يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

فحوصات لتحديد رواية الأدوية المضادة للفيروسات ضد فيروس اللسان الأزرق

13.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/50820

⸱

أكتوبر 11, 2013

 ,  , 
1Division of Infectious Diseases, Department of Medicine, University of Alabama at Birmingham, 2Molette Laboratory for Drug Discovery, Department of Chemistry and Biochemistry, Auburn University

في هذه المقالة

ملخص

وقد وضعت ثلاثة فحوصات، بما في ذلك تأثير الاعتلال الخلوي (CPE) القائم على الفحص، فحص الجرعة والاستجابة والوقت من بين الجمع (قسم) مقايسة، إلى أقصى حد، والتحقق من صحة استخدامها لتحديد الأدوية المضادة للفيروسات ضد فيروس اللسان الأزرق رواية (BTV)، فضلا لتحديد آلية ممكنة من بين العمل (وزارة الزراعة) لمضادات الفيروسات التي تم تشخيصها حديثا.

الملخص

لتحديد الأدوية المضادة للفيروسات محتملة ضد BTV، وضعنا، والتحقق من صحتها ثلاثة الأمثل المقايسات المقدمة هنا. وكان الفحص القائم على CPE الفحص الأولى وضعت لتقييم ما إذا كان مركب أظهر أي فعالية المضادة للفيروسات والتي استخدمت لفحص مكتبة مجمع كبير. وفي الوقت نفسه، ويمكن أيضا أن يتم تقييم السمسة من الأدوية المضادة للفيروسات باستخدام مقايسة على أساس CPE. وقد تم تصميم مقايسة بين الجرعة والاستجابة لتحديد نطاق فعالية للفيروسات المحدد، أي 50٪ تركيز المثبطة (IC 50) أو التركيز الفعال (EC 50)، فضلا عن مجموعة من السمية الخلوية (CC 50). كان يعمل مقايسة قسم لدراسة وزارة الزراعة الأولية لتحديد الآلية الأساسية من الأدوية المضادة للفيروسات الرواية خلال دورة حياة BTV الفيروسية أو تأثير ممكن على المضيف الآلات الخلوية. هذه المقايسات الحيوية لتقييم فعالية المضادة للفيروسات في نظام الثقافة الخلية، واستخدمت لأبحاثنا الأخيرة تؤديجي إلى تحديد عدد من الأدوية المضادة للفيروسات رواية ضد BTV.

المقدمة

BTV هو النموذج المزدوج تقطعت بهم السبل الحمض النووي الريبي للفيروس في جنس الفيروسة الوقبية، والأسرة Reoviridae. BTV هي واحدة من أهم الأمراض من الماشية المحلية، بما في ذلك الأغنام والماعز والأبقار والحيوانات الأليفة الأخرى، مع 3000000000 $ / سنوات الضياع في جميع أنحاء العالم 1،2. وBTV المصلي الغريبة هو الممرض الحيوانية الهامة المدرجة في "وزارة الزراعة الأميركية العليا العواقب الثروة الحيوانية مسببات الأمراض." في الآونة الأخيرة، وإعادة الظهور BTV وقد تسبب انتشار واسع للمرض في الماشية والأغنام في العديد من البلدان في جميع أنحاء شمال أوروبا 3،4. نتيجة للأهمية الاقتصادية وكنظام نموذج، كان BTV موضوع الدراسات الجزيئية والجينية وهيكلية واسعة النطاق كما تم تطوير العديد من اللقاحات. ولكن نظرا لعدم وجود فحوصات المناسبة لاكتشاف الأدوية المضادة للفيروسات، لا توجد الأدوية المضادة للفيروسات المتاحة ضد BTV.

في الآونة الأخيرة إنتاجية عالية الفرز (HTS) الحملة باستخدام BTV كما في النظام النموذجي، ونحن دeveloped، إلى أقصى حد والتحقق من صحتها مقايسة على أساس CPE لتحديد الأدوية المضادة للفيروسات واسع الطيف محتملة ضد arboviruses 5. مقايسة على أساس CPE هو فحص معترف بها التي استخدمت في اكتشاف الأدوية المضادة للفيروسات ضد عدد من الفيروسات التي يسببها السريع ويمكن ملاحظتها CPE / موت الخلايا المبرمج 5-7. في نظامنا، بعد الإصابة BTV، CPE هو واضح في خلايا الفقاريات، بما في ذلك هيلا، BSR، وكلوة الجنين البشري 293T 8. ويمكن رصد CPE BTV التي يسببها وكميا باستخدام مختلف أساليب الكشف عن خلية الجدوى، بما في ذلك CellTiter جلو عدة بقاء الخلية كاشف (CTG عدة) 9. يحدد هذه المجموعة عدد من خلايا قابلة للحياة في الثقافة على أساس الكميات من ATP الخلوية المقدمة، وهو ما يشير إلى وجود الخلايا الحية عملية الأيض نشطة. في ظل الظروف الأمثل، القائم على الفحص CPE المقدمة هنا أظهر جدواه مع "مزيج وقياس" البروتوكول خطوة واحدة، والمرونة مع إشارات الانارة مستقرة. وفي الوقت نفسه، المركبات السامة reduالوراثة بقاء الخلية سيتم استبعاد في هذا الاختبار القائم على CPE. وأظهر الفحص القائم على CPE متانة وموثوقية لاكتشاف الأدوية المضادة للفيروسات ضد BTV، واستخدمت لفحص NIH المكتبات الجزيئية الصغيرة جزيء مستودع (MLSMR)، الأمر الذي يؤدي إلى تحديد ستة العنقودية رواية المحتملة المضادة للفيروسات مركب الرصاص (ق ) 5.

عندما تم التعرف على مركب مضاد للفيروسات المحتملة باستخدام مقايسة على أساس CPE، وسوف تحتاج إلى أن تخضع لعشرة تركيز الجرعة والاستجابة فحص لتحديد مدى فعالية المضادة للفيروسات والسمسة 2. فعالية المضادة للفيروسات، ممثلة على النحو تركيز 50٪ المثبطة (IC 50) أو التركيز الفعال 50٪ (EC 50)، هو تركيز للدواء الذي يثبط التي يسببها فيروس CPE في منتصف الطريق بين خط الأساس والحد الأقصى. السمسة الأدوية المضادة للفيروسات، أي تركيز السمسة 50٪ (CC 50)، هو تركيزمن المخدرات حمل 50٪ من السمسة بين خط الأساس والحد الأقصى. ويتم احتساب المؤشر انتقائية (SI)، كما تدل 50٪ SI (SI 50) من CC 50/50 IC الذي يحدد خصوصية المضادة للفيروسات ضد CPE التي يسببها الفيروس. وIC 50 (أو EC 50)، CC 50 و 50 SI القيم هي تدابير حاسمة لتحديد ما إذا كان مركب مضاد للفيروسات هو قوية وانتقائية لمزيد من التطوير المخدرات.

عندما أظهرت المضادة للفيروسات لا سمية العلني في المختبر، ولكن الفيروس منعت يسببها CPE والفيروسية دورة الحياة الإنتاجية، فمن المهم لتوصيف وزارة الزراعة 2 منها. بدأنا هذا التوصيف من خلال تنفيذ قسم فحص لتحديد الخطوات الممكنة (ق) من دورة الحياة الفيروسية التي يتأثر المضادة للفيروسات. عموما، أضيفت مجمع المضادة للفيروسات إلى الخلايا في أوقات مختلفة قبل أو عدوى فيروس آخر. إذا أضيفت مضادات الفيروسات إلى الخلايا المصابة إضافة إلى المستهدف قTEP أثناء الإصابة، فإنه من شأنه أن يؤدي إلى انخفاض النشاط بالمقارنة مع واحد والتي تم إضافتها قبل الخطوة. وبالتالي، دراسة قسم هو أمر حاسم لتحديد مدى فعالية المضادة للفيروسات من مركب، والهدف إمكاناته، إما على دورة الحياة الفيروسية أو آلات المضيفة المشاركة في دورة الحياة الفيروسية.

لجميع المقايسات الثلاثة، تم تحديد بقاء الخلية باستخدام عدة CTG التالية تعليمات الشركة الصانعة 5. هذا النظام بإخراج الإشارات الكشف التلألؤ الكافية التي يمكن تحليلها باستخدام برامج مختلفة في المنزل. تم التحقق من صحة كل فحص، وأجرى على الأقل في ثلاث نسخ مع ثمانية النسخ المتماثلة. لجميع البيانات التي تم الحصول عليها، تم تحليل ثلاثة معايير، بما في ذلك القيمة المتوسطة (AVE) والانحراف المعياري (STDEV)، وشارك في كفاءة الاختلاف (CV) لتحديد متانة مقايسة. مرة واحدة وقد تم تحديد متانة الفحص، سيتم زيادة تحليل البيانات ورسم باستخدام مختلف الاستاتيكا البيولوجية والجرافيكأدوات ج 2.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. الخلايا، والفيروسات والمركبات المضادة للفيروسات

  1. الحفاظ على خلايا BSR، وهو مشتق من الطفل الهامستر الكلى (BHK) الخلايا 10، في تعديل متوسطة النسر Dulbecco و(DMEM) تحتوي على 5٪ مصل العجل الجنين (FCS)، 100U/ml البنسلين و 100 ميكروغرام / مل الستربتوميسين.
  2. لجميع المقايسات الثلاث، لوحة الخلايا في DMEM مع 1٪ FCS، 100U/ml البنسلين و 100 ميكروغرام / مل الستربتوميسين، كما الأمثل سابقا 5. يشار هذه الوسيلة كما مقايسة المتوسطة لجميع المقايسات الثلاثة.
  3. احتضان كل الخلايا في الحاضنة عند 37 درجة مئوية، مع 5٪ CO 2 و 80-95٪ الرطوبة.
  4. لوحة، وتنقية نشر 10 نوع BTV (BTV-10) كما هو موضح سابقا 8. تمييع BTV-10 في مقايسة المتوسطة لكل فحوصات معينة.
  5. حل جميع مركبات اختبار في DMSO لتشكيل الأوراق المالية مع التركيز على 10 ملي. تخزين الأسهم في -20 درجة مئوية.
  6. تمييع مركبات لتركيزات المطلوب باستخدام مقايسة المتوسطة لالمكلفد المقايسات 2.

2. الفحص استنادا CPE-باستخدام CTG كيت

  1. خلايا BSR البذور إلى 384 صفيحة ميكروسكوبية جيدا (أسود، شكل قبل 16 × 24) عن طريق MicroFlo حدد موزع. كثافة البذر هو 5،000 خلية / جيدا، وحجم البذر هو 20 ميكرولتر لتحليل فعالية المضادة للفيروسات.
  2. احتضان الخلايا لمدة 2-3 ساعة حتى الحصول على خلايا ملتصقة إلى لوحة بدقة.
  3. إضافة مركب مضاد للفيروسات مع تركيز النهائي من 10 ميكرومتر إلى كل بئر. مزجها تماما.
  4. تمييع BTV لعيار المطلوب وإضافة 5 ميكرولتر BTV مع تدل وزارة الداخلية إلى كل بئر. للتحكم بشكل جيد، إضافة 5 ميكرولتر من وسائل الاعلام الفحص. احتضان الخلايا المصابة لمدة 72 ساعة عند 37 درجة مئوية، مع 5٪ CO 2 و 80-95٪ الرطوبة.
  5. في 72 HPI، ذوبان الجليد وتتوازن CTG العازلة وحكومة تصريف الأعمال الركيزة مجفف بالتجميد إلى درجة حرارة الغرفة قبل استخدامها. إعادة تشكيل متجانس حل كاشف CTG عن طريق خلط مجفف بالتجميد انزيم / الركيزة وكاشف العازلة وفقا لالتعليمات الشركة الإلكترونية لل.
  6. تتوازن لوحات مقايسة إلى درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة.
  7. إضافة حجم مساو (25 ميكرولتر) من الكواشف CTG إلى كل بئر من قبل موزع. بعد احتضان لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام، وقياس الإشارات التلألؤ باستخدام قارئ متعدد الأوضاع مع الوقت التكامل من 0.1 ثانية.

3. الفحص الجرعة والاستجابة

  1. خلايا BSR البذور إلى 384 صفيحة ميكروسكوبية جيدا (أسود، شكل قبل 16 × 24) عن طريق موزع، مع كثافة البذر من 5،000 خلية / جيدا في حجم البذر من 20 ميكرولتر لفحص فعالية المضادة للفيروسات و 25 ميكرولتر من أجل سمية الخلايا الفحص، على التوالي .
  2. احتضان الخلايا لمدة 2-3 ساعة عند 37 درجة مئوية، مع 5٪ CO 2 و 80-95٪ الرطوبة حتى الخلايا هي التي تعلق على لوحة جيدا.
  3. فحص عملية في منطقة الربع من لوحة 384 جيدا لكل مركب (أي ما يعادل 96 لوحة جيدا)، كما هو مبين في الجدول رقم 1. تخصيص ثمانية مكررات لكل تركيزفي فحص واحد. تعيين العمود الأول باسم مراقبة إيجابية دون إضافة مركب والفيروسات، والعمود الأخير (ال 12)، والسيطرة السلبية بإضافة الفيروس فقط دون المركبات.
  4. تمييع المركبات إلى 50 ميكرومتر في مقايسة المتوسطة وإضافة إلى العمود 2 الثانية في 20 ميكرولتر / جيد للفيروسات فعالية الفحص. مزج مركب خمس مرات باستخدام ماصة 8 قنوات شبه التلقائي إلى تركيز 25 ميكرومتر.
  5. باستخدام ماصة 8 قنوات شبه التلقائي، ونقل 20 ميكرولتر خليط 2 في العمود الثاني إلى العمود التالي (3 ش)، وتخلط جيدا لتشكيل تركيز 12.5 ميكرومتر. كرر هذه العملية عن طريق نقل 20 ميكرولتر من خليط العمود 3 الثالثة إلى العمود التالي (4 عشر) لتشكيل التخفيف شقين آخر مع تركيز 6.25 ميكرومتر. كرر هذا التخفيف المسلسل شقين حتى العمود ال 11. نضح وتجاهل 20 ميكرولتر من الخليط في العمود ال 11 بعد إضافة وخلط شركاتس اوند.
  6. إضافة BTV-10، على أساس من 0.01 وزارة الداخلية، إلى كل بئر من العمود إلى العمود 2 11 مع حجم 5 ميكرولتر / جيد. بعد إضافة الفيروس، ينبغي تركيز مركب النهائي في كل عمود يكون: 20 ميكرومتر في العمود 2، 10 ميكرومتر في العمود 3، واستمر مع التخفيف من شقين وصولا الى العمود 11 مع تركيز النهائي من 0.04 ميكرومتر.
  7. إضافة 5 ميكرولتر من المتوسطة إلى العمود 1 كما خلية التحكم فقط (إيجابية) و 5 ميكرولتر / جيد من BTV إلى العمود 12 كما العدوى BTV التحكم فقط (سلبي).
  8. تمييع المركبات إلى التركيز الأولي من 200 ميكرومتر لسمية الخلايا الفحص. وبالمثل، إضافة 25 ميكرولتر / جيد من مركب إلى العمود 2 5x ومختلطة مع 8 قنوات ماصة شبه التلقائي إلى تركيز 100 ميكرومتر. لا تضيف BTV.
  9. تنفيذ سلسلة التخفيف من شقين بواسطة الشفط 25 ميكرولتر من العمود إلى العمود 2 3 المجاورة، واستمرت حتى العمود الأخير (ال 12). في العمود 12، وبعد الاختلاط، ونضح وتجاهل 25 ميكرولتر من مixture. تركيز النهائي في العمود 2 ينبغي أن تكون 100 ميكرومتر ويجب أن يكون العمود 12 عشر عند 0.2 ميكرومتر. العمود 1 هو سيطرة خلية فقط.
  10. لكل فعالية وسمية الخلايا المضادة للفيروسات المقايسات، واحتضان لوحات عند 37 درجة مئوية، مع 5٪ CO 2 و 80-95٪ الرطوبة لمدة 72 ساعة بعد العلاج. قياس بقاء الخلية باستخدام عدة CTG كما هو موضح أعلاه (بروتوكول الخطوات 2،5-2،7).

4. الوقت من إضافة (قسم) الفحص

  1. خلايا BSR البذور من 1-24 عمود في صفيحة ميكروسكوبية 384 جيدا (أسود، شكل قبل 16 × 24) عن طريق موزع على 5،000 خلية / جيدا وحجم البذر هو 15 ميكرولتر / جيد.
  2. لكل مركب، والاستفادة من كافة الأعمدة الأربعة والعشرين مع ثمانية النسخ المتماثلة لكل نقطة في نصف الساعة من لوحة 384 جيدا (الجدول 2). تعيين العمود 1 كخلايا التحكم فقط عن طريق إضافة 10 ميكرولتر / جيد المتوسطة الفحص. العمود علامة 24 كما العدوى BTV التحكم فقط (مراقبة سلبية) وذلك بإضافة 5 ميكروليتر / الفحص جيدا والمتوسطةفيروس د 5 ميكرولتر / جيد في وزارة الداخلية من 0.01 إلى الحجم النهائي من 25 ميكرولتر / جيد.
  3. حدد الأعمدة الزوجية من العمود 2-22 المضادة للفيروسات كما عمود تقييم فعالية في مختلف عدوى آخر ساعة (HPI). في هذه الأعمدة، تصيب الخلايا مع 5 ميكرولتر / جيد BTV في وزارة الداخلية من 0.01. في HPI مختلفة، وأيضا إضافة 5 ميكرولتر / مجمع المخفف جيدا إلى كل بئر لتشكيل الحجم النهائي من 25 ميكرولتر / جيد. لتدل -2 و -1 HPI إضافة المجمع لخلايا BSR قبل الإصابة BTV. ل0 HPI، إضافة المجمع وBTV للثقافة في وقت واحد.
  4. في موازاة ذلك، تعيين الأعمدة الفردية من العمود 3-23 كما مركب تسيطر فقط، منها مجمع أضيفت في مختلف نقاط الوقت كما المعينة (-2، -1، 0، 1، 2، 4، 8، 16، 24، 48 HPI). في هذه الأعمدة، إضافة 5 ميكرولتر المتوسطة / الفحص جيدا و5 ميكرولتر / جيد المخفف مجمع لتشكيل الحجم النهائي من 25 ميكرولتر / جيد.
  5. بعد العلاج، واحتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية، 5٪ CO 2 مع 80-95٪ الرطوبة.
  6. تحديد بقاء الخلية في 72 HPI استخدام عدة CellTiter-جلو كما هو موضح سابقا (بروتوكول الخطوات 2،5-2،7).

5. تحليل البيانات

  1. معالجة كافة البيانات أولا باستخدام المناسبة البرمجيات في المنزل استنادا إلى إشارات الانارة التي تم الحصول عليها عن طريق قارئ متعدد الأوضاع. تحديد القيمة المتوسطة (متوسط) والانحراف المعياري (STDEV) لكل معاملة، فضلا عن الاختلافات معامل (CV)، الأمر الذي يتطلب قيمة لا يزيد عن 10٪.
  2. نقل البيانات التي تتم معالجتها من البرنامج أعلاه إلى أداة البرمجيات biostatic والرسوم البيانية. تنفيذ تحليل الانحدار غير الخطية لتحديد قيم EC 50 CC و50.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

1. فعالية المضادة للفيروسات من مجمع

تم تطوير CPE فحص خلية مقرها، إلى أقصى حد والتحقق من صحتها في المختبر باستخدام القائمة على الانارة CTG عدة لتحديد الأدوية المضادة للفيروسات رواية ضد BTV كما هو موضح سابقا 2،5. كان يعمل الاستجابة فحص جرعة عشرة لتعكس فعالية المضادة للفيروسات والسمسة من مركب الرصاص حددت من خلال قياس عدد خلايا قابلة للحياة عملية الأيض في الثقافة على أساس الكميات من ATP الخلوية المقد...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

لتحديد الأولي من الزيارات المضادة للفيروسات، واحدة من الخطوات الرئيسية لاكتشاف الأدوية المضادة للفيروسات والتنمية هو وضع المقايسات قوية، والذي يتضمن اختيار علامة للقياس الكمي، ووضع بروتوكول بسيطة، والحصول على إشارات كافية وأقل من 10٪ السيرة الذاتية. وقد صممت معظم شاشات البيوكيميائية أو خلية مقرها لتوفير نقطة انطلاق الكيميائية على أساس أقوى وبسيطة وغير مكلفة الفحص، ويرجع ذلك إلى استنساخ المطلوبة في عملية الفرز وعدد كبير محتمل من الجزيئات ليتم عرضه. عين مقايسة على أساس CPE لتلبية هذ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

وأيد هذا المشروع من خلال منحة 1R03MH08127-01-02 و7R03MH08127 من المعاهد الوطنية للصحة لQ. لي، والأموال IMPACT من قسم الطب في البنك العربي المتحد إلى Q. لى. هو محل تقدير الدعم من صندوق Molette وجامعة أوبورن. نحن نشكر أيضا المساعدات الفنية من السيدة Pulin تشي والسيد فولوديمير Musiienko أثناء العمل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
DMEM 1134218جيبكولزراعة الخلايا
FBSGibco16000044لزراعة الخلايا
0.05٪ Trypsin-EDTAGibco1000185لزراعة الخلايا
DPBSGbico1049769لزراعة الخلايا
مجموعة CellTiter-Glo (CTG)PromegaTB288لقياس بقاء الخلية
70٪ الإيثانولفيشرS25309Bمخفف من 95٪
مركبات huashilcompounds المضادة للفيروساتNIH MLSMR و de novo تخليق
BTV-10ATCCVR-187
BSRتم تطويره في المنزل
قارئ الألواح الدقيقة متعدد الأوضاع Synergy-IIBioTekلقراءة إشارة الإنارة
موزعاختيار MicroFloBioTekإضافة الخلايا والفيروسات والكواشف
384 بئر صفيحة دقيقة مسطحةالقاع CORNING28908031لزراعة الخلايا
برنامج Gen. 5BioTekلتحليل مخرجات القراءة من قارئ الألواح الدقيقة متعدد الأوضاع Synergy-II
GraphPad Prism 5GraphPad الإصدار 5للتحليل الحيوي والمؤامرة
المتوسطة

المراجع

  1. Hemati, B., et al. Bluetongue virus targets conventional dendritic cells in skin lymph. J. Virol. 83, 8789-8799 (2009).
  2. Gu, L., et al. Novel Virostatic Agents against Bluetongue Virus. PLoS ONE. 7, e43341(2012).
  3. Meiswinkel, R., et al. The 2006 outbreak of bluetongue in northern Europe--the entomological perspective. Prev. Vet. Med. 87, 55-63 (2008).
  4. Szmaragd, C., et al. Mortality and case fatality during the recurrence of BTV-8 in northern Europe in 2007. Vet. Rec. 161, 571-572 (2007).
  5. Li, Q., Maddox, C., Rasmussen, L., Hobrath, J. V., White, L. E. Assay development and high throughput antiviral drug screening against Bluetongue virus. Antiviral Research. 83, 267-273 (2009).
  6. Noah, J. W., et al. A cell-based luminescence assay is effective for high-throughput screening of potential influenza antivirals. Antiviral Res. 73, 50-59 (2007).
  7. Che, P., Wang, L., Li, Q. The development, optimization and validation of an assay for high throughput antiviral drug screening against Dengue virus. Int. J. Clin. Exp. Med. 2, 363-373 (2009).
  8. Li, Q., Li, H., Blitvich, B. J., Zhang, J. The Aedes albopictus inhibitor of apoptosis 1 gene protects vertebrate cells from bluetongue virus-induced apoptosis. Insect Mol. Biol. 16, 93-105 (2007).
  9. Petty, R. D., Sutherland, L. A., Hunter, E. M., Cree, I. A. Comparison of MTT and ATP-based assays for the measurement of viable cell number. J. Biolumin. Chemilumin. 10, 29-34 (1995).
  10. Buchholz, U. J., Finke, S., Conzelmann, K. K. Generation of bovine respiratory syncytial virus (BRSV) from cDNA: BRSV NS2 is not essential for virus replication in tissue culture, and the human RSV leader region acts as a functional BRSV genome promoter. J. Virol. 73, 251-259 (1999).
  11. Phillips, T., Jenkinson, L., McCrae, C., Thong, B., Unitt, J. Development of a high-throughput human rhinovirus infectivity cell-based assay for identifying antiviral compounds. J. Virol. Methods. 173, 182-188 (2011).
  12. Harvey, T. J., et al. Tetracycline-inducible packaging cell line for production of flavivirus replicon particles. J. Virol. 78, 531-538 (2004).
  13. Puig-Basagoiti, F., et al. High-throughput assays using a luciferase-expressing replicon, virus-like particles, and full-length virus for West Nile virus drug discovery. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 49, 4980-4988 (2005).
  14. Puig-Basagoiti, F., et al. Triaryl pyrazoline compound inhibits flavivirus RNA replication. Antimicrob. Agents Chemother. 50, 1320-1329 (2006).
  15. Duan, M., et al. In vitro and in vivo protection against the highly pathogenic H5N1 influenza virus by an antisense phosphorothioate oligonucleotide. Antivir. Ther. 13, 109-114 (2008).
  16. Ray, D., Shi, P. Y. Recent advances in flavivirus antiviral drug discovery and vaccine development. Recent Pat. Antiinfect. Drug Discov. 1, 45-55 (2006).
  17. Severson, W. E., et al. High-throughput screening of a 100,000-compound library for inhibitors of influenza A virus (H3N2). J. Biomol. Screen. 13, 879-887 (2008).
  18. Severson, W. E., et al. Development and validation of a high-throughput screen for inhibitors of SARS CoV and its application in screening of a 100,000-compound library. J. Biomol. Screen. 12, 33-40 (2007).
  19. Bolken, T. C., et al. Identification and characterization of potent small molecule inhibitor of hemorrhagic fever New World arenaviruses. Antivir. Res. 69, 86-97 (2006).
  20. Van Loock, M., et al. A novel high-throughput cellular screening assay for the discovery of HIV-1 integrase inhibitors. J. Virol. Methods. 179, 396-401 (2012).
  21. Kampmann, T., et al. In silico screening of small molecule libraries using the dengue virus envelope E protein has identified compounds with antiviral activity against multiple flaviviruses. Antiviral Res. 84, 234-241 (2009).
  22. Kirchmair, J., et al. Development of anti-viral agents using molecular modeling and virtual screening techniques. Infect. Disord. Drug Targets. 11, 64-93 (2011).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

مقايسة قائمة على تأثير الخلايا المرضيمقايسة الاستجابة للجرعةمقايسة وقت الإضافةالتأثير المرضي الخلويمقايسة حيوية الخلاياالفرز المضاد للفيروساتتحديد التركيز الفعال النصفي (EC50)قياس التركيز السمي النصفي (CC50)آلية العمل
فحوصات لتحديد رواية الأدوية المضادة للفيروسات ضد فيروس اللسان الأزرق
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.