يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الديدان الطفيلية جمع وتحديد الهوية من الحياة البرية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ومطفول الحيوانات البرية عادة من قبل مجموعة واسعة من الديدان الطفيلية. أربعة أنواع رئيسية من الديدان الطفيلية هي "الديدان" (النيماتودا)، "الديدان شوكية الرأس" (acanthocephalans)، "المثقوبة" (الديدان المثقوبة)، و "الدودة الشريطية" (الديدان الشريطية). الأسلوب الأمثل لجمع الديدان هو دراسة المضيف الذي كان القتلى أقل من 4-6 ساعة لأن معظم الديدان سوف يكون لا يزال على قيد الحياة. ينبغي إجراء التشريح شامل وجميع الأجهزة الرئيسية فحصها. يتم غسلها الأجهزة أكثر من 106 ميكرون غربال تحت الماء ومحتويات فحصها تحت المجهر ستيريو تشغيل. تحسب جميع الديدان ويتم إصلاحها عدد ممثل (إما في الايثانول 70٪، 10٪ من الفورمالين مخزنة، أو حمض الخليك، الكحول الفورمالين). لتحديد الأنواع، يتم مسح إما الديدان الطفيلية في lactophenol (الديدان الخيطية وacanthocephalans الصغيرة) أو الملون (الديدان المثقوبة، الديدان الشريطية، وacanthocephalans كبيرة) باستخدام الهيماتوكسيلين هاريس أو اللون القرمزي Semichon ل. الديدان هي KEYEد على الأنواع من خلال دراسة الهياكل المختلفة (على سبيل المثال. الشويكات الذكور في الديدان الخيطية أو منقاف في الديدان الشريطية). البروتوكولات المذكورة هنا يمكن تطبيقها على أي حيوان فقاري. أنها تتطلب بعض الخبرة في الاعتراف الأجهزة المختلفة والقدرة على التفريق الديدان الطفيلية من غيرها من الحطام الأنسجة أو الأمعاء محتوياتها. جمع وحفظ وتلطيخ هي التقنيات التي تتطلب واضحة الحد الأدنى من المعدات والكواشف. تحديد التصنيفية، خصوصا أن الأنواع، يمكن أن يكون وقتا طويلا جدا، وربما يتطلب تقديم العينات إلى خبير أو تحليل الحمض النووي.
المقدمة
معظم الديدان الطفيلية لها دورات حياة معقدة تتضمن أكثر من مضيفواحد 1،2. على سبيل المثال ، تحتوي الديدان المثقوبة على مضيف أو اثنين من العوائل الوسيطة (عادة اللافقاريات) ومضيف نهائي. يجب أن يكون جميع المضيفين متاحين حتى تكتمل الدورة وبالتالي أن تكون الديدان الطفيلية البالغة حاضرة في المضيفين النهائيين (وهم موضوع هذه المخطوطة). لذلك من المهم أن تضع في اعتبارك أن التقلبات الموسمية يمكن أن تحدث في انتشار وشدة بعض أنواع الديدان الطفيلية وأن المراقبة طويلة المدى مرغوبة لالتقاط الديدان الطفيلية الكاملة للعدان لمضيف معين.
الطريقة المثلى لجمع الديدان الطفيلية هي فحص مضيف تم قتله رحيم. هذا يسمح بجمع الديدان الطفيلية وهي لا تزال على قيد الحياة والاسترخاء والتثبيت المناسبين. غالبا ما تكون المواد من العوائل التي ماتت لأكثر من 24 ساعة ، أو تم تجميدها وإذابتها لفحصها ، أقل شأنا ويصعب التعرف عليها. غالبا ما يتم تقليص الديدان المثقوبة والاستفصال من العوائل المجمدة أو الرسمية بشكل سيء وفقدت الهياكل الحاسمة لتحديد الهوية مثل العمود الفقري الفموي على الديدان الشريطية أو الخطافات الموجودة على سكوليكس الديدان الشريطية. ومع ذلك ، فإن الحقيقة هي أن معظم المواد المتاحة من مضيفات الفقاريات هذه الأيام يتم تجميدها أو حفظها.
قواعد البيانات التي تحتوي على معلومات تسلسل الحمض النووي للديدان الطفيلية تنمو بسرعة ، وبالتالي فإن التحديد التصنيفي ممكن بالفعل للعديد من الأنواع. لذلك ، يجب الحفاظ على الديدان الطفيلية لتحليلات الحمض النووي المحتملة قدر الإمكان. ومع ذلك ، فإن الحمض النووي ذو النوعية الجيدة غير ممكن إذا تم تثبيت العينات في الفورمالين. ستنتج الطرق الموضحة هنا لجمع الديدان الطفيلية وقتلها مادة مناسبة لاستخراج الحمض النووي والتحليلات الجينية.
أدناه ، نصف طرقا مفصلة حول كيفية تشريح الفقاريات (البرمائيات والزواحف والطيور والثدييات ؛ لا يتم تضمين الديدان المثقوبة أحادية الجين من الأسماك) لجمع الديدان الطفيلية ، متبوعة بإجراءات حول كيفية الحفاظ عليها ومعالجتها لتحديد التصنيف.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم العثور على المستخدمة في التجارب التالية ميتة بسبب قتل الطرق.
فئة1. تشريح وفحص الأعضاء الرئيسية لجمع الديدان الطفيلية
- ضع على سطح مستو وافحص جميع الفتحات الخارجية بما في ذلك الأذنين وتجويف الفم والعينين باستخدام عدسة مكبرة لوجود الديدان الخيطية (المستديرة) والديدان المثقوبة (المسطحة وغير المجزأة) (انظر الشكل 1).
- إذا كنت تعمل مع الطيور ، اغسلها بماء الصنبور لترطيب الريش قبل التشريح.
- باستخدام شفرة حادة أو سكين وبمساعدة زوج من ملقط التشريح ، قم بعمل شق على تجويف البطن مع الحرص على عدم تمزق أي أعضاء. بالنسبة للسلاحف ذات الدرع الصلب ، استخدم منشارا محمولا لقطع العظم في منطقة الجسر بين الصدر والبطن.
- افتح التجويف الصدري على النحو الوارد أعلاه ؛ بالنسبة للحيوانات الكبيرة ، قد تكون هناك حاجة إلى قواطع العظام أو منشار صغير محمول لقطع الأضلاع.
- إذا كنت تعمل مع الطيور ، فقم بفحص الأكياس الهوائية في الموقع قبل إزالة أي أعضاء. استخدم عدسة مكبرة إذا لزم الأمر.
- افحص كلا التجاويف بحثا عن الديدان الأسطوانية الخيطية والمثقوبات الكبيرة.
- قبل إزالة الجهاز الهضمي من تجويف البطن ، اربط خيطا قريبا من بداية المريء وخيطا آخر في نهاية الأمعاء الغليظة (المستقيم).
- افصل الأعضاء الصدرية التالية إلى أطباق بتري (أو صواني زجاجية إذا كانت الأعضاء كبيرة جدا) لفحصها تحت مجهر استريو (10-30X): القلب والأوعية الدموية الرئيسية والقصبة الهوائية والرئتين.
- إزالة الكبد والمرارة والقناة والبنكرياس والطحال والكلى والمثانة البولية وفحصها كما هو موضح في الخطوة 1.8.
- قم بإزالة الجهاز الهضمي بالكامل وضع كل قسم في أطباق / صواني زجاجية.
- بعد إزالة الأعضاء ، اغسل تجويف الجسم بخرطوم أو زجاجة بخاخ مملوءة بمحلول ملحي بنسبة 0.9٪ في منخل شبكي 106 ميكرومتر وافحص محتويات الغربال تحت مجهر استريو بحثا عن وجود ديدان خيبية أو مثقوب دموي.
- افتح كل قسم من أقسام الجهاز الهضمي بالمقص ، واكشط الغشاء المخاطي وافحص بعناية وجود طفيليات كبيرة (>1 سم). استخدم عدسة مكبرة إذا لزم الأمر. غالبا ما يتم غرس خرطوم الخواص الرؤية بعمق في جدار الأمعاء وقد يتعين إزالته بعناية من الأنسجة باستخدام ملقط و / أو مقص صغير.
- ضع كل قسم مفتوح تحت الماء الجاري واغسل جميع المحتويات في منخل 106 ميكرومتر كما هو موضح في الخطوة 1.11.
- افتح القلب والأوعية الدموية الرئيسية (الرئة والشريان الأورطي) والقصبة الهوائية والبول والمرارة وافحص المحتويات بنفس الطريقة.
- قم بتقطيع الأعضاء الصلبة مثل الرئتين والكبد والكلى والطحال والبنكرياس إلى شرائح وفصلها باستخدام شفرة حادة وملقط. اغسلها تحت الماء الجاري في غربال 106 ميكرومتر كما هو موضح في الخطوة 1.11.
- سجل أنواع الطفيليات التي تم العثور عليها وعدد كل نوع والأعضاء (الأعضاء) التي توجد فيها. طرق التثبيت والتلوين مذكورة أدناه.
- قم بتسمية القوارير / البرطمانات عن طريق وضع قطعة صغيرة من بطاقة فهرسة عادية مكتوبة بالقلم الرصاص (سيتم "تشغيل" الحبر وبطاقات الفهرسة المسطرة في عينات الكحول والبقع).
- بالنسبة للديدان الطفيلية التي تحتاج إلى الحفاظ عليها للدراسات الجينية اللاحقة ، ضعها مباشرة في 80-90٪ من الإيثانول (بدون الجلسرين). يجب أن يصنع الإيثانول عن طريق تخفيف 95٪ من الإيثانول ، ويفضل درجة الكاشف (الجدول 1). لا تسمح أبدا بتعرض هذه العينات للفورمالين ، لأن الفورمالين يحط من الحمض النووي إلى حالة غير صالحة للاستخدام.
- ضع الديدان المثقوبة الحية على شريحة مجهر زجاجي في قطرة من المحلول الملحي ، ضع زلة غطاء زجاجي ومرر الشريحة فوق اللهب دون غليان المحلول الملحي.
- قم بإسقاط الشريحة في طبق بتري يحتوي على AFA (حمض الكحول والفورمالين والخليك ، انظر الجدول 1) واترك الغطاء ينزلق يطفو.
- ثبته في AFA لمدة يوم إلى عدة أيام ، واشطفها بماء الصنبور ، وانقلها إلى قوارير زجاجية سعة 5 مل (أو قارورة / برطمان زجاجي أكبر حسب حجم وكمية الطفيليات) مملوءة بنسبة 70٪ من الإيثانول للتخزين طويل الأجل.
- قم بإصلاح الديدان المثقوبة الميتة في AFA أو الفورمالين المخزن 10٪ لمدة 48 ساعة ثم انقلها إلى قارورة / برطمان مملوء بنسبة 70٪ من الإيثانول للتخزين طويل الأجل.
- استرخ السيستودات الحية في طبق بتري عن طريق سكب الماء شبه المغلي فوقها ثم نقلها إلى قارورة / برطمان مملوء بنسبة 70٪ إيثانول للتخزين طويل الأجل.
- استرخ القنثرة الالقصائية الحية عن طريق وضعها في طبق بتري لمدة ساعة إلى عدة ساعات في ماء الصنبور في الثلاجة (~ 4 درجة مئوية) حتى يتم قطع الدخل بالكامل (قد يستغرق ذلك ما يصل إلى 24 ساعة). انقله إلى قارورة / برطمان مملوء بنسبة 70٪ إيثانول أو AFA للتخزين طويل الأجل.
- عالج الديدان الخيطية الميتة والشفص مثل الديدان المثقوبة الميتة (انظر أعلاه).
- اقتل الديدان الخيطية الحية الصغيرة (<5 مم ، أو الهشة (مثل trichostrongylids ، الشعيرات الدموية) في 70٪ من الإيثانول الساخن (قريب من الغليان) وحفظها في قارورة / جرة مملوءة بنسبة 70٪ إيثانول مع 5٪ جلسرين مضاف للحفاظ على الديدان في حالة التبخر.
- اقتل (وقم بإزالته) من الديدان الخيطية المتوسطة إلى الكبيرة (>5 مم) (مثل الأسكاريدات ، واللولبيات ، والأوكسيوريدات ، والفيلاريد) عن طريق وضعها في طبق بتري مع حمض الخليك الجليدي البارد (الجدول 1) وبعد 15 دقيقة ، قم بنقلها إلى قارورة / جرة مملوءة بنسبة 70٪ إيثانول و 5٪ جلسرين. يمكن استخدام حمض الأسيتيك بشكل متكرر بهذه الطريقة.
- ضع الديدان الخيطية الميتة مباشرة في قارورة / برطمان مملوء بنسبة 70٪ إيثانول و 5٪ جلسرين.
- تحضير الهيماتوكسيلين هاريس عن طريق إذابة الهيماتوكسيلين في الكحول وإذابة كبريتات الألومنيوم الأمونيوم في الماء بالحرارة. اخلطي كلا المحاللين واتركيها حتى الغليان.
- يضاف يودات الصوديوم ويغلى لمدة 2-3 دقائق.
قم - بالإفراط في المثقوب ، والأستاد الخيطية ، والأكانثوسيفالان عن طريق تركها في هيماتوكسيلين هاريس المخفف (1:10) أو كارمين سيمشون بين عشية وضحاها (انظر الجدول 1).
- قم بإزالة البقع باستخدام 70٪ من الإيثانول الحمضي حتى تظهر الأعضاء (يمكن أن يستغرق ما بين بضع ثوان إلى أكثر من ساعة ويجب مراقبته عن كثب).
- توقف عن إزالة البقع عن طريق نقل العينات إلى 70٪ من الإيثانول الأساسي لمدة 30 دقيقة على الأقل. بعد ذلك ، قم بتجفيفها في سلسلة من الإيثانول المتدرج (80٪ ، 95٪ ، 100٪) وقم بإزالتها في الزيلين أو الميثيل ساليسيلات.
- قم بتركيب العينات على شريحة مجهرية بعد إضافة قطرة من البلسم الكندي وزلة غطاء. دعها تجف طوال الليل.
- قم بتنظيف الديدان الخيطية الصغيرة إلى المتوسطة والأكانثوسيفالان لمدة 15-30 دقيقة في حوامل مؤقتة من اللاكتوفينول على شريحة مجهرية مع زلة غطاء.
- استخدم 80٪ فينول لمدة تصل إلى 60 دقيقة للديدان الخيطية الكبيرة (الأسكاريد واللولبيات) والأكانثوسيفالان. افحص تحت المجهر الضوئي (40-400X) لتقييم الهياكل الأصغر (شويكات وخطافات ذكورية).
- استخدم الأساليب التالية لفحص الهياكل الخاصة.
- بالنسبة للسيستودا ، قم بقطع السكوليكس وضعه على شريحة مجهرية في اللاكتوفينول و "الاسكواش" مع زلة غطاء لقياس وعد الخطافات النجمية الوردية (انظر الشكل 1 ب).
- بالنسبة للديدان الخيطية ، قم بقطع الطرف الأمامي وقم بتثبيته على شريحة مجهرية في بضع قطرات من اللاكتوفينول (بدون غطاء للغطاء) أو في هلام الجلسرين لتركيب دائم (مع زلة الغطاء) ومراقبة أجزاء الفم تحت مجهر ضوئي (35-400X) (انظر الشكل 1 د).
- اقطع ذيول الديدان الخيطية الكبيرة وقم بتثبيتها على شريحة مجهرية في اللاكتوفينول مع زلة غطاء لمراقبة الحليمات البطنية ومورفولوجيا الشوكة للذكور تحت المجهر الضوئي (انظر الشكل 1 د).
- تحديد الطفيليات للأنواع باستخدام مزيج من الأدبيات الأولية والمراجع التصنيفية القياسية مثل:
- الديدان المثقوبة: ياماغوتي (1958 ، 1971) 3،4 وجيبسون وآخرون. 5-7
- Acanthocephalans: ياماغوتي8
- Cestodes: Yamaguti9 و Schmidt10 و Khalil et al. 11
- الديدان الخيطية: ياماغوتي12 وأندرسون وآخرون. 13
- إيداع عينات الديدان الطفيلية التمثيلية في مجموعة الطفيليات الوطنية الأمريكية (USNPC). هذا إلزامي لمعظم المجلات الطفيلية. بعد التقديم ، يتم تعيين رقم انضمام لكل نوع من أنواع الديدان الطفيلية لإدراجه في المخطوطات.
- قم بتضمين المعلومات التالية عند تقديم العينات: 1) الاسم العلمي للطفيلي. 2) معلومات المضيف (الأنواع وإحداثيات خطوط الطول/العرض للموقع الجغرافي)؛ 3) العضو الموجود في المضيف. 4) اسم من جمع العينات وتاريخ الجمع ؛ 5) نوع المثبت أو وصمة عار أو المسح / التركيب المستخدمة ؛ 6) موقع المجموعات الأخرى (المتحف وأرقام الانضمام) إذا تم تقديم عينات إضافية في مكان آخر ؛ و 7) معلومات عن النشر والمجلة. يجب أيضا إرسال هذه البيانات مع العينات وتحت غطاء منفصل.
- قم بتعبئة العينات في حاويات قوية بمواد ماصة مقاومة للصدمات. أغطية لولبية شريطية / بارافيلم على قوارير زجاجية وضع كل قارورة في كيس بلاستيكي منفصل. لف الشرائح بالورق وضعها في صندوق منزلق به مادة ممتصة للصدمات بينهما.
- شحن عينات ورسالة منفصلة تحتوي على معلومات حول العينات إلى: مجموعة الطفيليات الوطنية الأمريكية ، USDA ، ARS ، ANRI ، Bldg. 1180 ، BARC-East ، 10300 شارع بالتيمور ، بيلتسفيل ، ماريلاند 20705-2350.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
باستخدام الطرق الموضحة أعلاه، أُجري مسح للديدان الطفيلية في الزباب المقنع، Sorex cinereus، في مقاطعة ميسولا بمونتانا بين عامي 2007-2011. تم جمع ما مجموعه 56 من الزباب من مصائد الحفر وفحصها في غضون ساعتين بعد الوفاة. بلغ معدل انتشار العدوى الإجمالي 96%؛ حيث كان هناك 2 فقط من الزباب خاليين من الطفيليات. تم تحديد خمسة عشر نوعاً من الديدان الطفيلية، شملت 9 أنواع من الديدان الشريطية و6 أنواع من الديدان الخيطية. وكان هناك نوع واحد من الديدان الشريطية من جنس Staphylocystoides لم يتم وصفه مسبقاً. وشملت الأعضاء ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
من الصعب للغاية تحديد طفيليات الديدان الطفيلية ، حتى الجنس ، بناء على المواد الرديئة. تميل الديدان الخيطية والديدان المثقوبة ، على وجه الخصوص ، إلى الموت والتدهور بسرعة إلى حد ما بعد وفاة المضيف. يعتمد تصنيف الديدان الديوانية بشكل كبير على عدد وحجم وشكل خطافات الورستيوم ، والتي غالبا ما تضيع في المواد المجمدة. الأمر نفسه ينطبق على بعض الديدان المثقوبة ذات الأشواك حول مصاصة الفم مثل المشوكيات وغير المتجانسة ، والتي يتم فقدها أيضا بشكل متكرر. بسبب بشرتها السميكة ، تكون الديدان الخيطية والأكانثوسيفالان أكثر صلابة قليلا ، ول...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدينا ما نكشف عنه
شكر وتقدير
يود المؤلفون أن يشكروا الدكتور جو إن كوديل ، عالم الأحياء المرضية لبرنامج خدمات الحياة البرية APHIS التابع لوزارة الزراعة الأمريكية في إنديانا في جامعة بوردو ، على تقديم العينات المستخدمة لجمع الديدان الطفيلية لإنتاج هذا الفيديو. أعدت جينيفر سيرافين جميع المحاليل الكيميائية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي > تثبيت < / قوي > | |||
| الكحول - الفورمالين - حمض الخليك (AFA) | فيشر Scientific | A407-1 (الإيثانول) F75F-1GAL (الفورمالديهايد) BP2401500 (حمض الخليك الجليدي) | الإيثانول 85٪ (85 مل) + الفورمالديهايد 37٪ (10 مل) + حمض الخليك الجليدي (5 مل) |
| الإيثانول للقتل والحفظ على المدى الطويل | فيشر Scientific | A407-1 | الإيثانول 100٪ (70 مل) + الماء المقطر (30 مل) |
| الإيثانول للتثبيت ودراسات الحمض | النووي فيشر ساينتفيك | AC61511-0010 | الإيثانول 80-90٪ (80-90 مل) + الماء المقطر (20-10 مل) ، على التوالي |
| الفورمالين المخزن | فيشر Scientific | SF100-4 | الفورمالين 10٪ (10 مل) + الماء المقطر (90 مل) |
| الجلسرين الكحول | فيشر Scientific | A407-1 (الإيثانول) AC15365-1000 (الجلسرين) | إيثانول 70٪ (95 مل) + جلسرين (5 مل) |
| <قوي > تطهير وتلطيخ وتركيب < / قوي > | |||
| إيثانول للتجفيف أثناء تلطيخ | فيشر Scientific | A407-1 | إيثانول 80٪ ، 95٪ ، 100٪ (80 مل ، 95 مل ، 100 مل) + ماء مقطر (20 مل ، 5 مل ، 0 مل) |
| لاكتوفينول | فيشر Scientific | R400-27-فينول | |
| فيشر Scientific | A931I-1 (فينول) A407-1 (إيثانول) فينول | 100٪ (80 مل) + إيثانول 100٪ (20 مل) | |
| هاريس هيماتوكسيلين | فيشر Scientific | S25347 (هيماتوكسيلين) A407-1 (الإيثانول) A567-500 (كبريتات الألومنيوم الأمونيوم) S25553 (يودات الصوديوم) | الهيماتوكسيلين (5 جم) + الإيثانول 100٪ (50 مل) + كبريتات الأمونيوم الألومنيوم (100 جم) + يودات الصوديوم (0.37 جم) + الماء المقطر (1,000 مل) ؛ |
| سيمشون ق قرمزي الخليك | فيشر Scientific | BP2401500 (حمض الخليك الجليدي) S25236 (قرمزي) A407-1 (الإيثانول) حمض | الخليك الجليدي (100 مل) + كارمين (1.5 جم) + ماء مقطر (100 مل). يسخن في حمام مائي مغلي لمدة 15 دقيقة ويبرد. تصفية لعمل محلول المخزون. امزج 1: 2 مع 70٪ كحول للتلطيخ. |
| Xylene | Fisher Scientific | X4-4 | استخدم فقط تحت غطاء الدخان الكيميائي. |
| ميثيل ساليسيلات | فيشر Scientific | S25437-الإيثانول | |
| الأساسي | فيشر Scientific | A407-1 (الإيثانول) S25159A (هيدروكسيد الأمونيوم المركز) | الإيثانول 70٪ (100 مل) + هيدروكسيد الأمونيوم (0.1 مل) حمض |
| الإيثانول | فيشر Scientific | A407-1 (الإيثانول) SA9233-100 (حمض الهيدروكلوريك) | الإيثانول 70٪ (99.5 مل) + حمض الهيدروكلوريك (0.5 مل) |
| كندا بلسم | فيشر العلمي | B10-100 | - |
المراجع
- Atkinson, C. T., Thomas, N. J. Parasitic Diseases of Wild Birds. Hunter, D. B. , John Wiley & Sons, Blackwell Press. Hoboken, New Jersey, USA. (2009).
- Parasitic Diseases of Wild Mammals. Samuel, W. M., Pybus, M. J., Kocan, A. A. , Second Edition, Iowa State University Press. Ames, Iowa, USA. (2001).
- Yamaguti, S. Parts 1 and 2. The Digenetic Trematodes of Vertebrates. Systema Helminthum. I, Interscience Publishers Inc. New York, New York, USA. (1958).
- Yamaguti, S. Synopsis of Digenetic Trematodes of Vertebrates. I and II, Keigaku Publishing Company. Tokyo, Japan. (1971).
- Gibson, D. I., Jones, A., Bray, R. A. Keys to the Trematoda. 1, CAB International Publishing and The Natural History Museum. Wallingford, Oxfordshire, UK. (2002).
- Jones, A., Bray, R. A., Gibson, D. I. Keys to the Trematoda. 2, CAB International Publishing and The Natural History Museum. Wallingford, Oxfordshire, UK. (2005).
- Bray, R. A., Gibson, D. I., Jones, A. Keys to the Trematoda. 3, CAB International Publishing and The Natural History Museum. Wallingford, Oxfordshire, UK. (2008).
- Yamaguti, S. Acanthocephala of Vertebrates. Systema Helminthum. V, Interscience Publishers Inc. New York, New York, USA. (1963).
- Yamaguti, S. The Cestodes of Vertebrates. Systema Helminthum. II, Interscience Publishers Inc. New York, New York, USA. (1959).
- D, G. Keys to the Cestode Parasites of Vertebrates. CRC Handbook of Tapeworm Identification. , CRC Press Inc. Boca Raton, Florida, USA. (1986).
- Khalil, L. F., Jones, A., Bray, R. A. Keys to the Cestode Parasites of Vertebrates. , CAB International Publishing and The Natural History Museum. Wallingford, Oxfordshire, UK. (1994).
- Yamaguti, S. The Nematodes of Vertebrates. Parts 1 and 2. Systema Helminthum. III, Interscience Publishers Inc. New York, New York, USA. (1961).
- Anderson, R. C., Chabaud, A. G., Willmott, S. Keys to the Nematode Parasites of Vertebrates: Archival Volume (Nos). 1-10. , CAB International Publishing and The Natural History Museum. Wallingford, Oxfordshire, UK. (2009).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
