مقالة منهجية

تقييم استجابة عضلي وVasoactivity في الشرايين المقاومة مساريقي عن طريق تخطيط العضل الضغط

17.2K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/50997

⸱

يوليو 6, 2015

 ,  ,  , 
1Section of Gastroenterology and Hepatology, Georgia Regents University, 2Division of Gastroenterology and Hepatology, University of Pittsburgh School of Medicine, 3Vascular Biology Center, Georgia Regents University

في هذه المقالة

ملخص

يستخدم تخطيط العضل الضغط لتقييم vasoactivity من الشرايين الصغيرة التي تطور انقباض مستمر عند الضغط. توفر هذه المخطوطة بروتوكول مفصلة لتقييم في قطاعات معزولة الشرايين المساريقي صغيرة من الفئران، vasoactivity وتأثير الضغط داخل اللمعة على قطر الأوعية الدموية.

الملخص

الشرايين مقاومة صغيرة انقباض وتمدد على التوالي ردا على زيادة أو نقصان الضغط داخل اللمعة. هذه الظاهرة المعروفة باسم استجابة عضلي هو المنظم الرئيسي لتدفق الدم المحلي. في ظروف إسوي الضغط الشرايين مقاومة صغيرة تتطور يستمر انقباض عضلي يعرف لهجة (MT)، والذي هو أحد المحددات الرئيسية لمقاومة الأوعية الدموية الجهازية (SVR). وبالتالي، خارج الحي الاستعدادات الضغط في الشرايين مقاومة صغيرة هي الأدوات الرئيسية لدراسة وظيفة الاوعية الدموية الدقيقة في ولايات شبه الفسيولوجية. لتحقيق ذلك، هي التي شنت على قطاع سليمة المعزولة حديثا في الشريان مقاومة صغيرة (قطر ~ 260 ميكرون) على اثنين قنية كوب صغير والضغط. هذه الاستعدادات الشرايين تحتفظ معظم الخصائص في الجسم الحي وتقييم تصريح لهجة الأوعية الدموية في الوقت الحقيقي. هنا نقدم بروتوكول مفصلة لتقييم vasoactivity في ضغط الشرايين الصغيرة مقاومة المساريقي من الفئران. هذه الشرايين تطويرتضيق الأوعية المستدام - ما يقرب من 25٪ من القطر الأقصى - عند الضغط على 70 مم زئبقي. ويمكن استخدام هذه الاستعدادات الشرايين لدراسة تأثير مجمعات الفحص على العلاقة بين الضغط داخل الشريان وvasoactivity وتحديد التغيرات في وظيفة الاوعية الدموية الدقيقة في النماذج الحيوانية من الأمراض المختلفة.

المقدمة

الشرايين مقاومة صغيرة هي المحددات الرئيسية للSVR وتلعب دورا هاما في الفيزيولوجيا المرضية لكثير من الأمراض 1،2. أمراض مثل السكري 3، 4 الحمل، نقص التروية، ضخه 5، والسمنة وارتفاع ضغط الدم 6،7 كثيرا ما ترتبط مع وظيفة الاوعية الدموية الدقيقة المتغيرة. يمكن تخطيط العضل الأوعية الدموية ليس فقط توفير معلومات هامة إلى تغيرات في وظيفة الاوعية الدموية الدقيقة في أمراض مختلفة ولكنها تساعد أيضا في تحديد الأهداف العلاجية وتقييم فعالية مركبات فعال في الأوعية. وقد درس وظيفة الأوعية الدموية باستخدام الشرايين الصغيرة المعزولة في ظل ظروف سفينة متساوي القياس أو إسوي الضغط 8. وتقدم وصفا تفصيليا للتخطيط العضل متساوي القياس في أماكن أخرى 9. ولكن هناك اختلافات في البيانات التي تم الحصول عليها من متساوي القياس مقابل الاستعدادات إسوي الضغط 10-12. منذ الاستعدادات الشرايين الضغط تسمح للدراسة وظيفة الاوعية الدموية الدقيقة في ظروف شبه الفسيولوجية، والنتائج التي تم الحصول عليها قد ترتبط بشكل أفضل مع السلوك في الجسم الحي من السرير الوعائي 8،13.

في عام 1902 وصف بايليس أول تأثير الضغط على الأوعية الدموية بطريق قطر 14. ولاحظ في الشرايين مقاومة صغيرة من مختلف سرير الأوعية الدموية من الأرانب والقطط والكلاب التي تم إتباع انخفاض في الضغط من قبل توسع الأوعية، وأعقب زيادة في الضغوط التي تضيق الأوعية. وتعرف هذه الظاهرة باسم استجابة عضلي. لاحظ بايليس والمحققين لاحقا أنه في الظروف إسوي الضغط الشرايين مقاومة صغيرة تتطور انقباض مستمر المعروفة باسم MT 15،16. كلا استجابة عضلي وMT يمكن تقييمها باستخدام الضغط تخطيط العضل (PM) تقنية. يستخدم PM أساسا لتحديد vasoactivity من الشرايين الصغيرة والأوردة والأوعية الأخرى. بالإضافة إلى تقييم أثر فعال في الأوعية المركبات على قطر الأوعية الدموية، وPM - كما يشير الاسم - يستخدم لتقييم داخل الأوعية الفصل الضغط بوساطةفي نفس الفئة على قطر الأوعية الدموية. على مدى العقود القليلة الماضية التقدم في برامج الكمبيوتر، مما عزز المجهر الفيديو والزجاج ماصة سحب، جعلت PM اسهل أداء. ومع ذلك، تشريح قطاعات سليمة قابلة للحياة من الأوعية الدموية الصغيرة لا تزال شاقة وصعبة في بعض الأحيان. نحن هنا الخطوط العريضة لبروتوكول مفصلة لدراسة استجابة عضلي في الشرايين مقاومة المساريقي صغيرة معزولة عن الفئران.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

الأمثلة المعروضة هنا هي من التجارب التي وافقت عليها IACUC في جورجيا الحكام جامعة - البروتوكول رقم: # 2011-0408

1. إعداد الكواشف

  1. إعداد الأسهم حل تشريح: للحصول على 500 مل من محلول المخزون تشريح (5X)، ويحل 21.18 جم كلوريد الصوديوم، 0.875 غرام بوكل، 0.739 غرام MgSO 4، 1.049 غرام اجتماعات الأطراف و0.019 غ EDTA في 450 مل من الماء ملي-Q. ضبط درجة الحموضة إلى 7،3-7،4 باستخدام 1 N هيدروكسيد الصوديوم. جعل وحدة التخزين إلى 500 مل بالماء الملي-Q. ويمكن تخزين محلول المخزون تصل الى 7-10 أيام. انظر الجدول رقم 1 للحصول على قائمة من المواد الكيميائية والباعة بهم. انظر الجدول رقم 2 للتركيز في ملي.
  2. يعد حل تشريح العمل: يعد حل تشريح عمل جديدة كل يوم. 100 مل من محلول العمل، ويحل 0،091 ز الجلوكوز، 0.016 غرام ناه 2 PO 4 و 0.022 غرام البيروفات الصوديوم في 79.8 مل من الماء ملي-Q. إضافة 0.2 مل 1M CaCl 2 و 20 مل الأسهم حل تشريح لجلب voluلي إلى 100 مل.
  3. إعداد محلول ملحي الفسيولوجية (PSS): لإعداد 1000 مل PSS، ويحل 0،365 ز بوكل، 6.545 غرام كلوريد الصوديوم، 0.296 غرام MgSO 4، 0.163 غرام KH 2 PO 4، 2.072 غرام جلوكوز، 2.184 غرام NaHCO 3 و 2،383 غرام HEPES في 950 مل من الملة-Q المياه. ضبط درجة الحموضة إلى 7،3-7،4 باستخدام 1 N هيدروكسيد الصوديوم. جعل وحدة التخزين إلى 1000 مل بالماء الملي-Q. إزالة 2 مل من محلول واستبدالها 2 مل من 1 M CaCl 2. (الطازجة PSS يحتاج إلى أن تكون مستعدة يوميا)
  4. يعد الكالسيوم (الكالسيوم 2+) PSS الحرة: ل100 مل PSS دون الكالسيوم 2+، ويحل 0.036 ز بوكل، 0.654 غرام كلوريد الصوديوم، 0.029 غرام MgSO 4، 0.016 غرام KH 2 PO 4، 0.207 غرام جلوكوز، 0.218 غرام NaHCO 3، 0،238 ز HEPES، 0.015 غرام EGTA و0.0026 غرام الصوديوم نتروبروسيد (SNP) في 95 مل من الماء ملي-Q. ضبط درجة الحموضة إلى 7،3-7،4 باستخدام 1 N هيدروكسيد الصوديوم. جعل وحدة التخزين إلى 100 مل بالماء الملي-Q.

2. إعداد زجاج قنية

  1. سحب الماصات الزجاجيةلتوليد 100-150 ميكرون قنية يميل باستخدام مجتذب ماصة وفقا لإرشادات الشركة المصنعة.
  2. شطبة النصائح الزجاج قنية باستخدام beveller مسرى مكروي، النار تلميع لهم وثني الزجاج نصائح قنية التي كتبها ~ 45 درجة باستخدام مسبار سخان.
  3. تحميل قنية إلى صاحب micropipette وإرفاق حامل micropipette إلى غرفة نضح.

3. إعداد غرفة الإرواء

  1. شطف غرفة نضح بالماء الملي-Q يليه حل تشريح لمدة 5 دقائق لكل منهما. تحميل غرفة مع 2 مل من محلول تشريح.
  2. شفط حل تشريح من خلال قنية باستخدام 10 مل حقنة وملء بعناية قنية كامل وأنابيب المرفقة دون أي فقاعات. تطبيق شفط بلطف لمنع توليد فقاعات.
  3. إعداد اثنين من الغرز مع عقدة نصف كل باستخدام الملقط حادة. منذ العيون خيوط النايلون حيدة (10-0، 0.2 المتري) وتستخدم لإعداد عقدة التي هي فقط1-2 مم في القطر، قد تكون هناك حاجة إلى مجهر تشريح.
  4. تصور تحت المجهر تشريح، واستخدام ملقط تشريح لتحميل كل من قنية مع عقدة الخيط مغلقة جزئيا بعيدا قليلا عن طرف. في وقت لاحق سيتم انزلق هذه عقدة بعناية على نهايات الشرايين مقنى ومغلقة تماما.

4. جمع مساريقي الشريان ممر من الجرذان سبراج داولي

  1. الحصول على موافقة اللجنة المحلية المؤسسي رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) قبل إجراء هذه التجارب. حيوانات المنزل في منشأة الحيوان مع درجة الحرارة للرقابة والإضاءة والسماح بحرية الوصول إلى المياه وطعام القوارض التجاري.
  2. تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق من الكيتامين (80 ملغ / كلغ) وزيلازين (10 ملغ / كلغ). تأكيد التخدير العميق بواسطة إصبع القدم قرصة وإذا إدارة التخدير اللازمة إضافية.
  3. بعد التأكد من التخدير الجراحي، الموت ببطء الحيوان بقطع الرأس. اتبع الإرشادات AAALAC لالتهاب المسالك البوليةLIZING الأساليب المناسبة للقتل الرحيم الحيوان.
  4. استخدام مقص تشريح وملقط لإجراء عملية فتح البطن منتصف خط من الحوض إلى القص. ويتم ذلك في خطوتين: أولا، شق الجلد والثانية، شق الطبقة العضلية الأساسية. يجب الحرص على عدم جرح الأجهزة داخل البطن.
  5. قطع نهاية القريبة من قريب الأمعاء إلى بوابة المعدة والنهاية البعيدة على مقربة من مفترق ileo الأعور. ربط طرفي منفصل لمنع تسرب الكيموس والبراز وبالتالي تجنب تلوث حل الاستحمام خارج الخلية. شق مساريق عند قاعدته قرب تغذية الأوعية الدموية أي الشريان المساريقي العلوي ونقل السرير المساريقي الأمعاء الصغيرة بأكمله إلى دورق 50 مل تحتوي على حل تشريح الجليد الباردة.
  6. تسمح الأنسجة حصاد للبقاء في الجليد حل تشريح البارد لمدة 5 دقائق ويشطف بمحلول تشريح جديدة للتخلص من الدم.

5. عزل وكيفية تركيب الكانيولا من 4 عشر طلب مساريقي الشريان

  1. ماهيتها نهاية الداني من الأمعاء على الجانب الأيمن في طبق المغلفة sylgard. تمديد الأمعاء المتبقية في مسار عكس اتجاه عقارب الساعة، تعلق في الجزء الأسفل لنشر مساريق وفضح الأوعية الدموية (الشكل 1). ملاحظة: نحن عزل قطاعات الشرايين في درجة حرارة الغرفة. وإلا فإننا وضع الممرات المساريقي تحتوي على طبق على الجليد. بعض المعامل، بما في ذلك تلك الموجودة في مؤسستنا، واستخدام وحدات التبريد لتشريح الشرايين عند 4 درجات مئوية.
  2. تحت المجهر التكبير ستيريو تشريح من 3 و 4 تشرين أجل الشرايين المساريقي صغيرة (~ 260 ميكرون) بالتوازي مع الأمعاء الدقيقة باستخدام مقص صغير. أولا تشريح بعيدا عن الدهون غطاء. ثم تشريح خارج الوريد وعزل الشريان مع-V على شكل نقطة تفرع. يجب الحرص على عدم ثقب الجزء المحدد. بدء تشريح الدهون قرب فرع ترتيب 2 الثانية، والعثور على وسيلة إلى 3 أو 4 تشرين أوردسفن إيه.
    1. ويمكن التمييز بين الشرايين والأوردة على أساس سمك الجدار بهم - الجدار الشرياني هو أكثر سمكا من في الوريد: مذكرة. وعلاوة على ذلك، عندما المجاورة النسيج الضام يتم سحبها عمودي بلطف إلى انهيار الأوعية والأوردة بسهولة بينما لا الشرايين لا. منذ الشرايين مع قطر التجويف <400 ميكرون من المواقع الرئيسية في المقاومة الوعائية الجهازية، لهذا البروتوكول استخدمنا 4 تشرين أجل الفئران الشرايين المساريقي (التجويف قطرها <300 ميكرون).
  3. عزل القسم 4-5 ملم من الشريان بالتوازي مع الأمعاء الدقيقة. تصور كل أمر عشر فرعا 5 التضمين في الأمعاء الدقيقة وقطع منها بعيدا قليلا عن أصل الفروع والحفاظ على جزء. هذه الأجزاء المحفوظة من الفروع بمثابة عقد المواقع (مع ملقط تشريح) لنقل شرائح الشرايين إلى غرفة التروية، وتوجه بعد ذلك إقناء؛ إدخال القنية الخاصة بهم.
  4. ثم قطع شرائح الشرايين بجعل 2 الشقوق البعيدة لفروع أجل ال 5 على كل جانب من الشريان ونقلها إلى غرفة نضح (انظر الشكل 1C والأسطورة).
  5. يقني؛ يدخل القنية نهاية واحدة من السفن على واحد من الزجاج micropipette (القطر: 100-150 ميكرون) باستخدام ملقط تشريح عن طريق الضغط على نصائح من الجزء شرياني مع ملقط تشريح. حرك تحميلها سابقا خياطة مغلقة جزئيا إلى نهاية مقنى وثبته. ملاحظة: نهاية القريبة من الشريان يمكن مقنى على قنية الزجاج التي يتصل بها جهاز تنظيم الضغط التي تسيطر عليها أجهزة لمحاكاة البيئة في الموقع.
  6. إرفاق حل تشريح تحميل 10 مل حقنة لمحبس المتصلة بهذا قنية مثل هذا الحل تشريح في الأنبوب الذي يربط بين قنية ومحبس يدمج مع أنه في حقنة. بلطف رفع حقنة. فإن قوة الجاذبية على حل إزالة الدم في الأوعية الدموية داخل من نهاية مفتوحة للسفينة. بعد إزالة الدم داخل الشرايينإغلاق محبس.
    ملاحظة: بدلا من ذلك، ونعلق محبس للتحكم الضغط، قم بتشغيله وزيادة الضغط بلطف إلى 5-10 ملم زئبق لتحقيق نفس النتيجة.
  7. ربط نهاية البعيدة للسفن على قنية الزجاج الثانية من خلال جلب بعناية قنية أخرى في أقرب وقت ممكن إلى نهاية غير مشروطة للجزء الشرايين. حرك تحميلها سابقا خياطة مغلقة جزئيا إلى نهاية مقنى وثبته. يجب الحرص على عدم الجرار أو سحب على قطاعات الشرايين. تأكد من أن الصمامات تعلق على كل قنية مغلقة.
  8. نقل غرفة نضح إلى مرحلة مجهر مقلوب مجهزة تسجيل لقطات فيديو حية.
  9. ربط محبس من قنية مرتبطة نهاية القريبة من قطاع الشرياني إلى جهاز تنظيم الضغط التي تسيطر عليها أجهزة وتأكد من أن محبس تعلق على قنية أخرى لا تزال مغلقة للحفاظ على الضغط داخل اللمعة مستقر.
  10. المقبل، نعلق على أنابيب فراغ إلى ميناء الشفط لالثاني نضح أنابيب إلى ميناء نضح من الغرفة.
    ملاحظة: يستخدم مشطوف ميناء إبرة شفط وميناء إبرة حادة لنضح.
  11. بدء نضح من السفينة مع دافئ PSS من خلال واحد سخان حل مضمنة (37 ° C، معايرتها مع خليط الغاز: 5٪ CO 2، 5٪ O 2 و 90٪ N للحفاظ على درجة الحموضة محايدة والأوكسجين الكافي 17) في 2 مل / دقيقة باستخدام مضخة تحوي. تحويل الفراغ على كذلك. وضع الثرمستور في غرفة لمراقبة درجة الحرارة بشكل مستمر.
  12. كما أن درجة الحرارة من جهاز الأمن الوقائي في الغرفة اقتراب ~ 37 درجة مئوية (عادة في غضون 5 دقائق)، وزيادة الضغط ببطء داخل اللمعة 20-100 مم زئبق وتحقق من السفن من وجود تسرب. ويتم ذلك باستخدام الإعداد التلقائي للضغط منظم الضغط. تجاهل السفن مع تسرب واستبدالها مع مقطع آخر. فإن السفن مع التسريبات لن تكون قادرة على الاستمرار على الضغط.
  13. تقييم الجزء الشرياني لالمنعطفات مع الحفاظ على الضغط عند 100 مم زئبق.باستخدام المسمار رافعة، نقل قنية لتصويب الجزء الشرياني. لا على امتداد قطاعات الشرايين. والهدف من ذلك هو تقليد في الجسم الحي طول الجزء الشرياني.
  14. تخفيف الضغط إلى 70 مم زئبق (لتقليد في ضغط الجسم الحي في الممرات المساريقي 18) والسماح للقطاع الشرايين لترسيخ الاستقرار والتنمية لهجة عضلي. يمكن ضغط الشرايين بنسب مختلفة (40-70 مم زئبق) وفقا لاستراتيجية التجريبية والسرير الوعائي. يوفر مراجعة نشرت سابقا استعراض ممتاز من التباين في MT في قطاعات الشرايين من أسرة الأوعية الدموية المختلفة 8.

6. قياس القطر الشرياني

  1. مشاهدة الشرايين في الهدف 10X على المجهر مزودة بكاميرا الجهاز المسؤول عن جانب أحادية الفيديو. قياس قطرها اللمعية باستخدام إطار الفيديو المختطف في الوقت الحقيقي ونظام الحافة الكشف. وهناك قائمة من المعدات المستخدمة في الجدول 3.
  2. رصد والأوعية سجل دiameter بشكل مستمر.
  3. مراقبة لتطوير MT. ملاحظة: لاحظنا أنه في الفئران الشرايين مقاومة المساريقي، في 70 مم زئبق، وتتميز تطوير MT التي كتبها ~ انخفاض بنسبة 20٪ في قطر. MT يختلف وفقا لنوع السرير والحيوان الأوعية الدموية.
  4. تأكيد بقاء الأوعية الدموية عن طريق تقييم مضيق للأوعية وعائي الردود على 1 ميكرومتر فينيليفرين (الفنيل ألانين) و 1 ميكرومتر أستيل كولين (ACH).
  5. في نهاية كل تجربة، وتحديد قطرها السلبي (PD) التي يحتضنها الشرايين في كا 2+ خالية PSS لمدة 20 دقيقة.

7. الاستجابة عضلي

  1. تخفيف الضغط إلى 20 ملم زئبق، والسماح للقطر لتحقيق الاستقرار. زيادة الضغط داخل اللمعة في خطوات تدريجية (20، 40، 60، 80 و 100) وعند كل خطوة ضغط الشرايين تسمح لتحقيق القطر مستقر (عادة في غضون 5 دقائق).
  2. تقليل الضغط داخل اللمعة إلى 20 مم زئبق واحتضان شريحة الشرايين في كا 2+ خالية PSS تحتوي على 0.39 ملمEGTA و 0.1 ملي SNP. السماح قطر الشرايين لتحقيق الاستقرار (عادة 15 دقيقة).
  3. تكرار استجابة الضغط خطوة في كا PSS 2+ خالية تحتوي على 0.39 ملي EGTA و 0.1 ملي SNP.

8. تفسير النتائج وحساب البيانات

  1. حساب MT بالفرق في المئة في قطر لوحظ ل Ca 2+ المحتوية على الكالسيوم مقابل 2+ خالية PSS في كل الضغط وفقا لحساب التالية:
    figure-protocol-1
  2. لالشرايين التي تمر تغير القطر الوعائي قطر قد تحسب عن طريق حساب متوسط ​​مرحلة الهضبة لمدة 1 دقيقة. التعبير عن البيانات التي تم جمعها كنسبة مئوية من الاسترخاء الأقصى (٪ PD) وفقا للعلاقة:٪ PD = 100 × [ΔD / PD]. ΔD هو الفرق بين القطر قبل وبعد إضافة أي مركب إينفستيغأيشنل (مثل الفنيل ألانين)؛ PD هو القطر السلبي (أيضاقطر القصوى).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

ويرد التمثيل التخطيطي الضغط نموذجي مخطاط العضل انشاء في الشكل 1. ومقنى طرفي السفينة مع micropipette الزجاج والمضمون مع الغرز على الجانبين. عبر أنابيب ومحبس مفتوحة، يتم توصيل قنية واحد إلى الضغط المنظم التي تسيطر عليها مضاعفات. يتم توصيل قنية أخرى إلى محبس مغلقة. وperfused لغرفة مع ويلاحظ من خلال مجهر مقلوب متصلة كاميرا CCD PSS وقطر الأوعية الدموية التغييرات.

وحضنت الجزء الشرياني الضغط على 70 مم ز...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

خطوات حاسمة، استكشاف الأخطاء وإصلاحها وتعديلها

في إعداد سفينة إسوي الضغط نموذجي، يتم ضغط الشريان في 70 مم زئبق بين اثنين قنية الزجاج مع perfused دافئ (37 درجة مئوية) PSS. بعد 30-45 دقيقة والشرايين تطوير MT، التي تتميز بانخفاض عفوية في قطر أن يستقر في 20-30 دقيقة. الشرايين المقاومة من مختلف سرير الأوعية الدموية تطوير MT متغير. على سبيل المثال مقاومة الفئران الشرايين المساريقي تطوير MT ~ 25٪ من PD، في حين الشرايين cre...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لديهم الصراعات المالية.

شكر وتقدير

ويدعم سانديب كورانا من قبل المعاهد الوطنية للصحة (K08DKO81479). ويدعم فيكرانت Rachakonda التي كتبها (T32DK067872).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات < td >< قوي > محلول ملح فسيولوجي (1,000 مل) < / قوي >< / td > < td >< قوي > ملم < / قوي >< / td > < td >< / td > < tr > < td > KCl < / td > < td > 4.9 < / td > < td > 0.365 جم < / td> < TD > ماء منزوع الأيونات < / TD > < TD >< TD > <> 998 مل < / TD > < / TR > < TD > Ca 2 + < / sup> محلول ملح فسيولوجي خال من الملح (100 مل) < / قوي>< / TD > < TD >< قوي > ملم < / قوي >< / TD > < TD >< / TD > < / TR > < TD >KCl < / td > < TD > 4.9 < / TD > < TD >0.036 جم < / TD > < / tr > < td > NaCl < / td > < td > 112 < / td > < td > 0.645 غ <> KH2PO4 < td > HEPES < / td > < td > 10 < / td > < td > 0.238 جم < / td > < / tr > < td > nitroprusside الصوديوم < / td > < td > الماء المنزوع الأيونات < / td > < td >< / td > < td > 100 مل < / td > < > < td >< قوي > محلول تشريح ، مخزون (500 مل) < / قوي >< / TD > < TD >< قوي > مللي متر < / قوي >< / TD > < TD >< / TD > < / tr > < TD > NaCl < / td > < td > 145 < / TD > <> 21.18 جم < / TD > < / TR > <> < TD > KCl < / td > < td > 4.7 < / td> <> < td >< قوي > محلول تشريح يعمل (100 مل) < / قوي >< / td> الجلوكوز < / td > < td>CaCl2
<قوي>كيميائي< / قوي>
أستيل كولينسيجما ألدريتشA6625
كلوريد الكالسيوم (CaCl 2< / sub>)سيجما ألدريتش223506
D- (+) - الجلوكوزسيجما ألدريتشG5767
الإيثيلين جلايكول بيس (2-أمينوإيثيلإيثر) - N ، N ، N ، N '، N'-حمض الخليك الرباعي (EGTA)سيجما AldrichE3889
الإيثيلين ديامين حمض الخليك الرباعي (EDTA)سيجما ألدريتشE9884
هيبسسيجما ألدريتشH3784
كبريتات المغنيسيوم (MgSO4< / sub>)سيجما ألدريتشM7506
MOPSسيجما ألدريتشM5162
فينيل إيفرينسيجما ألدريتشP6126
كلوريد البوتاسيوم (KCl)سيجما ألدريتشP3911
فوسفات البوتاسيوم (KH2< / sub>PO4< / sub>)Sigma AldrichP5655
بيكربونات الصوديوم (NaHCO3< / sub>)Sigma AldrichS6014
كلوريد الصوديوم (NaCl)سيجما ألدريتشS7653
هيدروكسيد الصوديوم (NaOH)سيجما ألدريتشS5881
نيتروبروسايد الصوديومسيجما ألدريتش13451
أحادي هيدرات أحادي القاعدة لفوسفات الصوديوم (NaH2< / sub>PO4< / sub>)Sigma AldrichS9638
بيروفات الصوديومSigma AldrichP8574
الجدول 1.< / strong>
< حدود الجدول = "1" >
NaCl 1126.545 g
MgSO4.7H2O1.20.296 g
KH2PO41.20.163 g
Glucose11.52.072 g
NaHCO3262.184 g
HEPES102.383 g
CaCl2 < / TD > < TD > 2 < / TD > < TD > 2 مل (مخزون 1 مليون) < / TD > < / tr >
MgSO4.7H2O1.20.029 g
1.20.016 g
Glucose11.50.207 g
NaHCO326 0.218 جم < / TD > < / tr >
EGTA < td > < td > 0.39 < td > < td > 0.015 g < / td > < / tr >
0.1< / td > 0.0026 g < / td > < >
0.875 g
MgSO41.20.739 g
MOPS21.049 g
EDTA< / td> 0.02< td> 0.019 g< / td > < tr >
ماء منزوع الأيونات < td > < td >< td > 500 مل < / td > < / tr >
mM< / strong>< / td> < / td> < tr>
مخزون محلول التشريح< / td > 20 مل < / td > < tr > <>
1.2 < / td > < td > 0.091 جم < / td > < / tr > < tr> NaH2PO4 50.016 g
Sodium pyruvate20.022 g
20.2 مل (مخزون 1 متر)
ماء منزوع الأيونة79.8 مل
<قوي>جدول 2. تكوين الحلول التجريبية المعدات < / قوية >CCD كاميرا أحادية اللون مصدر التصوير DMK 21AU04 سخان حل مضمن واحد Warner Instruments 64-0102 Thermistor Warner Instruments 64-0108 جهاز التحكم في درجة الحرارة الأوتوماتيكي المزدوج Warner Instruments TC-344Bمجتذب الماصات الدقيقة المشتعلة / البنيSutter InstrumentsP-97واجهة نظام التألقIonOptixنموذج FSI-700ملقط ومقص أدوات الدقةالعالميةمعالج أيون Core والتحليلمعالج أيونأيون 6.0 أنابيب مختبريةSilastic508-005ذكر Sprague Dawley< / em> الفئرانHarlan LaboratoriesMaster flex وحدة التحكم محركCole-parmerMilli-Q Plus نظام المياه عالي النقاءMilliporeZD5211584 خيوط النايلون أحادية الشعيرات العينية Ethicon9007Gالقياس الضوئي وقياس الأبعاد المجهرMoticAE31وحدة تحكم مؤازرة بالضغط مع مضخة تمعجية ومحول ضغطأنظمة المعيشة الأجهزةPS-200مجهر مجسمNikon Instruments IncSMZ660أجهزة المعيشة لغرفة السفينةأجهزة CH-1طبق تشريحأنظمة المعيشة أجهزة DD-90-Sالشعيرات الدموية الزجاجية رقيقة الجدارالعالميةTW120-6MicroforgeStoelting51550<td colspan = "4" ><قوي>الجدول 3.< / قوي>

المراجع

  1. Christensen, K. L., Mulvany, M. J. Location of resistance arteries. J Vasc Res. 38, 1-12 (2001).
  2. Rietzschel, E. R. Oxidized low-density lipoprotein cholesterol is associated with decreases in cardiac function independent of vascular alterations. Hypertension. 52, 535-541 (2008).
  3. Hill, M. A., Ege, E. A. Active and passive mechanical properties of isolated arterioles from STZ-induced diabetic rats. Effect of aminoguanidine treatment. Diabetes. 43, 1450-1456 (1994).
  4. Osol, G., Cipolla, M. Interaction of myogenic and adrenergic mechanisms in isolated, pressurized uterine radial arteries from late-pregnant and nonpregnant rats. Am J Obstet Gynecol. 168, 697-705 (1993).
  5. Cipolla, M. J., McCall, A. L., Lessov, N., Porter, J. M. Reperfusion decreases myogenic reactivity and alters middle cerebral artery function after focal cerebral ischemia in rats. Stroke. 28, 176-180 (1997).
  6. Ren, Y., et al. Enhanced myogenic response in the afferent arteriole of spontaneously hypertensive rats. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 298, H1769-H1775 (2010).
  7. Hayashi, K., Epstein, M., Saruta, T. Altered myogenic responsiveness of the renal microvasculature in experimental hypertension. J Hypertens. 14, 1387-1401 (1996).
  8. Schubert, R., Mulvany, M. J. The myogenic response: established facts and attractive hypotheses. Clin Sci (Lond). 96, 313-326 (1999).
  9. Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography. J Vis Exp. , (2011).
  10. Buus, N. H., Vanbavel, E., Mulvany, M. J. Differences in Sensitivity of Rat Mesenteric Small Arteries to Agonists When Studied as Ring Preparations or as Cannulated Preparations. British Journal of Pharmacology. 112, 579-587 (1994).
  11. Falloon, B. J., Stephens, N., Tulip, J. R., Heagerty, A. M. Comparison of small artery sensitivity and morphology in pressurized and wire-mounted preparations. Am J Physiol. 268, H670-H678 (1995).
  12. Schubert, R., Wesselman, J. P. M., Nilsson, H., Mulvany, M. J. Noradrenaline-induced depolarization is smaller in isobaric compared to isometric preparations of rat mesenteric small arteries. Pflugers Archiv-European Journal of Physiology. 431, 794-796 (1996).
  13. Khurana, S., Raina, H., Pappas, V., Raufman, J. P., Pallone, T. L. Effects of deoxycholylglycine, a conjugated secondary bile acid, on myogenic tone and agonist-induced contraction in rat resistance arteries. PLoS One. 7, e32006(2012).
  14. Bayliss, W. M. On the local reactions of the arterial wall to changes of internal pressure. J Physiol. 28, 220-231 (1902).
  15. Hughes, J. M., Bund, S. J. Arterial myogenic properties of the spontaneously hypertensive rat. Exp Physiol. 87, 527-534 (2002).
  16. Mulvany, M. J., Halpern, W. Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ. Nature. 260, 617-619 (1976).
  17. Raina, H., Zacharia, J., Li, M., Wier, W. G. Activation by Ca2+/calmodulin of an exogenous myosin light chain kinase in mouse arteries. J Physiol. 587, 2599-2612 (2009).
  18. Fenger-Gron, J., Mulvany, M. J., Christensen, K. L. Mesenteric blood pressure profile of conscious, freely moving rats. J Physiol. 488 (Pt 3), 753-760 (1995).
  19. Davis, M. J., Hill, M. A. Signaling mechanisms underlying the vascular myogenic response). Physiol Rev. 79, 387-423 (1999).
  20. Osmond, J. M., Mintz, J. D., Dalton, B., Stepp, D. W. Obesity increases blood pressure, cerebral vascular remodeling, and severity of stroke in the Zucker rat. Hypertension. 53, 381-386 (2009).
  21. Ge, Y., et al. Endogenously produced 20-HETE modulates myogenic and TGF response in microperfused afferent arterioles. Prostaglandins Other Lipid Mediat. 102-103, 42-48 (2013).
  22. Ryan, M. J., et al. Placental ischemia impairs middle cerebral artery myogenic responses in the pregnant rat. Hypertension. 58, 1126-1131 (2011).
  23. Bagi, Z., et al. Type 2 diabetic mice have increased arteriolar tone and blood pressure: enhanced release of COX-2-derived constrictor prostaglandins. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25, 1610-1616 (2005).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة