إعداد الخلايا العصبية الأولية للتصور neurites التي في دولة مجمدة رطب عن طريق التصوير المقطعي البرد الإلكترون

Sarah H. Shahmoradian; Mauricio R. Galiano; Chengbiao Wu; Shurui Chen; Matthew N. Rasband; William C. Mobley; Wah Chiu

doi:10.3791/50783

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إعداد الخلايا العصبية الأولية للتصور neurites التي في دولة مجمدة رطب عن طريق التصوير المقطعي البرد الإلكترون

70.6K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/50783

⸱

فبراير 12, 2014

Sarah H. Shahmoradian¹ , Mauricio R. Galiano² , Chengbiao Wu³ , Shurui Chen⁴ , Matthew N. Rasband² , William C. Mobley³ , Wah Chiu⁴

¹Department of Molecular Physiology and Biophysics, Baylor College of Medicine, ²Department of Neuroscience, Baylor College of Medicine, ³Department of Neuroscience, University of California at San Diego, ⁴National Center for Macromolecular Imaging, Verna and Marrs McLean Department of Biochemistry and Molecular Biology, Baylor College of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

للحفاظ على العمليات العصبية لتحليل التركيبية، ونحن تصف بروتوكول للتصفيح من الخلايا العصبية في المقام الأول على شبكات المجهر الإلكتروني تليها فلاش تجميد، مما أسفر عن عينات معلقة في طبقة من الجليد الزجاجي. يمكن فحص هذه العينات باستخدام المجهر البرد الإلكترون لتصور هياكل على مقياس متناهي الصغر.

الملخص

neurites التي، على حد سواء التشعبات والمحاوير، هي العمليات الخلوية العصبية التي تمكن من توصيل النبضات الكهربائية بين الخلايا العصبية. تحديد هيكل neurites التي أمر بالغ الأهمية لفهم كيفية نقل هذه المواد والعمليات التي تدعم إشارات الاتصالات متشابك. المجهر الإلكتروني (EM) وقد استخدمت تقليديا لتقييم ميزات التركيبية داخل neurites التي، إلا أن التعرض للمذيبات العضوية خلال الجفاف والراتنج التضمين يمكن أن تشوه الهياكل. هدف غير الملباة المهم هو صياغة الإجراءات التي تسمح للتقييمات الهيكلية لا تتأثر هذه القطع الأثرية. هنا، وضعنا بروتوكولا مفصلة وقابلة للتكرار لزراعة وتجميد فلاش neurites التي كاملة من الخلايا العصبية الأولية المختلفة على شبكات المجهر الإلكتروني تليها الفحص مع التصوير المقطعي البرد الإلكترون (البرد ET). هذا الأسلوب يسمح لل3-D التصور، neurites التي رطب مجمدة في القرار نانومتر، وتسهيل ASSEssment خلافاتها الشكلية. بروتوكول لدينا تعطي نظرة غير مسبوقة من الظهرية جذر عقدة (DRG) neurites التي، وتصور neurites التي الحصين في حالتها شبه الأم. على هذا النحو، وهذه الأساليب إنشاء مؤسسة للدراسات المستقبلية على neurites التي كل من الخلايا العصبية الطبيعية وتلك التي تأثرت الاضطرابات العصبية.

المقدمة

الخلايا العصبية إنشاء مجمع الدوائر الأساسية لوظيفة الجهاز العصبي المركزي والمحيطي من خلال وضع التشعبات لتلقي المعلومات والمحاور، وغالبا ما تستغرق وقتا طويلا، وعلى التواصل مع الخلايا العصبية المصب. ثمرة neurite يلعب دورا أساسيا أثناء التطور الجنيني وتمايز الخلايا العصبية وصيانة neurites التي تدعم بشكل حاسم وظيفة الجهاز العصبي. عمليات التهاب الأعصاب أيضا ميزة بالغة في إصابة الخلايا العصبية والتجديد، فضلا عن اضطرابات الجهاز العصبي. دراسة الهندسة المعمارية العصبية أمر حاسم لفهم كل من المخ المعتادة والمريضة. لحسن الحظ، توجد نظم زراعة الخلايا العصبية ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية التي يمكن أن ألخص الهياكل الخلوية المعقدة وغير المت....