليل الوقت المطلوب لتحقيق تكوين تسجيل وبشكل كبير زيادة فرص تسجيل أعداد كبيرة من الخلايا العصبية في وقت واحد بنجاح.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

القدرة على تسجيل وتنشيط مواقع متعددة مع الدقة ميكرومتر مفيد للغاية لتحقيق تجريبيا على فهم أفضل للنظم العصبية. وقد تم تطوير العديد من التقنيات لتحقيق هذه الغاية ولكن لا شيء يسمح القرار submillivolt تحقيقه عن طريق تقنية التصحيح، المشبك، من الضروري لدراسة النشاط دون العتبي والإمكانات الفردية بعد المشبكي. نحن هنا تغطية تطوير نظام التصحيح، المشبك بمساعدة الحاسوب اثني عشر القطب تهدف إلى تسجيل في وقت واحد وتحفيز عدد كبير من الخلايا الفردية بدقة كافية لدراسة الربط العصبية. بينما العديد من التطبيقات الأخرى يمكن تصورها لمثل هذا النظام، فإنه يفسح المجال بشكل خاص لدراسة الربط متشابك بالنظر إلى أن عدد الاتصالات الممكنة ضمن مجموعة من الخلايا العصبية تنمو بشكل متناسب مع مربع عدد الخلايا العصبية في السؤال. لذلك، في حين أن نظام مع ثلاثة أقطاب يسمح اختبارحدوث ما يصل الى ستة اتصالات وغالبا ما يسجل واحدة واحدة، وتسجيل اثني عشر الخلايا العصبية يسمح اختبار حدوث ما يصل الى 132 الاتصالات ومراقبة كثير من الأحيان أكثر من اثني عشر (الشكل 1). مراقبة العشرات من الاتصالات في وقت واحد يجعل من الممكن لتحليل تنظيم الشبكات الصغيرة واستنتاج الخصائص الإحصائية للبنية الشبكة التي لا يمكن بحثها إلا 1. وعلاوة على ذلك، والتحفيز الدقيق للخلايا عديدة كما يسمح الكمي للتجنيد الخلايا بعد المشبكي 2.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. تحضير المعدات

  1. المتلاعبين التحكم من جهاز كمبيوتر
    1. ربط كل مربع تحكم مياداة مجهرية إلى الكمبيوتر من خلال المنافذ التسلسلية (RS-232).
    2. تنفيذ الأوامر لتحديد المواقع، والاستعلام عن ضبط إعدادات ليتم إرسالها عبر المنفذ التسلسلي. السرعة والتوافق الأجهزة القضايا نظرا ينصح C / C + + كلغة البرمجة.
    3. توحيد النظام المرجعي من المتلاعبين بحيث الصفر هو أقرب موقف ممكن فيما يتعلق المحركات ويتم توجيه حركة إيجابية بعيدا عن المحركات.
    4. وضع المجهر في موقعها المركزي 2 مم فوق العينة البؤري (الإحداثيات [0، 0، 2000]).
    5. متجر، لكل مناور، الإحداثيات المحلية التي تسمح غيض من ماصة التي يتعين مراعاتها في مركز مجال الرؤية من المجهر. هذه هي النقطة المرجعية الأولي لكل القطب.
  2. Visuaمواقف القطب ليز. ومن المفيد جدا أن تكون قادرة على تتبع موقف كل قطب كهربائي أثناء التجربة. تمثيل رسومي هي الطريقة الأكثر بديهية لتحقيق هذا. تحقيقا لهذه الغاية يجب أن تكون مطابقة النظم المرجعية من كل قطب كهربائي وذلك من المجهر. وهناك طريقة بسيطة لتحقيق ذلك هو:
    1. جلب غيض من القطب إلى مركز مجال الرؤية.
    2. تخزين موقف على كل محور من مناور ولكل محور المجهر.
    3. تنفيذ مع محور س للمناور حركة كبيرة نسبيا (1 مم).
    4. تحديد موقع الطرف مرة أخرى تتحرك فقط المجهر.
    5. حساب الفرق في موقف المجهر منذ تم قياس ذلك الماضي. هذه هي التوقعات لحركة محور القطب على محاور المجهر.
    6. كرر الخطوات من 2،3-2،5 لY و Z محاور مناور القطب. وهذا يسمح مصفوفة من التوقعات على المجهر محاور يتم تحديدها (<قوي> الشكل 2) وتسمى أيضا مصفوفة جيب التمام:
      figure-protocol-1
    7. عكس هذه المصفوفة لتجعل من الممكن لحساب الحركات، في ثلاثة أبعاد، التي تتطلبها مناور الكهربائي للوصول إلى موقف معين في المجهر نظام الإحداثيات:
      figure-protocol-2
    8. باستخدام النقطة المرجعية الأولي وجيب التمام مصفوفة تحديد موقف من كل قطب كهربائي في المجهر إحداثيات.
    9. عرض بيانيا، استنادا إلى إحداثيات المجهر، موقف كل الكهربائي على فترات منتظمة. اخترنا لاستخدام C / C + + مكتبات الرسم (GDI +) لرسم المواقف القطب كل 40 ميللي ثانية.
    10. كرر الخطوات من 1.2.1 - 1.2.7 كل مرة يتم تغيير زوايا مناور أو إذا كانت هناك حاجة تغير موقف من عدة مليمترات، على سبيل المثال، عندما يتم تغيير نوع القطب.
  3. تمكين تخزين positioنانوثانية من الميزات ذات الصلة في الأنسجة، مثل الخلايا أو النقاط المرجعية التشريحية، في إحداثيات المجهر.
  4. الحصول على الفيديو وتراكب المعلومات ذات الصلة.
    1. ميكانيكيا محاذاة محور س من حركة المجهر مع المحور الأفقي للكاميرا المجهر.
    2. تثبيت على جهاز الكمبيوتر الى framegrabber مع لقطات فيديو حية والقدرة تراكب وعدة تطوير البرمجيات (SDK).
    3. تنفيذ عملية عرض الفيديو الحية مع SDK.
    4. تحويل المجهر تنسيق النظام إلى نظام مرجعي الكاميرا عن طريق الترجمة والتحجيم المناسب.
    5. رسم ملامح ذات الصلة في الإحداثيات الكاميرا وتراكب على لقطات فيديو حية الصورة الناتجة على فترات منتظمة خلال حوالي 40 ميللي ثانية (الشكل 3).
  5. مكبرات صوت السيطرة.
    1. استخدام البرنامج مكبر للصوت للسيطرة على إعدادات مكبر للصوت من واجهة.
  6. شاركntrol الذبذبات.
    1. توصيل الذبذبات إلى جهاز الكمبيوتر باستخدام المنافذ التسلسلية.
    2. تحديد نطاق الذبذبات، واقتران والقرار الزماني للخطوات مختلفة لإجراء التصحيح، المشبك في الجهد المشبك (مثل القطب في الحمام، وتشكيل الختم، وتكوين خلية كاملة) والمشبك الحالي.
    3. إرسال الأوامر المناسبة الإعداد الذبذبات كلما تصدر الأوامر مكبر للصوت من واجهة.
  7. السيطرة ماصة الضغط.
    1. تجميع نظام مراقبة ضغط وفقا لشكل 4.
      1. استخدام 12 V / 5 V امدادات الطاقة لتزويد كل مكونات إلكترونية بشكل مناسب.
      2. وصل الناتج من مضخة واحدة الغشاء إلى المخزن المؤقت الضغط الايجابي (وعاء مل 100).
      3. ربط مدخلات واحدة مضخة الغشاء إلى المخزن المؤقت الضغط السلبي (حاوية مل 100).
      4. توصيل أنابيب حامل ماصة لاستشعار الضغط في pressuإعادة نظام التحكم وصمام هوائي الذي يصل إلى حجرة الضغط الرئيسية.
      5. ربط كل من المخازن المؤقتة إلى الضغط صمام متصلا حجرة الضغط الرئيسية.
      6. ربط صمام بين المقصورة الرئيسية وضغط الغلاف الجوي.
      7. ربط جهاز استشعار الضغط على حجرة الضغط الرئيسية.
      8. ربط جهاز استشعار الضغط على كل العازلة.
      9. ربط نظام مراقبة ضغط إلى لوحة الحصول على البيانات.
      10. ربط كل جهاز استشعار الضغط لإدخال واحد التناظرية.
      11. ربط كل صمام إلى الإخراج الرقمي.
    2. إزالة الضغط الجوي الإزاحة من جميع أجهزة الاستشعار عن طريق فتح كل صمامات باستثناء تلك التي تربط لمضخات الغشاء وطرح الضغط قياسها.
    3. تنفيذ السيطرة على ضغط
      1. تعريف في واجهة تحكم لتنشيط أو تفعيل اجتثاث السيطرة على ضغط إيجابي لكل ماصة.
      2. تحديد الحد الأدنى لضغط إيجابي ماصةق من حوالي 70 م بار.
      3. دوري (كل 0.5 ثانية) كشف كلما يسقط الضغط في ماصات تحت السيطرة على ضغط نشطة تحت عتبة محددة.
      4. على عتبة فتح معبر المخزن المؤقت الضغط الايجابي لحجرة الضغط الرئيسية وهذه المقصورة نحو ماصة في سؤال خلال فترات وجيزة (20 ميللي ثانية) حتى الضغط في ماصات فوق العتبة. إغلاق كافة الصمامات الأخرى.
      5. دي تفعيل مزيد من السيطرة على ضغط كما هو بدأ الاقتراب النهائي نحو خلية من الفائدة.
    4. تطبيق الضغط السلبي لتشكيل الختم
      1. إغلاق كافة الصمامات وفتح صمام السلبية العازلة الضغط نحو المقصورة الرئيسية وضغط هذه المقصورة نحو ماصة في السؤال لمدة يتطلب المجرب عن طريق الحفاظ على ضغط زر.
  8. مركزة الأوامر إلى جهاز واجهة الإنسان.
    1. توصيل wirele المتاحة تجارياق ق غمبد إلى جهاز الكمبيوتر.
    2. تنفيذ قراءات من وضع عصا التحكم. على سبيل المثال، استخدام المكتبات دايركت لC / C + + لأداء قراءات كل 5 ميللي ثانية.
    3. مقارنة الوضع الحالي مع الوضع السابق للكشف الذي تم الضغط على الأزرار، أو صدر أبقى الضغط منذ الخطوة في المرة السابقة.
    4. تخصيص وظائف لكل زر في غمبد. ويرد مثال على هذا التعيين في الشكل 5.

2. إجراءات التصحيح، المشبك

  1. إعداد شرائح الدماغ في المنطقة من الفائدة.
  2. وضع شريحة الدماغ من الفائدة، مع المنطقة من اهتمام في وسط نطاق النزوح المجهر.
  3. اختيار الخلية
    1. تحديد الخلايا من الفائدة من خلال التصفح مع المجهر. تخزين الموقف من الخلايا استنادا المجهر تنسيق النظام مع حق الماوس الأيمن فوق على الشاشة لقطات فيديو حية على رأس خلية من الفائدة.
      2. فإن واجهة رسومية عرض الخلايا المحددة فضلا عن بال micropipettes لمحة والبرمجيات العالمية ستضيف علامة على موقف الخلية التي سيتم مضافين على الصور. بالإضافة إلى ذلك يتم التقاط صورة للخلية للرجوع إليها مستقبلا في ملف 'خلية #. JPG.
  • إسناد الخلايا لماصات
    1. بعد تحديد الخلايا من الفائدة، تعيين ماصة التي سوف يسجل كل خلية. يوفر واجهة رسومية ضوابط التعيين التي يجب أن يتم تعيين. تصور معاينة التكوين النهائي عن طريق تحديد خانة الاختيار "إظهار المواقف النهائية.
    2. حدد كل ماصة الذي هو المطلوب معاينة الموقف النهائي أو تحقق من 'تحديد الكل' مربع. تعطيل عرض الوضع الحالي لتحسين التصور إذا لزم الأمر.
  • إعداد الماصات
    1. ملء الماصات (6-8 MΩ وعادة ما تكون أفضل إذا تم استخدام العديد من الماصات) وايال حل داخل الخلايا وتحميلها على أصحابها. وضع headstages في التثبيتات ولكن لا تنزلق إلى الأمام لتجنب لمس حمام مع طرف ماصة.
    2. تمكين السيطرة على ضغط إيجابي وحدد كل ماصات للتأكد من أن النصائح سوف تبقى نظيفة. الشريحة بلطف كل headstage في المكان.
  • تحديد موقع نصائح ماصة
    1. وضع المجهر لمكانة مركزية مع التركيز 3 مم فوق شريحة عن طريق الضغط على زر R2 حين عقد زر 'A'. استخدام موقف المقابلة لكل مناور كما المخزنة من التجربة السابقة عن طريق الضغط على زر L2 أثناء الضغط على زر A.
      ملاحظة: عند هذه النقطة يجب أن يكون هناك إما الظل مميزة من ماصة في رأي أو حركة صغيرة على طول محور ماصة ينبغي أن تكون كافية لنلاحظ أنه في معظم الحالات. تعويض عن الاختلافات الطفيفة في شكل ماصة لابد من القيام بها يدويا.
    2. جلب غيض ماصة في التركيز. وضع طرف على النقطة المركزية الأحمر من عرض الفيديو دون تحريك المجهر (يجب أن يكون لا يزال في موقف [0، 0، 2000]).
    3. إبلاغ البرامج التي ماصة هو في مركز الشاشة عن طريق الضغط على زر Z في حين عقد زر C. بعد يقع كل طرف ماصة، وإرسال ذلك ماصة الوراء بحيث التالية واحدة يمكن أن يكون موجودا عن طريق الضغط على زر L1 في حين عقد الزر A.
  • تقترب من الخلايا
    1. مرة واحدة كل نصائح ماصة وقد تقع بالضبط وينسب كل ماصة للخلية، ضع تلقائيا ماصات على مقربة من الخلايا كل منها. ببساطة انقر بزر الماوس الأيمن في وسط مجموعة من الخلايا وحدد الخيار 'الكتلة' في القائمة المنبثقة. على نافذة خيارات الكتلة التي ستظهر، حدد كافة ماصات الذي تريد وضع في هذا الوقت وانقر على "الذهاب مع جميع ماصات فحص '. كرر هذه العملية لكل مجموعة من الخلايا في المصالح.
    2. المؤسسة العامةrform النهج النهائي يدويا. موقف ماصات نسبة إلى الخلايا يمكن تحديد مختلف ولكن عادة هو ببساطة 200 ميكرون بعيدا عن الخلية في محور ماصة و 200 ميكرومتر فوقه في الاتجاه العمودي، وهو ما يكفي للحفاظ على غيض ماصة خارج النسيج . الانتظار حتى يتم الانتهاء من تحديد المواقع من الماصات ونقل المجهر نحو ماصة عن طريق الضغط على زر R1 أثناء الضغط على زر C.
    3. إعادة تقويم كل موقف ماصة من خلال التركيز المجهر على طرفها في أي مكان في عرض الفيديو والضغط على زر B في حين عقد زر C. A شبكة مربعة يجب أن يظهر لفترة وجيزة مما يدل على موقف تحديدها من ماصة. إذا كان الموقف غير صحيح، ضع طرف على النقطة المركزية لعرض الفيديو واضغط على زر Z في حين عقد زر C.
  • إنشاء تكوين الخلية المرفقة
    1. تؤكد أن الخلية التي تهم ماصة الحالي هو صحيحملحوظ. خلاف ذلك نقل المجهر لتتناسب مع خلية في المصالح مع النقطة الحمراء المركزية. علامة الخلية عن طريق الضغط على زر Y في حين عقد زر زر L2 الصحافة C. حين عقد زر C لوضع ماصة 200 ميكرون بعيدا عن الخلية المسندة إليه، فإن المجهر الانتقال تلقائيا إلى موقف المقابلة.
    2. ضبط الموقف ماصة بحيث يطابق نقطة حمراء. ضبط ماصة تعويض عن طريق الضغط على زر R1 أثناء الضغط على زر X.
    3. تفعيل نبض الاختبار عن طريق الضغط على زر L1 في حين عقد الزر X. نقترب ببطء ماصة للخلية التي تعزى.
    4. على مراقبة تشكيل الدمل على سطح غشاء الخلية تطبيق نبضة قصيرة من الضغط السلبي عن طريق الضغط على زر Y في حين عقد زر Z للسماح الضغوط التي مورست لتصل إلى الخلية. يجب إنشاء المحتمل عقد حوالي 65mV في هذه المرحلة عن طريق الضغط على زر L2 حين عقد الزر X.
  • تكوين خلية كاملة
    1. مرة واحدة يتم تشكيل جيجا ختم لكل خلية، تبدأ تمزق الأغشية عن طريق تطبيق الضغط السلبي.
  • أداء التسجيلات
    1. استخدام نظام التحفيز / الاستحواذ على أداء التسجيلات الخاصة بك. تطبيق البقول أو القطارات من البقول على خلية فرد واحد في وقت ومراقبة الردود على الخلايا المتبقية إلى خريطة الربط بين الخلايا المسجلة.
  • تنحسر ماصات
    1. حالما يتم الانتهاء من التسجيلات، تنحسر ببطء ماصات من الأنسجة بالنقر بزر الماوس الأيمن على الجدول الراديوية زر. اختر 'تنحسر-> الماصات 500 ميكرون' أن يكون ماصات تنحسر مسافة قصيرة على طول محاورها. مراقبة الانجراف في المحتملة للخلايا (تطهير نصائح من خلال تطبيق بعض الضغوط الإيجابية قد تساعد).
    2. في الانحسار ماصات كل في طريق العودة، تعيين سرعة تحديد المواقع ل'سريعة' وكرر نفس العملية ولكن اختيار "الكل" الخيار. إزالة المستخدمةالماصات عن طريق تحريك بلطف خارج headstages وفك ماصات من أصحاب. ومن المفيد لتجنب التواء في أصحاب قواعدها لأن هذا قد تتداخل بشكل كبير مع الموقف ماصة.

    • الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    النتائج

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    وفقا للأساليب المذكورة أعلاه نجحنا في أداء تسجيل خلية كاملة لمدة تصل إلى اثني عشر الخلايا العصبية في وقت واحد، ومضاعفة تقريبا على أكبر عدد من الخلايا العصبية في وقت واحد حتى الآن، فرضت التصحيح. وترد أمثلة على شبكات الاتصالات متشابك مباشرة بين الخلايا العصبية الهرمية سجلت في طبقة الخامس من القشرة الحسية الجسدية من الفئران في الشكل 6.

    تحديد ملامح احتمال اتصال بوصفها وظيفة من المسافة بين جسدية لإعطا...

    الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    المناقشة

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    سؤال يطرح نفسه على الفور عادة بشأن معدل نجاح العملية وصفنا. بالنسبة لمعدلات نجاح عالية إعداد أمر ضروري. يجب أن يكون ماصات الفتحات التي هي غيض كافية لخلايا الكائنات المسجلة. تصفية الحل داخل الخلايا لتجنب انسداد ماصات مهم أيضا. نظيفة للغاية الماصات، وسحبت حديثا هي شرط آخر. A توزيع ذي الحدين هو أبسط نموذج التي يمكن استخدامها لفهم كيف تؤثر هذه القضايا العائد النهائي. فمن المعقول أن نتوقع مجرب من ذوي الخبرة والمعدات المناسبة لتحقيق نسبة نجاح 80٪ أو أكثر في تسجيل الخلايا العصبية الفردية...

    الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    الإفصاحات

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

    شكر وتقدير

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    نود أن نشكر جلعاد سيلبيربيرج، ميشيل بغناتيلي، توماس K. بيرغر، لوكا Gambazzi، وسونيا جارسيا لمشورة قيمة بشأن التحسينات لأتمتة إجراءات التصحيح، المشبك. نشكر راجنيش رانجان للحصول على المشورة والمساعدة في تنفيذ برامج قيمة. وقد تم تمويل هذا العمل في جزء من مشروع الاتحاد الأوروبي المشبك وجزئيا من قبل برنامج العلوم حدود الإنسان.

    الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    المواد

    قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
    الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
    المجهرأوليمبوسBX51WI40X الغمر
    Luigs NeumannSM-5البروتوكول التسلسلي المستخدم
    مكبراتAxon InstrumentsMultiClamp 700BSDK المستخدمة
    الكاميراحتى الضوئياتVS 55BNC الإخراج التناظري
    Framegrabberترجمة البياناتDT3120SDK المستخدمة
    راسمات الذبذباتTektronixTDS 2014الاتصال التسلسلي
    الحصول على البياناتInstruTECHITC 1600
    الحصول على البياناتالوطنيةمكتبة PCI-6221المستخدمة (.dll)
    صمام الضغطSMCSMC070C-6BG-32
    مستشعر الضغطغشاء هانيويل24PCDFA6G
    مضخةSchegoOptimal
    الموضوعية المعالجات الصوت الأدوات

    المراجع

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
    1. Perin, R., Berger, T. K., Markram, H. A synaptic organizing principle for cortical neuronal groups. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 5419-5424 (2011).
    2. Berger, T. K., Silberberg, G., Perin, R., Markram, H. Brief Bursts Self-Inhibit and Correlate the Pyramidal Network. PLoS Biol. 8, e1000473(2010).
    3. Fino, E., Yuste, R. Dense inhibitory connectivity in neocortex. Neuron. 69, 1188-1203 (2011).
    4. Packer, A. M., Yuste, R. Dense, Unspecific Connectivity of Neocortical Parvalbumin-Positive Interneurons: A Canonical Microcircuit for Inhibition. J. Neurosci. 31, 13260-13271 (2011).
    5. Berger, T. K., Perin, R., Silberberg, G., Markram, H. Frequency-dependent disynaptic inhibition in the pyramidal network: a ubiquitous pathway in the developing rat neocortex. J. Physiol. 587, 5411-5425 (2009).
    6. Kodandaramaiah, S. B., Franzesi, G. T., Chow, B. Y., Boyden, E. S., Forest, C. R. Automated whole-cell patch-clamp electrophysiology of neurons in vivo. Nat. Methods. 9, 585-587 (2012).
    7. Anastassiou, C. A., Perin, R., Markram, H., Koch, C. Ephaptic coupling of cortical neurons. Nat. Neurosci. 14, 217-223 (2011).
    8. Prakash, R., et al. Two-photon optogenetic toolbox for fast inhibition, excitation and bistable modulation. Nat. Methods. 9, 1171-1179 (2012).
    9. Papagiakoumou, E., et al. Scanless two-photon excitation of channelrhodopsin-2. Nat Methods. 7, 848-854 (2010).
    10. Ko, H., et al. Functional specificity of local synaptic connections in neocortical networks. Nature. 473, 87-91 (2011).
    11. Wickersham, I. R., et al. Monosynaptic Restriction of Transsynaptic Tracing from Single, Genetically Targeted Neurons. Neuron. 53, 639-647 (2007).
    12. Liang, C. W., Mohammadi, M., Santos, M. D., Tang, C. -M. Patterned Photostimulation with Digital Micromirror Devices to Investigate Dendritic Integration Across Branch Points. J. Vis. Exp. (49), e2003(2011).
    13. Nikolenko, V., et al. SLM Microscopy: Scanless Two-Photon Imaging and Photostimulation with Spatial Light Modulators. Front Neural Circuits. 2, (2008).

    الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    إعادة الطباعة والأذونات

    طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

    طلب إذن

    الوسوم

    Giga Seal

    مقالات ذات صلة