1. رعاية الحيوان والإسكان
تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل لجنة رعاية الحيوان من جامعة جويلف، وتنفذ وفقا لتوصيات المجلس الكندي للرعاية الحيوان. وتشمل الدراسة الحالية 22 الكبار الذكور سبراغ داولي الفئران (QC نهر تشارلز،) وزنها 200-225 ز في بداية التجربة.
- الفئران بيت واحد والمحافظة عليها على ضوء / دورة عكس الظلام (7:00 OFF - 07:00 ON) مع إعلان بالمال وبالشهرة أيضا الحصول على الطعام والماء إلا عندما يتبين خلاف ذلك، أو أثناء الاختبار السلوكية التي تحدث خلال دورة نشطة.
- روض الفئران إلى غرفة المستعمرة والتعامل مع الإنسان من وزنها يوميا لمدة أسبوع واحد قبل الجراحة.
2. داخل الفم جراحة القسطرة: مواد وإجراءات
وصفت داخل الفم (IO) جراحة والمواد في Limebeer وآخرون. 14
- إلى الإنشاءاتر قنية IO، وقطع قطعة من الأنابيب البلاستيكية البولي ايثيلين الى حوالي 130 ملم في الطول (قطرها الداخلي 0.86 مم وقطرها الخارجي من 1.27 ملم).
- أنبوب لتأمينها في تجويف الفم يتطلب نهاية شفة (~ 5 مم في القطر). إنشاء هذا نهاية شفة عن طريق تسخين نهاية الأنبوب مع حام الحديد لمدة 2-5 ثانية ثم تتسطح على الفور حافة ساخنة من الأنبوب على سطح مستو. قطع قرص شبكة الجراحية (حوالي 6-7 مم لتناسب جميع أنحاء القطر من نهاية ذات حواف من قنية) والخيط وضعها على طول الأنبوب حتى تقع القرص ضد الجزء الخلفي من نهاية ذات حواف من قنية IO.
- لكل قنية IO، وقطع إضافية واحدة القرص الجراحية الشبكة (8 مليمتر في القطر) وثلاثة مربعات من فرقة مرنة (6 مم × 6 مم، وانظر الشكل 1).
- تعقيم قنية IO، وأقراص شبكة الجراحية، والساحات مرونة في محلول مضاد للجراثيم مدة لا تقل عن 24 ساعة قبل الجراحة.
- قبل الجراحة، وجميع الأدوات الجراحية utoclave وتطهير الحقل الجراحي. بين العمليات الجراحية، واستخدام معقم الزجاج حبة لتعقيم الأدوات، وارتداء hairnet، والقفازات النتريل، والأقنعة الجراحية للحفاظ على ظروف معقمة.
تسكين وتخدير
- ما يقرب من 30 دقيقة قبل الجراحة تدير الحقن تحت الجلد (SC) من Depocillin المضادات الحيوية (0.33 ملغ / كلغ) ومسكن ميلوكسيكام (5 ملغ / كغ SC).
- لحث التخدير العام باستخدام isoflurane و4 (٪ الاستقراء وصيانة 3٪).
- مرة واحدة الفئران لا تستجيب لقرصة أخمص قدميه، وقبل اتخاذ أي شقوق، واستخدام القطن يميل مسحة لإدارة مخدر موضعي على طول الخد الأيسر الداخلية من الفئران حيث قنية هو أن تزرع، وحقن مخدر موضعي مثل يدوكائين حمض الهيدروكلوريك في موقع شق لإبرة الخزعة (قاعدة العنق) وغطاء الرأس (فروة الرأس).
- تطبيق مرهم العين التشحيم لكلتا العينين قبل بداية الطفرةراي.
العمليات الجراحية
- يحلق 10 مم × 10 مم رقعة من الشعر عند قاعدة العنق. استخدام الشاش المعقم لالمسحة وتطهير منطقة حلق بالترتيب التالي: صابون مضاد للجراثيم، الآيزوبروبيل الكحول 70٪، وبتدين.
- إدراج 15 G إبرة الفولاذ المقاوم للصدأ في قاعدة العنق وتحريكه تحت الجلد حول الأذن إلى الخد الأيسر. ضع طرف الإبرة وتمريرها من خلال الخد وراء الرحى الأولى داخل تجويف الفم.
- تمرير قنية IO من خلال رأس الإبرة جاحظ من تجويف الفم ثم قم بإزالة الإبرة ولم يتبق سوى قنية IO.
- كاتب الموضوع واحد قرص شبكة الجراحية تليها ثلاثة أقراص مرنة مربع على الجزء الخارجي للقنية IO والاستفادة منها على الجلد تتعرض في الجزء الخلفي من الرقبة إلى الاستقرار فيه.
- تدفق قنية IO مع شطف الفم المضادة للبكتيريا
- قبل بداية عملية جراحية، تعديل الترباس نايلون(28 ملم طول؛ 4 مم نقطة و 8 ملم الرأس) لإزالة رأسه ونحت 2 مم الأخدود على طول الخيط (انظر الشكل 2).
- يحلق على 10 ملم × 20 ملم شريط من الشعر على طول خط الوسط من الرأس. استخدام الشاش المعقم لالمسحة وتطهير منطقة حلق بالترتيب التالي: صابون مضاد للجراثيم، الآيزوبروبيل الكحول 70٪، وبتدين.
- استخدام مشرط الجراحي لجعل 20 مم شق طويل على طول الدرز السهمي. استخدام الحفر اليد لجعل الثقوب 4 (2 على كل جانب من الخيط) واستخدام اليد التي عقدت سائق المسمار لتأمين أربعة مسامير المجوهرات في الجمجمة.
- وضع الترباس في وسط المجوهرات المسامير الأربعة مع الأخدود وضع نحو الخلفي من الحيوان. جبل الترباس في الجمجمة من الفئران من خلال بناء مترسة الرأس مع الاسمنت الأسنان (استخدام الاسمنت الأسنان كافية لتغطية سطح مسامير المجوهرات). تسمح الاسمنت الأسنان لتجف قبل إزالة الحيوان من حقل الجراحية والتخدير إنهاء.
رصد والرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية - فردي الفئران منزل في أقفاص سريرا التالية مباشرة لعملية جراحية ومراقبة عن كثب لمدة 24 ساعة.
- تدير الحقنة الثانية من مسكن ميلوكسيكام 24 ساعة بعد الجراحة وطرد قنية IO مع غسيل الفم المضادة للبكتيريا مرة واحدة / يوم لمدة ثلاثة أيام.
إعطاء الفئران 3-5 أيام للتعافي من عملية جراحية قبل بداية التجربة.
3. IO إجراءات إدارة الذات
جهاز
للإدارة الذاتية، وتستخدم زجاجي الغرف تكييف هواء فعال، ويتم وضع كل من المجلسين في أكبر مربع الخشب الرقائقي، تخفيف الصوت. كل غرفة تكييف هواء فعال لديه ضوء البيت (28 V) واثنين من العتلات قابل للسحب (نشطة وغير نشطة) تقع على طرفي نقيض من الغرفة، 8 سم فوق الأرض. يتم توصيل ذراع نشطة لمضخة التسريب وضع الرافضةيقع IDE غرفة العزل الصوت والضوء الأبيض (28 W) 3 سم فوقه لتكون بمثابة ضوء التحفيز يقترن تسليم دفعات IO. يقدم ذراع نشط للسيطرة على خط الأساس، والسلوك فعال nonreinforced؛ ذراع الضغط على هذا لا يوجد لديه ذلك، ولكن يتم تسجيل جميع المطابع.
غذاء
- توفر الفئران مع تشاو الفئران القياسية (3.1 كيلو كالوري / ز) في قفص وطنهم.
- تمييع عالية الفركتوز شراب الذرة (صيغة 55٪) لثلاثة تركيزات مختلفة (8٪ = 0.026 kcal/80 ميكرولتر التسريب؛ 25٪ = 0.08 kcal/80 ضخ ميكرولتر و 50٪ = 0.17 kcal/80 ميكرولتر التسريب) باستخدام المياه التناضح العكسي. ويتم اختيار هذه التركيزات لأن كل تنتج اللزوجة غير مناسبة لتسليم السريع دفعات (2.5 ثانية) IO نظرا لجهاز التجريبية (أي قطر من الحقن والأنابيب).
الحرمان من الطعام
من أجل تسهيل الحصول علىIO إدارة الذات، ولكن تعزيز النمو الطبيعي، وتدوير الفئران خلال فترات الحرمان من الطعام وبالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية الوصول إلى تشاو الفئران القياسية.
- وزن الفئران يوميا في الساعة 7 مساء وإزالة تشاو من حوض التغذية من القفص.
- في اليوم التالي، تزن الجرذان في تمام الساعة 12:00 مساء (في وقت لاحق ما يقرب من 18 ساعة) وتبدأ IO الإدارة الذاتية من قبل 01:00.
- العودة الفئران لأقفاص وطنهم الساعة 4:00 مساء وتوفير الوصول بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية لتشاو لمدة 3 ساعة متتالية. ثم، وتسجيل وزن الفئران والمبلغ الإجمالي للتشاو يستهلك أكثر من ثلاث ساعات. استئناف الحرمان من الطعام كما هو موضح.
عام IO الإجراء الإدارة الذاتية
يتم تقييم فعال الاستجابة للدفعات IO من شراب الذرة على العلاقات العامة وجداول المستمر من التعزيز. يتم اختبار الفئران في IO الإدارة الذاتية حتى كمية غير مستقرة كما هو محدد من قبل: 1) اختلاف كبير في الاستجابة بين النشطة وINACTIVE العتلات لا يقل عن 2 دورات متتالية، و 2) تباين أقل من 20٪ في عدد دفعات حصل في كل دورة لمدة 2 جلسات متتالية. تبدأ كل دورة 6 ساعة في دورة الظلام، ويستمر 3 ساعة. تتكون المرحلة اقتناء 10 IO دورات الإدارة الذاتية متتالية على جدول زمني مستمر من التعزيز، والفئران تتلقى PR اختبار على مدار 24 ساعة واحدة قبل بداية اقتناء (اختبار العلاقات العامة I) و 24 ساعة بعد الدورة اقتناء النهائي (اختبار العلاقات العامة II). لاختبارات العلاقات العامة، يتم تعريف نقطة (BP)، والتسريب مشاركة وردت قبل توقف عن الاستجابة على ذراع نشط لا يقل عن 1 ساعة 18.
- الجرذان موازنة على أساس الأوزان التي اتخذت لمدة ثلاثة أيام قبل بدء التجربة وتعيين الجرذان في تقرير المصير، إدارة واحد من ثلاثة تجمعات HFCS: 8٪، 25٪، أو 50٪.
- وزن الفئران في الساعة 12:00 ونقلها من غرفة إلى غرفة مستعمرة الاختبار في أقفاص وطنهم. لإزالة الطعام أو بدينانوغرام التي يمكن أن تتراكم في قنية IO، ضخ الهواء من خلال قنية باستخدام حقنة 12 مل ثابتة مع إبرة 16 G مع 50 ملم من أنابيب البولي ايثيلين (قطرها الداخلي 1.14 مم وقطرها الخارجي من 1.57 ملم) تعلق على نهاية.
- في غرفة فعال، وربط قنية IO لأنابيب Tygon (قطرها الداخلي 0.02 مم وقطرها الخارجي من 1.53 ملم) بواسطة رمح شيدت من تعديل G 20 إبرة (إزالة المحور من البلاستيك وتلميح مشطوف). ضع الجزء السفلي من الأنبوب (أي أقرب إلى الحيوان) داخل بستان من الترباس. يتم توصيل جزء أعلى من الأنبوب إلى قطب، ويحميها الربيع. ربط قاعدة الربيع للموضوع من الترباس شنت على رئيس الفئران.
- إعطاء الفئران خمس دقائق للتأقلم إلى غرفة فعال ومن ثم تبدأ دورة الإدارة الذاتية IO. تبدأ الدورة الادارة الذاتية IO مع تفعيل ضوء المنزل، ودخول اثنان العتلات قابل، وإضاءة للالتحفيز ضوء فوق ذراع نشط لمدة 30 ثانية.
- لاختبار العلاقات العامة الأول، استخدام الجدول الزمني للعلاقات العامة التي وصفها ريتشاردسون وRoberts18 (نسبة استجابة التصعيد = (5 ه (عدد حقن س 0.2)) - 5).
- لجلسات اكتساب 1-10، واستخدام الجدول الزمني المستمر من التعزيز حيث كل ضغطة على نتائج ذراع نشط في تقديم ضخ 80 ميكرولتر من محلول الاختبار أكثر من 2.5 ثوانى.
- لإتاحة الوقت الكافي للابتلاع، فرض فترة المهلة من 27.5 ثانية خلالها يتم سحب ذراع نشطة ويتم تنشيط ضوء التحفيز (يمكن الحصول على أي الفئران ضخ IO كل 30 ثانية). لا تفرض حدا على عدد من دفعات يمكن الحصول عليها في كل دورة الإدارة الذاتية IO.
- إذا لا تجعل الفئران استجابة على ذراع نشط لمدة 20 دقيقة على التوالي، رئيس الفئران (فتح غرفة فعال وتسهيل الفئران الضغط مرة واحدة على ذراع نشط). رئيس الحيوانات كل 20 دقيقة حتى 5x/session دودق الأيام الثلاثة الأولى من اقتناء فقط.
- إدارة العلاقات العامة الاختبار الثاني باستخدام المعلمات هو موضح في الخطوة 3.10.
- بعد جلسات الإدارة الذاتية IO، وإزالة الفئران من غرف فعال، تدفق قنية IO مع 2.0 مل من الماء باستخدام نفس مواد وصفها في 3.7، والعودة إلى قفص الفئران وطنهم في غرفة مستعمرة.
- بعد ثلاث ساعات من إعلان بالمال وبالشهرة أيضا الوصول إلى تشاو الفئران والجرذان الوزن في الساعة 7:00 مساء، وإزالة الطعام من حوض التغذية، واستئناف الحرمان من الطعام.
ويتم تحليل البيانات الإدارة الذاتية باستخدام اثنين عامل المتكررة التدابير تحليلات التباين (أنوفا). كانوا يعملون مقارنات متعددة باستخدام أسلوب الطالب، نيومان، Keuls (α = 0.05) لاستكشاف أي تفاعلات كبيرة أو الآثار الرئيسية.