Method Article

جيل من العقدة الليمفاوية الدسم سادة الوهم لدراسة العقدة الليمفاوية اللحمية خلية المنشأ

DOI:

10.3791/50952

⸱

December 16th, 2013

 , 
1School of Immunity and Infection, IBR-MRC Centre for Immune Regulation, College of Medical and Dental Sciences, University of Birmingham, 2Centre for Cardiovascular Sciences, University of Edinburgh

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_content" > تم وصف جيل من الوهم العقدة الليمفاوية / وسادة الدهون لدراسة أصل الخلايا اللحمية في العقدة الليمفاوية. تتضمن الطريقة عزل الغدد الليمفاوية عن الفئران حديثي الولادة ومنصات الدهون الجنينية ، وتوليد ضمادات دهنية في العقدة الليمفاوية الخيمرية ، ونقلها تحت كبسولة الكلى للفأر المضيف.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ستروما عنصرا أساسيا من بنية العقدة الليمفاوية وظيفة. ومع ذلك، لا يعرف إلا القليل عن أصله، وتكوين الخلوية الدقيقة والآليات التي تنظم تشكيلها. يتم تغليف الغدد الليمفاوية دائما في الأنسجة الدهنية، ونحن في الآونة الأخيرة أظهرت أهمية هذه العلاقة لتشكيل العقدة الليمفاوية سدى. خلايا خلية شحمية السلائف تهاجر إلى العقدة الليمفاوية أثناء تطوره وعلى إشراك سم لمفي، ب مستقبلات إيقاف تكون الشحم وتفرق في الخلايا اللحمية اللمفاوية (Bénézech وآخرون 14). استنادا إلى إمكانات سدى اللمفاوية من الأنسجة الدهنية، ونحن نقدم وسيلة باستخدام الليمفاوية عقدة / الدهون وسادة الوهم الذي يسمح بتعقب نسب الليمفاوية عقدة اللحمية السلائف الخلية. وتبين لنا كيفية عزل الغدد الليمفاوية الوليد وEYFP + الأنسجة الدهنية الجنينية وجعل LN / EYFP + الدهون وسادة الوهم. بعد نقل تحت كبسولة الكلى على فأرة الحاسوب المضيف،يتضمن العقدة الليمفاوية خلايا السلائف الأنسجة الدهنية المحلية وانتهاء تشكيلها. تحليل ذرية EYFP + لوحة الخلايا الدهنية في الغدد الليمفاوية مما يؤدي لا يمكن أن يؤديها من خلال تحليل تدفق cytometric من الغدد الليمفاوية هضم إنزيمي أو عن طريق التحليل المناعي من الغدد الليمفاوية cryosections. باستخدام منصات الدهون من نماذج مختلفة بالضربة القاضية الماوس، سوف توفر هذه الطريقة وسيلة فعالة لتحليل أصل العقدة الليمفاوية مختلف السكان الخلية اللحمية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الغدد الليمفاوية (LNs) هي أعضاء رئيسية في الجهاز المناعي تقع في مواقع استراتيجية في الجسم ، على طول شبكة الأوعية الدموية اللمفاوية. إنها تمكن من ترشيح المستضدات ومسببات الأمراض وتوفر موقعا لعرض المستضد للخلايا الليمفاوية وتحريض الاستجابات المناعية التكيفية. السدى ، الذي يشكل الهيكل الأساسي ل LN وينظم حركة المشاركين المكونين للدم المختلفين للاستجابة المناعية التكيفية ، أمر أساسي لوظيفة هذه الأعضاء. توفر مجموعات مختلفة من الخلايا اللحمية إشارات أساسية ومحددة لحركات وتوطين وبقاء وتكاثر ونضج المكون المكونة للدم في الجهاز المناعي1-3. تنقسم الخلايا اللحمية LN البالغة إلى ثلاث فئات: الخلايا البطانية الدموية والخلايا البطانية اللمفاوية والخلايا الليفية. تشمل هذه الفئات الثلاث مجموعات سكانية غير متجانسة. تحتوي مجموعات الخلايا الليفية على خلايا شبكية ليفية (FRC) ، وخلايا متغصنة جريبية (FDC) ، وخلايا شبكية هامشية (MRC) ، بينما الخلايا الليفية التي تشكل الكبسولة والنخاع والخلايا الأخرى التي لم يتم تحديدهابعد 1-5. الأصول والآليات التي تحكم نضوج مجموعات مختلفة من الخلايا اللحمية LN غير واضحة ، كما أن عدم وجود علامات محددة تسمح برسم خرائط المصير لمجموعات محددة من الخلايا اللحمية LN يمزق دراستهم صعبة بشكل خاص. ومع ذلك ، فإن الفهم الكامل لتطور الخلايا اللحمية LN ضروري لفهم الاستجابات المناعية التكيفية ، والآليات التي تساهم في التسامح وهي أساس تطوير LNs الاصطناعية.

حتى الآن ، اقتصرت دراسة أصل الخلايا اللحمية LN وتطورها في الغالب على التقييم المباشر لتطور LN في الأجنة والأطفال حديثي الولادة في الفئران البرية وسلالات الفئران بالضربة القاضية المختلفة6-9. هذه الأساليب محدودة بسبب الفتك الجنيني والفترة المحيطة بالولادة لبعض سلالات الفئران التي تحمل عمليات حذف في الجينات المهمة لتطور LN. علاوة على ذلك ، تشارك بعض الجينات الضرورية لتطوير الأنسجة اللمفاوية أيضا في مجموعة واسعة من العمليات البيولوجية كما هو الحال بالنسبة ل RANK10-11 أو NF-κB212. لمعالجة هذه المشكلات ، تم إجراء عزل وزرع LNs الجنينية تحت كبسولة الكلى للفأر المضيف12-13. تسمح هذه التقنية ، على سبيل المثال ، بنقل LNs الجنينية المعدلة وراثيا في بيئة من النوع البري لتقييم نمو الأعضاء وتجنيد الخلايا المضيفة وتنظيمها. ومع ذلك ، فإن نمو LN الجنيني المطعمة تحت كبسولة الكلى لمضيف بالغ يضعف ، مما يحد من استخدام هذه التقنية.

LNs ورواسب الدهون مرتبطة ارتباطا وثيقا تشريحيا وتتطور في وقت واحد أثناء التطور الجنيني. لقد أظهرنا مؤخرا أن ارتباط LN / الأنسجة الدهنية يلعب دورا مهما في توفير أسلاف الخلايا اللحمية ل LNs. على وجه الخصوص ، تتحكم الإشارات من خلال LTβR في مصير الخلايا السلائف الشحمية عن طريق منع تكوين الشحم وبدلا من ذلك تعزيز النضج نحو النمط الظاهري للخلايا اللحميةLN 14. نصف هنا طريقة تعتمد على توليد وهم وسادة LN الدهنية مما يسمح بتتبع الخلايا المشتقة من الأنسجة الدهنية في LN النامي. ستكون هذه الطريقة مفيدة لتحديد مساهمة الأنسجة الدهنية في مجموعات مختلفة من الخلايا اللحمية LN جنبا إلى جنب مع استخدام الأنسجة من سلالات الفئران المعدلة وراثيا ، ستسمح بفهم أفضل للآليات التي تتحكم في تمايز المجموعات الفرعية المختلفة لخلايا لحمة LN.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تربية الفئران وصيانتها في ظل ظروف SPF في وحدة الخدمات الطبية الحيوية في جامعة برمنغهام وفقا للوائح وزارة الداخلية البريطانية ولجنة الأخلاقيات المحلية. جميع الإجراءات الموضحة في هذا البروتوكول مشمولة بترخيص مشروع معتمد من قبل كل من لجنة الأخلاقيات المحلية ووزارة الداخلية.

< p class = "jove_title" >1. عزل LNs حديثي الولادة

  1. التضحية بالفئران حديثي الولادة عن طريق خلع عنق الرحم.
  2. قسم الرأس ، وافتح الجسم بالمقص من أعلى منطقة الصدر إلى أسفل منطقة البطن وقم بإزالة جميع الأحشاء بعناية (القلب والرئتين والكبد والأمعاء والكلى والمثانة) من تجويف البطن.
  3. نقل الجسم إلى طبق بتري مقاس 90 مم يحتوي على وسائط RF10 (RPMI1640 وسائط مكملة بمصل بقري جنيني 10٪ ، 100 وحدة / مل بنسلين ، 100 مجم / مل ستربتومايسين و 2 ملي مولار ل-جلوتامين). من هذه الخطوة فصاعدا ، سيتم الاحتفاظ بالأنسجة في ظروف معقمة والتعامل معها في غطاء مزرعة الأنسجة.
  4. انقل الجسم إلى طبق بتري جديد مقاس 90 مم يحتوي على RF10.
  5. تحت المجهر التشريحي ، افصل الصفاق بعناية عن الجلد في المنطقة الأربية. يقع LN الإربي عند تقاطع ثلاثة أوعية دموية في وسادة الدهون.
  6. قم بإزالة LN بعناية. تأكد من إزالة جميع الأنسجة الدهنية. انقل LN إلى طبق بتري مقاس 50 مم يحتوي على وسائط RF10. احتفظ بالمناديل على الجليد مع الاستمرار في الإجراء.
فئة

2. عزل وسادات الدهون E18.5

  1. لتوليد أجنة الفئران في اليوم 18.5 من الحمل (E18.5) ، قم بإعداد حالات حمل موقوتة عن طريق وضع أنثى وفأر ذكر لكل قفص طوال الليل. افصل الفئران في الصباح وتحقق من وجود سدادات مهبلية (يوم الحمل E0.5).
    1. قتل الإناث المسدودات في اليوم 18.5 من الحمل عن طريق خلع عنق الرحم.
    2. قم بإزالة الأجنة ووضعها في طبق بتري 90 مم يحتوي على RF10.
  2. من هذه الخطوة فصاعدا ، يجب التعامل مع الأنسجة باستخدام تقنية معقمة في غطاء زراعة الأنسجة. تحت مجهر التشريح ، قم بتقسيم الرأس ، وافتح الأجنة بالمقص من منطقة الصدر إلى أسفل منطقة البطن وقم بإزالة جميع الأحشاء (القلب والرئتين والكبد والأمعاء والكلى والمثانة) بعناية من تجويف الجسم.
  3. نظف الجسم من جميع الأنسجة الحشوية المتبقية واغسله في PBS للتخلص من جميع آثار الدم التي قد تجعل التشريح أكثر صعوبة.
  4. انقل الأجسام النظيفة إلى طبق بتري طازج مقاس 90 مم يحتوي على RF10.
  5. افصل الصفاق بعناية عن الجلد في المنطقة الأربية. يقع LN الإربي عند تقاطع ثلاثة أوعية دموية في وسادة الدهون.
  6. قم بإزالة LN بعناية وتخلص منه. من المهم جدا إزالة LN تماما للتأكد من أن الوسادة الدهنية المستخدمة في الوهم غير ملوثة بأي خلايا لحمية ليمفاوية.
  7. قم بإزالة وسادة الدهون الأربية وانقلها إلى طبق بتري مقاس 50 مم يحتوي على وسائط RF10. احتفظ بالمناديل على الجليد مع الاستمرار في الإجراء.
فئة

3. توليد وسادة LN-fat Chimera

  1. تحضير نظام زراعة الأعضاء في المختبر 15.
    1. تحضير الإسفنج والمرشحات: يمكن القيام بذلك مسبقا وتخزين الإسفنج والمرشحات معقمة في طبق بتري في غطاء الثقافة.
      1. قطع Vulkan Underwrap إلى 1-1.5 سم2 قطعة
      2. اغلي الإسفنج لمدة ساعتين في ماء مقطر.
      3. دع الإسفنج يجف لبضع ساعات في غطاء مزرعة الخلايا.
      4. اغلي المرشحات لمدة 20 دقيقة.
      5. اترك المرشحات تجف لبضع ساعات في غطاء مزرعة الخلايا.
    2. تحضير وسائط DMEM مكملة بمصل بقري للجنين بنسبة 10٪ ، و 10 ملي هيبس ، و 1x محلول الأحماض الأمينية غير الضروري MEM ، و 50 ملي مولار 2-ميركابتو إيثانول ، و 100 وحدة / مل بنسلين ، و 100 مجم / مل من الستربتومايسين و 2 ملي ل-جلوتامين.
    3. أضف 2 مل من الوسائط في طبق بتري 50 مم.
    4. رتبي إسفنجة واحدة في قاع طبق بتري. بلل جانبي الإسفنجة عن طريق غمرها في الوسائط.
    5. ضع مرشحا واحدا فوق الإسفنجة. يتم وضع المرشح في واجهة الهواء السائل.
  2. تحت مجهر التشريح ، أعد ربط LN حديث الولادة بعناية بقطعة دهون جنينية واحدة.
  3. ضع وهم وسادة LN-fat فوق الفلتر.
  4. انقل طبق بتري في صندوق بلاستيكي مستطيل به فتحتان على الغطاء ويحتوي على ماء في الأسفل لضمان الرطوبة.
  5. أغلق الغطاء على الصندوق بشريط لاصق. اترك الفتحتين في الغطاء مفتوحتين.
  6. انقل الصندوق إلى حاضنة زراعة الخلايا عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون2. اترك الصندوق يتوازن لمدة ساعتين ، قبل إغلاق الثقوب الموجودة في الغطاء بشريط لاصق.
  7. احتضان الأنسجة لمدة يومين على الأقل للسماح ل LN بالالتصاق بلوحة الدهون وتكون قابلة للنقل تحت كبسولة الكلى.
فئة

4. نقل وهم وسادة LN الدهنية تحت كبسولة الكلى للفئران المضيفة

  1. اجمع الوهم الدهني LN من الفلتر وانقلها تحت كبسولة الكلى للفئران المضيفة. تم بالفعل وصف طريقة نقل كبسولة الكلى 16.

5. عزل شبكات LN المنقولة

  1. بعد 3-4 أسابيع تحت كبسولة الكلى ، تكون وهم الفوط الدهنية LN جاهزة للحصاد. قتل الفئران المضيفة باستخدام الإرشادات المعتمدة.
  2. قم بإزالة الكلى من الفئران المضيفة.
  3. تحت مجهر التشريح ، اعزل وهم وسادة LN-fat وقم بتشريح LN.
< p class = "jove_title" >6. الهضم الأنزيمي للشبكات LNs المنقولة لتحليل قياس التدفق الخلوي

  1. قم بعمل شق واحد في LN بمقص صغير للسماح للإنزيمات باختراق العضو وتسهيل الهضم.
  2. ضع LN واحد في 1.5 مل من Eppendorf يحتوي على 600 ميكرولتر من المخزن المؤقت للهضم (RPMI 1٪ FCS ، 2.5 مجم / مل كولاجيناز D ، 100 ميكروغرام / مل DNase I).
  3. احتضن لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية على كتلة حرارية متقلبة. الماصة لأعلى ولأسفل للمساعدة في تفكك الأنسجة كل 10 دقائق.
  4. أضف 6 ميكرولتر EDTA 0.5 M إلى الأنبوب والماصة لأعلى ولأسفل لإنهاء تفكك الأنسجة.
  5. جهاز طرد مركزي لمدة 5 دقائق عند 490 × جم.
  6. أعد تعليق حبيبات الخلية في محلول التلوين (PBS ، 0.1٪ BSA ، مصل الفئران 5٪ ومصل الفأر 5٪) الذي يحتوي على مزيج من الأجسام المضادة الأولية.
  7. احتضن لمدة 30 دقيقة على الثلج.
  8. يغسل مرتين في PBS
  9. احتضان بالأجسام المضادة الثانوية لمدة 20 دقيقة إذا لزم الأمر.
  10. اغسل 2x في PBS.
  11. التحليل على مقياس التدفق الخلوي.

7. تحليل LNs المنقولة عن طريق التألق المناعي

  1. تثبيت للحفاظ على EYFP أثناء عملية التجميد والاستئصال بالتبريد: ضع LN في محلول PBS و 4٪ PFA و 10٪ سكروز واتركه لمدة 3-4 ساعات.
  2. ضع قطرة صغيرة واحدة من مركب OCT البارد على قطعة صغيرة من رقائق الألومنيوم. تجنب فقاعات الهواء. ضع LN بحذر بدون أي سائل في منتصف القطرة.
  3. قم بتجميد العضو عن طريق وضع ورق الألمنيوم على الثلج الجاف.
  4. قم بقص أقسام من 8 إلى 10 ميكرومتر على شرائح زجاجية لاصقة إضافية باستخدام نابرد. اترك الشرائح تجف لمدة ساعتين قبل تخزينها عند -20 درجة مئوية.
  5. يمكن أن تختلف إجراءات التلوين وفقا للأجسام المضادة الأولية المستخدمة ويمكن تحسينها من البروتوكول التالي. تلطيخ الأقسام بمحلول تلطيخ (PBS ، 1٪ BSA) يحتوي على مزيج من الأجسام المضادة الأولية.
  6. احتضان لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة في غرفة رطبة.
  7. يغسل مرتين في PBS لمدة 5 دقائق
  8. احتضان مع الأجسام المضادة الثانوية لمدة 1 ساعة.
  9. يغسل مرتين في PBS لمدة 5 دقائق.
  10. قم بتركيب الشرائح في وسائط التركيب التي تحتوي على DAPI.
  11. التقط الصور باستخدام المجهر الفلوري أو المجهر متحد البؤر.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" >بعد ثلاثة أسابيع من الزرع ، يتم استرداد وهم LN / وسادة الدهون من الكلى. أصبح الوهم الآن مشابها جدا ل LN الطبيعي في وسادة الدهون الخاصة به ، ويظهر LN في وسط الأنسجة الدهنية (الشكل 1). إذا تعذر التعرف على LN ، فمن المحتمل أن يكون قد فقد أثناء الزرع على الكلى. عند تقييم دور الجينات التي يحتمل أن تكون مهمة في تطور LN ، قد تظل LNs المستردة صغيرة جدا ويصعب العثور عليها. هذا هو الحال عندما يتم إعادة ربط الأنسجة الدهنية من الفئران LTβR - / - ب LNs14 حديثي الولادة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قدمنا في هذه المقالة طريقة لفحص وقياس مساهمة الخلايا السلفية للأنسجة الدهنية في تطوير LNs وتقنيتين تسمحان بتحليل نسلها. تشريح ضمادات الدهون الجنينية والأطفال حديثي الولادة LNs دقيق ويتطلب مهارات يدوية مكتسبة من خلال الكثير من الممارسة قبل توليد وهم وسادة الدهون LN الفعلية. للتحكم في جودة التشريح ، يمكن إجراء تحليل التدفق الخلوي على وسادات الدهون و LNs. يجب أن يكون تحضير الوسادة الدهنية الجنينية خاليا من الغدد الليمفاوية ويجب ألا يحتوي على أي خلايا محفزة للأنسجة اللمفاوية CD45 + CD4 + IL-7Ra +<...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن ممتنون لموظفي وحدة الخدمات الطبية الحيوية بجامعة برمنغهام لرعاية مستعمراتنا الحيوانية. تم دعم هذا العمل من قبل مشروع الاتحاد الأوروبي FP7 المتكامل INFLACARE to JC.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
2-MercaptoethanolSigmaM3148
50 مم طبق بتريأبليتون وودزSC265
90 مم طبق بتريأبليتون وودزSC260
شرائح لاصقةSurgipath00202
مضاد للفأر CD31 eFluor 450eBioscience48-0311
مضاد للفأر CD4 Alexa 647eBioscience51-0041
مضاد للفأر CD45 PerCP-Cy5.5eBioscience45-0451
مضاد للفأر IgM Rhodamine RedStratech715-296-020-JIR
Podoplanin PE / Cy7Biolegend127411
مضاد للفأر Podoplanin منقىeBioscience14-5381
Collagenase DRoche11088858001
DMEM MediumSigmaD5671
DNase ISigmaDN25-1G
Dumont # 5 ملقط Inox BiologieFST11252-20ملقط دقيق للغاية لتشريح الأجنة وحديثي الولادة
محلول EDTA 0.5 MSigmaE7889
ERTR-7مصل الأبقار
SigmaF9665
مقص قزحية ناعم مقوى مستقيم 11 سمFST14090-11مقص صغير
لتشريح محلول HEPESSigmaH0887
مرشحات غشاء Isopore 0.8 & mu ؛ m ATTPMilliporeATTPO 1300
L-Glutamine محلولSigmaG7513
MEM محلول الأحماض الأمينية غير الضروري (100x)SigmaM7145
O.C.T. الأنسجة المركبة- Tek4583
Penicillin-StreptomycinSigmaP4458
صندوق بلاستيكي بغطاءWatkins and DoncasterE6052صندوق ساندويتش لثقافة الأعضاء في المختبر < / em>. قم بحفر فتحتين في الغطاء للسماح بتبادل الغاز في حاضنة CO2< / sub>.
RPMI 1640 متوسطسيجماR0883
الإسفنج فولكان Underwrapباترسون الطبية004383
المجهرالمجسم لايكاLEICA MZ95المجهر مع تكبير
ThermomixerEppendorf5436
Vectashield Mounting Medium مع DAPIVector LaboratoriesH-1200
ستيريلين ستيرلين الجنيني Biogenesis تشريح

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mueller, S. N., Germain, R. N. Stromal cell contributions to the homeostasis and functionality of the immune system. Nat. Rev. Immunol. 9, 618-629 (2009).
  2. Roozendaal, R., Mebius, R. E. Stromal cell-immune cell interactions. Annu. Rev. Immunol. 29, 23-43 (2011).
  3. Turley, S. J., Fletcher, A. L., Elpek, K. G. The stromal and haematopoietic antigen-presenting cells that reside in secondary lymphoid organs. Nat. Rev. Immunol. 10, 813-825 (2010).
  4. Katakai, T., et al. Organizer-like reticular stromal cell layer common to adult secondary lymphoid organs. J. Immunol. 181, 6189-6200 (2008).
  5. Link, A., et al. Fibroblastic reticular cells in lymph nodes regulate the homeostasis of naive T cells. Nat. Immunol. 8, 1255-1265 (2007).
  6. Benezech, C., et al. Ontogeny of stromal organizer cells during lymph node development. J. Immunol. 184, 4521-4530 (2010).
  7. Cupedo, T., et al. Presumptive lymph node organizers are differentially represented in developing mesenteric and peripheral nodes. J. Immunol. 173, 2968-2975 (2004).
  8. Avan de Pavert, S., Mebius, R. E. New insights into the development of lymphoid tissues. Nat. Rev. Immunol. 10, 664-674 (2010).
  9. Vondenhoff, M. F., et al. LTbetaR signaling induces cytokine expression and up-regulates lymphangiogenic factors in lymph node anlagen. J. Immunol. 182, 5439-5445 (2009).
  10. Dougall, W. C., et al. RANK is essential for osteoclast and lymph node development. Genes Dev. 13, 2412-2424 (1999).
  11. Kim, D., et al. Regulation of peripheral lymph node genesis by the tumor necrosis factor family member TRANCE. J. Exp. Med. 192, 1467-1478 (2000).
  12. Carragher, D., et al. A stroma-derived defect in NF-kappaB2-/- mice causes impaired lymph node development and lymphocyte recruitment. J. Immunol. 173, 2271-2279 (2004).
  13. White, A., et al. Lymphotoxin a-dependent and -independent signals regulate stromal organizer cell homeostasis during lymph node organogenesis. Blood. 110, 1950-1959 (2007).
  14. Benezech, C., et al. Lymphotoxin-beta receptor signaling through NF-kappaB2-RelB pathway reprograms adipocyte precursors as lymph node stromal cells. Immunity. 37, 721-734 (2012).
  15. Anderson, G., Jenkinson, E. J., Moore, N. C., Owen, J. J. MHC class II-positive epithelium and mesenchyme cells are both required for T-cell development in the thymus. Nature. 362, 70-73 (1993).
  16. Szot, G. L., Koudria, P., Bluestone, J. A. Transplantation of pancreatic islets into the kidney capsule of diabetic mice. J. Vis. Exp. (9), e404(2007).
  17. Krautler, N. J., et al. Follicular dendritic cells emerge from ubiquitous perivascular precursors. Cell. 150, 194-206 (2012).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Lymph Node Stromal CellsAdipose Tissue PrecursorsLymph Node Fat Pad ChimeraFlow Cytometric AnalysisImmunofluorescence MicroscopyEnzymatic DigestionKidney Capsule TransplantEYFP Positive CellsStromal Cell OriginLymphoid Organogenesis

Related Articles