مقالة منهجية

ثنائي الفوتون التصوير الكالسيوم في الفئران التنقل إلى هذا الشخص واقع البيئة

DOI:

10.3791/50885

⸱

فبراير 20, 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Friedrich Miescher Institute for Biomedical Research, 2Max Planck Institute of Neurobiology, 3Department of Biosystems Science and Engineering, ETH Zurich

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن هنا وصف الإجراءات التجريبية المشاركة في التصوير ثنائي الفوتون من الماوس القشرة خلال السلوك في بيئة الواقع الافتراضي.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في السنوات الأخيرة، أصبح التصوير ثنائي الفوتون أداة لا تقدر بثمن في علم الأعصاب، كما أنه يسمح لقياس مزمن في نشاط الخلايا التي تم تحديدها وراثيا خلال السلوك 1-6. نحن هنا وصف الطرق لأداء اثنين من الفوتون التصوير في الماوس القشرة بينما يتنقل الحيوان بيئة الواقع الافتراضي. ونحن نركز على جوانب الإجراءات التجريبية التي هي مفتاح التصوير في حيوان يتصرف في بيئة افتراضية المضاءة. المشاكل الرئيسية التي تنشأ في هذا الإعداد التجريبية أننا هنا عنوان هي: التقليل من الحركة المتعلقة التحف الدماغ، والتقليل من تسرب الضوء من نظام الإسقاط الواقع الافتراضي، والتقليل من الليزر التي يسببها تلف الأنسجة. كما نقوم بتوفير البرمجيات عينة للسيطرة على البيئة والواقع الافتراضي للقيام تتبع التلميذ. مع هذه الإجراءات والموارد يجب أن يكون من الممكن تحويل التقليدية المجهر ثنائي الفوتون لاستخدامها في التصرف الفئران.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

برز التصوير ثنائي الفوتون من مؤشرات الكالسيوم (المشفرة وراثيا مثل GCaMP5 7 أو R-8 جيكو، أو الأصباغ الاصطناعية مثل OGB أو Fluo4) كوسيلة من وسائل قوية لقياس نشاط الخلايا العصبية في الفئران يتصرف 1-6. فإنه يمكن قياس وقت واحد لنشاط مئات الخلايا في عمل واحد بالقرب من القرار المحتملة، وتصل إلى ما يقرب من 800 ميكرومتر تحت سطح الدماغ 9،10. وعلاوة على ذلك، وذلك باستخدام مؤشرات الكالسيوم المشفرة وراثيا (GECIS) نشاط الخلايا العصبية ويمكن قياس مزمنة 5،11،12، وأنواع الخلايا المحددة وراثيا 13. معا، وهذه الأساليب توفير درجة من الدقة الزمنية والمكانية التي تفتح العديد من الإمكانيات الجديدة في دراسة حساب الخلايا العصبية في الجسم الحي.

التدخل الجراحي ضروري لفضح وتسمية مخ الفأر للتصوير. عادة و transfected الخلايا باستخدام المؤتلف الغدة المرتبطة فير هو مزروع لنا (AAV) نظام للتسليم جيتشي ونافذة في الجمجمة خلال موقع الحقن للوصول البصرية إلى الدماغ. ثم يتم إرفاق شريط الرأس في الجمجمة لتثبيت الرأس تحت المجهر ثنائي الفوتون. تصميم وتنفيذ هذه الخطوات أمر بالغ الأهمية لأن معظم المشاكل مع التصوير مستيقظا تنشأ من عدم الاستقرار في التحضير. مثالي الإجراء الموضح هنا يجب أن تسمح للتصوير المزمن تصل إلى عدة أشهر بعد الجراحة.

لتمكين السلوك الموجهة بصريا أثناء التصوير ثنائي الفوتون، رئيس الماوس ثابتة يجلس على حلقة مفرغة الهواء يؤيد كروية، والتي يمكن استخدامها للتنقل بيئة الواقع الافتراضي. ويقترن تحرك الماوس في حلقة مفرغة للحركة في البيئة الظاهرية التي يتم عرضها على شاشة حلقية المحيطة 14،15 الماوس. المتغيرات السلوكية مثل الحركة والتحفيز البصري، وموقف التلميذ يمكن تسجيل 6.

ر "> ونحن تصف الإجراءات اللازمة في التصوير المزمنة ثنائي الفوتون في الفئران استكشاف بيئة الواقع الافتراضي النقاط الرئيسية التي تناولها هي: الحد من حركة القطع الأثرية، والحد من تسرب الضوء، تعظيم عدد الخلايا سجلت في وقت واحد، والتقليل من الضرر الصورة، ونحن أيضا تقديم تفاصيل حول إعداد حلقة مفرغة المدعومة من الهواء، وتتبع التلميذ، والبيئة الواقع الافتراضي. الإجراءات الموضحة هنا يمكن أن تستخدم لتصوير السكان الخلية fluorescently المسمى في الرأس الفئران ثابتة في مجموعة متنوعة واسعة من النماذج يحتمل السلوكية .

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية ونفذت وفقا للمبادئ التوجيهية للإدارة البيطرية في كانتون بازل شتات.

1. الأجهزة والبرمجيات الإعداد

  1. ثنائي الفوتون مجهر المسح الإعداد:
    1. استخدام الليزر تحت الحمراء نابض كمصدر للإضاءة (عرض النبضة <120 FSEC).
    2. استخدام مسح الرأس تتألف من الماسح الضوئي الرنانة 8 أو 12 كيلوهرتز ومعيار الجلفانومتر ملاحظة: هذا يتيح معدلات الإطار من 40 أو 60 هرتز عند 750 × 400 بكسل. وارتفاع معدل الإطار أمر بالغ الأهمية للتقليل من حركة الدماغ صورة التشويه المتعمد. علاوة على ذلك، نتائج المسح الرنانة سريع في إشارة العائد العالي ويقلل photobleaching من 16 والضيائية.
    3. استخدام السرعة العالية ض السائر بيزو الكهربائية لبالتسلسل الوقت الحصول على صور معشق في أعماق متعددة ملاحظة: هذا هو اختياري وتستخدم لزيادة العائد البيانات على حساب معدل الإطار.
    4. استخدام صباحافتورا ​​echanical للحد من التعرض الليزر إلى الأنسجة. ضبط عرض فتورا ​​اعتمادا على السعة من الماسح الضوئي الرنانة ملاحظة: نظرا لطبيعة الجيبية من مسار تفحص الماسح الضوئي الرنانة، شعاع الليزر يتحرك بطيئا نسبيا في نقطة تحول المسح الضوئي. لمنع تلف الأنسجة في هذه النقاط تحول حيث التعرض ليزر هو أعظم، يتم إدخال فتورا ​​الميكانيكية في المستوى البؤري بين المسح والعدسات التي توقف أنبوب شعاع الليزر.
    5. للحصول على البيانات استخدام التحويل الرقمي عالي السرعة (800 ميجا هرتز) في تركيبة مع بوابة مجموعة الميدان للبرمجة (FPGA) ملاحظة: إن تمريرة عالية FPGA الفلاتر وصناديق إشارة PMT إلى بكسل. الجمع بين مرشح تمريرة عالية على FPGA وفعالة مرشح تمرير منخفض على نتيجة مكبر للصوت PMT في مرشح تمرير النطاق تركزت تقريبا حول معدل تكرار الليزر (80 ميغاهيرتز). يتم توفير نموذج التعليمات البرمجية FPGA على شكل ملحق.
  2. بدعم الهواء الإعداد مفرغة على أساس تصميم Dombeck والزملاء 2
    1. ربط حامل الكرة إلى خط إمداد الهواء باستخدام أنبوب العرض الجوي لا يقل عن 10 مم القطر الداخلي. تحقيق أقصى قدر من المقطع العرضي للحامل الكرة العرض الجوي مدخل ووضع كمية وافرة من أنابيب بين العرض الجوي الرئيسي وحامل الكرة ملاحظة: زيادة المقطع العرضي وزيادة طول أنابيب إمداد الهواء يقلل من الجيل الضوضاء.
    2. وضع الكرة رغوة البوليسترين (20 سم القطر) في حامل الكرة والمطبوعة 3D-مصمم خصيصا.
    3. إذا كان النموذج السلوكي يتطلب فقط إلى الأمام (أو الخلف) تنقل، وتقييد حركة الكرة إلى الأفقي (الملعب) محور طريق إدخال دبوس (مثل G 19 إبرة تحت الجلد) على جانب الكرة ملاحظة: عادة الحيوانات على التكيف مع الإعداد أسرع بكثير في هذا النموذج انخفاض التناوب.
    4. حركة المسار من الكرة باستخدام واحد أو اثنين من فئران الكمبيوتر الضوئيةلكشف الحركة حول اثنين أو ثلاثة جميع المحاور على التوالي ملاحظة: يجب على فئران الكمبيوتر تعمل بشكل مثالي مع الصمام الثنائي الأشعة تحت الحمراء لأقل تدخلا في التصوير.
  3. إعداد بيئة الواقع الافتراضي
    1. إعداد بيئة الواقع الافتراضي ملاحظة: إن وجود بيئة عينة بناء على Panda3D، محرك اللعبة متاحة مجانا، وتقدم على شكل ملحق. يتم إنشاء الكائنات من بيئة افتراضية باستخدام Wings3D، وهو مصمم نماذج 3D مفتوحة المصدر. نموذج البرنامج يقرأ معلومات الموقع على بطاقة الحصول على البيانات ويترجم هذا في الحركة في بيئة افتراضية. ينفذ التعليمات البرمجية أيضا التحول غير الخطية اللازمة للبيئة إلى أن إسقاطها على الشاشة حلقية. وقد وصفت بناء مفصلة من الشاشة حلقية أماكن أخرى 14،17.
    2. استخدام أجهزة العرض الصمام أو شاشات الكمبيوتر الخلفية LED لعرض بيئة افتراضية. دمج سي آي آر النابضةCUIT عن الخفقان السريع للالمصابيح أثناء التصوير ملاحظة: هناك مشكلة متأصلة في التصوير ثنائي الفوتون خلال التحفيز البصري هو تسرب الضوء القادمة من نظام التحفيز البصري، الذي يمكن الحد من التدريع الهدف. ومع ذلك، تسرب الضوء من نظام التحفيز البصري يمكن أن تلغى بالكامل من خلال مزامنة الناتج ضوء العرض إلى نقطة تحول من الماسح الضوئي الرنانة (عندما لا يتم الحصول على البيانات)، كما هو الحال مع الساحات LED المستخدمة في التحفيز البصري أثناء التصوير في ذبابة الفاكهة 18. هذا يؤدي إلى اختلاف سرعة عالية فعالة من التحفيز البصري والحصول على البيانات (انظر الشكل 2). تردد الخفقان (24 كيلو هرتز) هو أوامر من حجم فوق عتبة ميض الانصهار، أعلاه والتي لم يعد ينظر الخفقان من قبل الحيوان. يظهر الرسم البياني الدوائر الإلكترونية من هذا التعديل لLED ضوئي تجاري في الشكل 3.
  4. جروتتبع ايل
    1. استخدام كاميرا الفيديو CMOS مقرها (30 إطارا في الثانية) لتتبع موقف التلميذ. تأكد من أن الكاميرا لا تحتوي على فلتر حجب الأشعة تحت الحمراء ملاحظة: إن التلميذ مرئيا في التباين العالي خلال التسجيلات بسبب الضوء الشارد من اثنين من الفوتون الإثارة الليزر الخروج من خلال العين. موقف التلميذ ويستخرج قطر في الوقت الحقيقي باستخدام برمجيات مخصصة مبرمجة على أساس تصميم Sakatani وعيسى 19.

2. حقن الكالسيوم المؤشر الوراثية ونافذة زرع

يتم إجراء حقن مؤشر الكالسيوم 20 وغرس النافذة في الجمجمة 21 كما هو موضح سابقا مع الإضافات التالية:

  1. حقن الفيروس في المنطقة ذات الاهتمام باستخدام ماصة حقن الزجاج ردم حل مع الفيروس وتوصيلها إلى نظام حقن الضغط. ضبط الضغط اعتمادا على ماصة الداخلية،قطر، وعادة تقريبا. 70-140 م بار، لحقن حوالي 100 NL من الحل الفيروس على مدى 1-2 دقيقة. البقول الحقن انخفاض حجم ألقاها في التردد المنخفض (0.05 البقول ثانية في 2 هرتز) وينبغي أن تستخدم من أجل منع امتداد الفيروس على طول ماصة خلال حقن ملاحظة: من أجل رصد حجم الحقن، يمكن أن تكون علامة على ماصة صغيرة ، أطوال متباعدة بشكل متساو (مثل 0.5 ملم) تحت المجهر ستيريو. ويمكن بعد ذلك النزوح من الغضروف المفصلي بين علامات أن تستخدم لتقدير حجم حقن.
  2. عدة أسابيع حقن آخر هذا ينبغي أن يؤدي إلى بلعة من الخلايا المسمى المكتظة التي يبلغ قطرها حوالي 500 ميكرون. فعالية جيتشي التعبير في المنطقة ذات الاهتمام يعتمد على اختيار جيتشي والجمع بين المروج، وكذلك عيار المعدية والنمط المصلي من AAV المؤتلف المستخدمة ملاحظة: وكمثال ممثل، حقن AAV2/1-EF1α-GCaMP5 مع حلمة الثدي الفيروسيةإيه 8 × 10 12 GC / مل في القشرة البصرية الأولية لنتائج الماوس في التعبير مرضية في مدة أسبوعين تقريبا بعد الحقن (الشكل 1).
  3. يجب أن شريط الرأس لا تعيق المجال البصري من الفأرة، ولكن يجب أن تكون جامدة بما يكفي للسماح للتصوير مستقرة خلال السلوك. هذا عادة ما يتطلب نقطتين من المرفقات على جانبي شريط الرأس (انظر الشكل 1). لنعلق بحزم شريط الرأس في الجمجمة، للتأكد من تحقيق أقصى قدر من وتجفيف منطقة الجمجمة يتعرض حيث سيتم إرفاق شريط الرأس. بالإضافة إلى ذلك، وذلك باستخدام مشرط أو حقنة، خدش الجمجمة لإنشاء أخاديد سطحية وبالتالي زيادة المساحة السطحية للالإلتصاق. تغطية العظام بمادة لاصقة الأنسجة فورية الغراء قبل إرفاق شريط الرأس مع الاسمنت الأسنان.

3. الإجراءات التجريبية

  1. أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع بعد الحقن الفيروسات، والتحقق من الجمجمة نافذة زرع للالوضوح والتعبير في إطار برنامج التحصين الموسعإضاءة مضان. حدود واضحة للعيان ومحددة بشكل حاد من الأوعية الدموية السطحية هي مؤشر جيد على أن الإطار زرع مناسبة للتصوير (انظر الشكل 1).
  2. قياس وضبط قوة الليزر إلى قيمة أقل من 50 ميغاواط في العينة.
  3. بدوره على تدفق الهواء إلى حلقة مفرغة كروية.
  4. لتثبيت الرأس تحت المجهر، تخدير لفترة وجيزة مع isoflurane والحيوان للحد من التوتر. وضع الحيوان في وعاء التخدير isoflurane ووالانتظار حتى يتوقف الحيوان يتحرك (حوالي 10 ثانية). إزالة الحيوان ورئيس إصلاحه على الفور تحت المجهر.
  5. وضع نظام العرض البصري في أقرب وقت ممكن للحيوان للا تزال تسمح للوصول إلى الحيوان. الاتصال البصري أقل الحيوان لديه مع المجرب، وأقل شدد سيكون الحيوان خلال المرحلة الأولى من التجربة.
  6. تأكد من أن الجمجمة نافذة زرع خالية من الغبار والأوساخ. نظيفة مع الماءإذا لزم الأمر.
  7. تطبيق هلام الموجات فوق الصوتية واضحة كما الغمر المتوسطة بين النافذة في الجمجمة والهدف الغمر بالمياه. هذا يحل مشاكل بطء تدهور صورة نظرا لتبخر المياه أو تسرب ويخفف من الحاجة لتركيب مخروط على شريط الرأس إلى تصمد ملاحظة: جهاز طرد مركزي الجل قبل الاستخدام لإزالة جميع فقاعات الهواء، والحرص على عدم خلق أي الهواء فقاعات خلال تطبيق هلام. يمكن فقاعات الهواء تتحلل بشدة جودة الصورة.
  8. التفاف قطعة من الشريط الأسود حول شريط الهدف ورئيس لالتدريع الضوء.
  9. تحريك الساحة بيئة افتراضية لموقفها النهائي وضبط كاميرا فيديو لتتبع التلميذ.
  10. تعيين فتورا ​​الليزر لتتناسب مع السعة المسح الضوئي المستخدمة أثناء التجربة.
  11. بدء تسجيل البيانات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جودة الصورة في اثنين من الفوتون التصوير الكالسيوم من السكان الخلية المسمى مع جيتشي يعتمد إلى حد كبير على نوعية الجمجمة نافذة الزرع. يجب فحص أسبوعين بعد حقن الفيروس النافذة في الجمجمة من أجل الوضوح. ينبغي أن يكون هناك أي النسيج الحبيبي أو إعادة نمو العظام مرئية (الشكل 1A). وعلاوة على ذلك، ينبغي أن نمط الأوعية الدموية السطحية دون تغيير وحدود الأوعية الدموية يجب أن يتم تعريف بشكل حاد. في نفس الوقت، ويمكن أيضا أن يتم التحقق جيتشي التعبير. يجب بولي من الخلايا المسمى تك...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المفتاح لنجاح السلوكية التصوير ثنائي الفوتون هو استقرار إعداد بطريقتين:

  1. على مدى أيام آخر نافذة الزرع، يمكن أن الاستجابات الالتهابية في الأنسجة يؤدي إلى تعزيز تشكيل النسيج الحبيبي والغضاريف التي من شأنها أن تعرقل أو حتى منع التصوير.
  2. أثناء التجربة الدماغ يجب أن تكون مستقرة بما فيه الكفاية لمنع الحركة الفنية من إفساد نشاط يتعلق العصبية إشارة م...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل من قبل معهد فريدريش ميشر للبحوث الطبية الحيوية، وجمعية ماكس بلانك، وبرنامج العلوم حدود الإنسان.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
زلات الغطاء (القطر = 3-5 مم)غرسة نافذةMenzel
InSight DeepSee ليزرSpectra-Physicsمجهر
12 كيلو هرتز ماسح ضوئي رنينكامبريدج تكنولوجياG1-003-30026مجهر
GalvometerCambridge TechnologyG6215Hمجهر
محول رقميInstrumentsNI 5772مجهر
FPGANational InstrumentsPXIe 7965Rبطاقة اقتناء المجهر
الوطنية للأدواتالوطنية PCIe 6363مرشح انبعاث المجهر
525/50SemrockFF03-525 / 50-25مجهر
بيزو كهربائي z-drivePhysikinstrumenteP-726.1CDمجهر
ل Piezo-electric محركPhysikinstrumenteE665 LVPZTالمجهر
الهدف 16X ، 0.8NAنيكونCFI75مجهر
مضخم التيارفيمتوDHPCA-100مجهر
أنبوب المضاعفHamamatsuالمجهر
كاميرا USB بدون مرشح الأشعة تحت الحمراءالتصويرمصدرDMK22BUC03تتبع
التلميذالهدف تصوير 50 ملمالمصدرM5018-MPتتبع التلميذ
حلقات محول الماكرومصدر التصويرمصدرLAexSetتتبع التلميذ
ماوس الكمبيوتر البصريتتبع الحركة لوجيتكG500
كرة الستايروفوم 20 سمعلى سبيل المثال idee-shop.de08797.00.15
افتراضية جهاز عرض LEDسامسونجSP-F10Mافتراضي بطاقة
اكتسابNational InstrumentsNI 6009البيئة الافتراضية
Panda3D محركلعبة www.panda3d.org< / a>بيئة
افتراضية مكتبة Numpy ل Pythonwww.scipy.org< / a >بيئة افتراضية
Scipy مكتبة Pythonwww.scipy.org< / a >بيئة افتراضية
NI-DAQmx سائقالأدوات الوطنيةwww.ni.com< / a >بيئة
افتراضية هلام الموجات فوق الصوتيةDahlhausen5701.0342.10
National وحدة تحكم الضوئي بيئة البيئة التصوير

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Helmchen, F., Fee, M. S., Tank, D. W., Denk, W. A Miniature Head-Mounted Two-Photon MicroscopeHigh-Resolution Brain Imaging in Freely Moving Animals. Neuron. 31 (6), 903-912 (2001).
  2. Dombeck, D. A., Khabbaz, A. N., Collman, F., Adelman, T. L., Tank, D. W. Imaging large-scale neural activity with cellular resolution in awake, mobile mice. Neuron. 56, 43-57 (2007).
  3. Dombeck, D. A., Harvey, C. D., Tian, L., Looger, L. L., Tank, D. W. Functional imaging of hippocampal place cells at cellular resolution during virtual navigation. Nat. Neurosci. 13 (11), 1433-1440 (2010).
  4. Harvey, C. D., Coen, P., Tank, D. W. Choice-specific sequences in parietal cortex during a virtual-navigation decision task. Nature. 484 (7395), 62-68 (2012).
  5. Huber, D., Gutnisky, D. A. Multiple dynamic representations in the motor cortex during sensorimotor learning. Nature. 484 (7395), 473-478 (2012).
  6. Keller, G. B., Bonhoeffer, T., Hübener, M. Sensorimotor mismatch signals in primary visual cortex of the behaving mouse. Neuron. 74 (5), 809-815 (2012).
  7. Akerboom, J., Chen, T. -W. Optimization of a GCaMP Calcium Indicator for Neural Activity Imaging. J. Neurosci. 32 (40), 13819-13840 (2012).
  8. Zhao, Y., Araki, S. An expanded palette of genetically encoded Ca2+ indicators. Science. 333 (6051), 1888-1891 (2011).
  9. Mittmann, W., Wallace, D. J. Two-photon calcium imaging of evoked activity from L5 somatosensory neurons in vivo. Nat. Neurosci. 14 (8), 1089-1893 (2011).
  10. Katona, G., Szalay, G. Fast two-photon in vivo imaging with three-dimensional random-access scanning in large tissue volumes. Nat. Methods. 9 (2), 201-208 (2012).
  11. Mank, M., Santos, A. F. A genetically encoded calcium indicator for chronic in vivo two-photon imaging. Nat. Methods. 5 (9), 805-811 (2008).
  12. Margolis, D. J., Lütcke, H. Reorganization of cortical population activity imaged throughout long-term sensory deprivation. Nat. Neurosci. 15 (11), 1539-1546 (2012).
  13. Zariwala, H. A., Borghuis, B. G. A Cre-dependent GCaMP3 reporter mouse for neuronal imaging in vivo. J. Neurosci. 32 (9), 3131-3141 (2012).
  14. Harvey, C. D., Collman, F., Dombeck, D. A., Tank, D. W. Intracellular dynamics of hippocampal place cells during virtual navigation. Nature. 461 (7266), 941-946 (2009).
  15. Hölscher, C., Schnee, A., Dahmen, H., Setia, L., Mallot, H. A. Rats are able to navigate in virtual environments. J. Exp. Biol. 208, 561-5519 (2005).
  16. Borlinghaus, R. T. MRT letter: high speed scanning has the potential to increase fluorescence yield and to reduce photobleaching). Microsc. Res. Tech. 69 (9), 689-692 (2006).
  17. Reiff, D. F., Plett, J., Mank, M., Griesbeck, O., Borst, A. Virtual Reality for Mice, mousevr.blogspot.com. Nat. Neurosci. 13, 973-978 (2010).
  18. Sakatani, T., Isa, T. Quantitative analysis of spontaneous saccade-like rapid eye movements in C57BL/6 mice. Neurosci. Res. 58, 324-331 (2007).
  19. Golshani, P., Portera-Cailliau, C. In vivo 2-photon calcium imaging in layer 2/3 of mice. J. Vis. Exp. (13), (2008).
  20. Holtmaat, A., Bonhoeffer, T. Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat. Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).
  21. Schmidt-Hieber, C., Häusser, M. Cellular mechanisms of spatial navigation in the medial entorhinal cortex. Nat. Neurosci. 16 (3), 325-331 (2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

LED

مقالات ذات صلة