يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

العزلة والثقافة من الخلايا البطانية من الجنينية الدماغ المقدم

15.1K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/51021

⸱

يناير 23, 2014

 , 
1Department of Psychiatry, Harvard Medical School, 2Angiogenesis and Brain Development Laboratory, Division of Basic Neuroscience, McLean Hospital

في هذه المقالة

ملخص

يوضح هذا الفيديو استراتيجية سهلة وموثوقة لإعداد الثقافات نقية من الخلايا البطانية من الدماغ الأمامي الجنينية داخل 10-12 يوما، وسوف يكون من المفيد للبحوث تركز على جوانب كثيرة من الأوعية الدموية الدماغية.

الملخص

الخلايا البطانية المخ الجنينية يمكن أن تكون بمثابة أداة هامة في دراسة الأوعية الدموية والتنمية وعائية عصبية والتفاعلات. شبكات الأوعية الدموية وهما من الدماغ الأمامي الجنينية، حنوني وحول البطينات الدماغية، ومميزة مكانيا ولها أصول مختلفة وأنماط النمو. الخلايا البطانية من شبكات الأوعية الدموية حنوني وحول البطينات الدماغية وفريدة من نوعها ملامح التعبير الجيني ووظائفها. هنا نقدم بروتوكول خطوة بخطوة لعزل والثقافة، والتحقق من السكان نقية من الخلايا البطانية من شبكة الأوعية الدموية المحيطة بالبطين (PVECs) من الدماغ الأمامي الجنينية (الدماغ الانتهائي). في هذا النهج، ومفروم الدماغ الانتهائي خالية من الغشاء حنوني تم الحصول عليها من يوم الجنينية 15 الفئران، يتفاعل مع كولاجيناز / dispase، وفرقت ميكانيكيا في تعليق خلية واحدة. يتم تنقيته PVECs من الايقاف الخلية باستخدام اختيار إيجابية مع الأجسام المضادة anti-CD-31/PECAM-1 مترافق لبلي باستخدام مغناطيسي قويطريقة الانفصال. الخلايا تنقيته يتم تربيتها على الكولاجين 1 الأطباق الثقافة المغلفة في البطانية مستنبت الخلايا حتى تصبح متكدسة ومزيد من subcultured. الحصول PVECs مع هذا البروتوكول المعرض الحصوه والمغزل على شكل الظواهر، كما تصور من قبل على النقيض من المرحلة المجهر الضوئي ومضان المجهري. تأسست نقاء الثقافات PVEC مع علامات الخلايا البطانية. في أيدينا، وهذه الطريقة بشكل موثوق وثابت تعطي السكان نقية من PVECs. وهذا البروتوكول الاستفادة من الدراسات التي تهدف إلى اكتساب رؤى الآلي في الدماغ الأمامي الأوعية الدموية، وفهم التفاعلات PVEC، ومحادثات عبر أنواع الخلايا العصبية مع ويحمل إمكانات هائلة لتكوين الأوعية الدموية العلاجية.

المقدمة

الأوعية الدموية، والخلايا العصبية الهجرة العصبية هي الأحداث الحاسمة في الجهاز العصبي المركزي (CNS) التنمية والإصلاح والتجديد. وقد أظهرت العديد من الدراسات أن الخلايا البطانية أنيقة تحفيز انتشار العصبية والعكس بالعكس من خلال الافراج عن العوامل القابلة للذوبان وعن طريق الاتصال المباشر. وجدنا أنه من الغريب أنه في الغالبية العظمى من هذه الدراسات 1-3، في حين يتم عزل الأسلاف العصبية / الخلايا الجذعية العصبية من المخ الجنينية، وأنها cocultured مع الخلايا البطانية من الدماغ الكبار، الكبار مصادر الأنسجة الأخرى، أو مع خطوط الخلايا البطانية. وهذا قد يكون في جزء منه بسبب الصعوبات التقنية المرتبطة عزل وزراعة السكان نقية من الخلايا البطانية من المخ الجنينية. ومع ذلك، الأوعية الدموية، تكوين الخلايا العصبية، وهجرة الخلايا العصبية هي الأحداث المتزامنة التي تحدث في أوامر من حجم أكثر قوة في الدماغ الجنينية مما كانت عليه في الدماغ الكبار العادي. شبكة الأوعية الدموية المحيطة بالبطين من embryoniج الدماغ الأمامي (الدماغ الانتهائي) تنبع من سفينة تقع ضمن العقد القاعدية منشم ويتطور في شكل التدرج المنظم من بطني لالظهرية لل telencephalon بعد يوم الجنينية 11 (E11) 4،5. هذه الضفيرة من السفن من شبكة الأوعية الدموية المحيطة بالبطين تختلف عن السفن حنوني على أساس أصول والموقع التشريحي، وأنماط النمو، وتنظيم التنموية 4،5. اتجاه الانتشار من الأوعية الدموية المحيطة بالبطين مباريات متدرجة الانحدار العصبية الوراثية عرضية الدماغ الانتهائي. ضمن الدماغ الانتهائي، التدرج الأوعية الدموية المحيطة بالبطين والتدرج من الخلايا العصبية GABA المهاجرة تتداخل بشكل طفيف مكانيا كذلك 6. فيما يتعلق بالتوقيت، التدرج الأوعية الدموية في وقت مبكر من العصبية الوراثية الانحدار والخلايا العصبية GABA التدرج بنحو يوميا. وبالتالي، الخلايا البطانية حول البطينات الدماغية هي مكانيا وزمانيا في وضع جيد لتقديم العظة الحرجة لدعم تكوين الخلايا العصبية والدماغ الانتهائي4،6 هجرة الخلايا العصبية. ولذا، فإن استخدام الخلايا البطانية حول البطينات الدماغية الجنينية في التجارب coculture مع الأسلاف العصبية و / أو الخلايا العصبية تقدم نموذجا أكثر ملاءمة لدراسة التفاعلات الوعائية العصبية وتطوير سبل جديدة لعلاج المرض العصبي أو نقص تروية / إصابات في الدماغ.

فإننا نؤكد على أهمية إزالة الغشاء حنوني، وليس فقط للحد من تلوث الخلايا الظهارية ولكن أيضا لفصل الخلايا البطانية حنوني التي هي جزيئيا ومتميزة وظيفيا من الخلايا البطانية في الأوعية الدموية المحيطة بالبطين شبكة 4،6 (PVECs يطلق تمييزها عن حنوني ECS) . هنا، نحن تصف طريقة التي نستخدمها بشكل روتيني في مختبرنا للحصول على العائد غنية ونقية من PVECs. وتعد هذه الخلايا البطانية من forebrains الجنينية معزولة عن ماوس توقيت الحوامل واحد. أنها يمكن توسيعها، subcultured، وتجميد أسفل بنجاح لاستخدامها في المستقبل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. إعداد الكواشف وحلول

  1. ويتم تزويد الكولاجين من النوع 1 الحل بمثابة محلول مائي في 20 ملي حمض الخليك (~ 100 ملغم بروتين / قارورة): طلاء من 35 مم طبق الثقافة. تمييع حجم مناسب من حل الكولاجين لتركيز العمل من 0.01٪ باستخدام زراعة الأنسجة المعقمة للمياه الصف. أطباق معطف مع 1 مل من محلول الكولاجين لمدة 3-4 ساعة في درجة حرارة الغرفة (RT) أو 37 درجة مئوية، أو بين عشية وضحاها في 2-8 درجة مئوية. إزالة الزائدة حل من الطبق المغلفة واتركه حتى يجف بين عشية وضحاها. شطف الطبق مع الماء زراعة الأنسجة الصف أو برنامج تلفزيوني قبل إضافة وسائل الإعلام. ويمكن تخزين الأطباق المغلفة في 4 درجة مئوية لمدة شهر واحد.
  2. إعداد كاملة Dulbecco لتعديل النسر متوسطة (DMEM). تكملة DMEM (500 مل) مع 10٪ FBS وحل المضادات الحيوية مضاد فطري (تركيز 1X؛ ml/100 1 مل). DMEM كاملة يمكن تخزينها في 4 درجة مئوية لمدة شهرين.
  3. إعداد قسامة (50 مل) من DMEM مع الدناز الأول (0.001 ملغ / مل)، (ويشار إلى DMEM-الدناز الأول).
  4. إعداد قسامة آخر (10 مل) من DMEM مع كولاجيناز وdispase (1 ملغ / مل) (ويشار إلى DMEM-collagenase/dispase).
  5. إعداد الخلايا البطانية الثقافة المتوسطة (ECCM، 500 مل)، على أن تستكمل مع EGF (5 ميكروغرام)، رسم القلب (100 ملغ) و 5 ميكرولتر من محلول مضاد فطري للمضادات الحيوية. ECCM يمكن تخزينها في 4 درجة مئوية لمدة شهرين.
  6. Prewarm جميع وسائل الإعلام قبل الاستخدام.
  7. إعداد تنقية العازلة: برنامج تلفزيوني، ودرجة الحموضة 7.2 مع 0.5٪ BSA و 2 ملي EDTA. إبقاء العازلة الباردة (2-8 درجة مئوية).

2. إزالة الأجنة وتشريح الدماغ الانتهائي

تمت الموافقة على جميع التجارب باستخدام الحيوانات المختبرية بواسطة رعاية الحيوان واستخدام لجان من مستشفى ماكلين وتتفق مع المبادئ التوجيهية المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية.

  1. استخدام توقيت الفئران CD1 الحوامل (اليوم الجنينية 15). ويعتبر اليوم من اكتشاف المكونات المهبلية اليوم الجنينية 0 (E0). السدود CD1 تنتج عادة الفضلات كبيرة، لذلك الجنين 10-12ويتوقع من سد الحوامل ق.
  2. لبضع الرحم، تخدير الفئران الحوامل مع حقنة داخل الصفاق من الكيتامين (100 ملغ / كلغ) / زيلازين (5 ملغ / كلغ). بالنسبة للفئران حوالي 20-30 غرام، تقديم 0.3 مل من محلول مخدر 10 مل / كغ الكيتامين / زيلازين والتأكد من أن الألم والضيق هو الحد الأدنى أثناء الحقن داخل الصفاق من تأثير المخدر. استخدام اليد لضبط النفس الحقن.
  3. تحقق التخدير العميق عن طريق قرصة أخمص قدميه. ازالة الأجنة من الفئران تخدير عميق. قطع رأس كل جنين فور إزالة من الأم. وضع رؤساء الجنينية في أطباق بتري معقمة في الجليد الباردة PBS.
  4. متابعة استئصال الرحم عن طريق القتل الرحيم مع جرعة زائدة من مخدر فوري (130 ملغ / كغ بنتوباربيتال، والملكية الفكرية)، وهي طريقة للقتل الرحيم، وهو ما يتسق مع المبادئ التوجيهية اخر احصاء للالقتل الرحيم للحيوانات: 2013 الطبعة.
  5. تحت المجهر ستيريو، وإزالة المخ من الرأس مع مقص microtip غرامة وملقط غرامة. ملاحظة: A تشريح عالية الجودةأيون هو ضروري لإزالة الغشاء حنوني بنجاح من المخ الجنينية. ويتحقق ذلك عن طريق الممارسة. ملقط غرامة ومقص microtip هي أيضا الأدوات الرئيسية من أجل الحصول على تشريح جيدة.
  6. استخدام ملقط للحصول على احكام قبضتهم على الدماغ ومقص microtip لقشر بعيدا الغشاء حنوني. إزالة الدماغ المتوسط ​​والدماغ التالي وعزل لل telencephalon. نقل مجانية حنوني-الدماغ الانتهائي من جميع الأجنة إلى صحن الثقافة 35 ملم مع 2 مل PBS في الجليد.

3. عزل الخلايا

  1. تخطر لل telencephalon إلى 1-2 ملم شظايا بشفرة المشرط وجمع الأنسجة في 15 مل فالكون أنبوب يحتوي على 2 مل من DMEM كاملة.
  2. فصل الأنسجة بلطف ولكن بدقة مع ماصة 1 مل حتى كتل تختفي ويتم التوصل إلى وقف حليبي.
  3. الطرد المركزي الخلايا في فصل 800-1،000 x ج لمدة 5 دقائق في RT.
  4. إزالة بعناية طاف و resuspend بيليه في DMEM الدناز أولا بلطف يفرق بين مLLS مرة أخرى باستخدام ماصة 1 مل وأجهزة الطرد المركزي في 800-1،000 x ج لمدة 5 دقائق على RT.
  5. resuspend الكرية في DMEM كاملة الدافئة. تصفية الخلايا من خلال العقيمة 70 ميكرومتر شبكة النايلون. جمع الخلايا التي تمت تصفيتها والاحتفاظ بها في الجليد.
  6. جمع أجزاء الخلية، احتفظت على شبكة وهضم المزيد مع DMEM-collagenase/dispase (2 مل) لمدة 1-2 دقيقة في RT. غسل الخلايا 3X في DMEM الدناز أنا من خلال الطرد المركزي في 800-1،000 x ج لمدة 5 دقائق على RT. تجمع هذه الخلايا مع الخلايا التي تمت تصفيتها جمعها في الخطوة 3.5. غسل خلايا مرة واحدة مع مجموعه كاملة DMEM. المضي قدما لتحديد عدد الخلايا وخطوات وضع العلامات المغناطيسي. ملاحظة: من المهم الحصول على تعليق خلية واحدة قبل وضع العلامات المغناطيسي.

4. وصفها المغناطيسي

  1. يظهر هذا البروتوكول وصفها المغناطيسي من 10 7 الخلايا. لأرقام الخلية أقل من 10 7، استخدام نفس حجم الكاشف وللأرقام الخلية أكبر من 10 7، زيادة كافة وحدات التخزين وكاشف إجمالي حجموفقا لذلك (على سبيل المثال ل2 × 10 7 مجموع الخلايا، استخدم مرتين حجم كل الكواشف المشار إليها). إبقاء كل الكواشف والخلايا في الجليد.
  2. تحديد عدد الخلايا مع عدادة الكريات.
  3. تعليق خلية الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 10 دقيقة في RT. نضح طاف تماما.
  4. إضافة 90 μl/10 7 خلايا العازلة تنقية لبيليه الخلية تليها 10 ميكرولتر من بلي CD31. ومترافق وبلي المقدمة من قبل الشركة المصنعة لوحيدة النسيلة المضادة للماوس CD31 الأجسام المضادة.
  5. تخلط جيدا واحتضان لمدة 15 دقيقة في الثلاجة. ملاحظة: ارتفاع درجات الحرارة و / أو أطول فترة حضانة خلال وضع العلامات المغناطيسي قد يؤدي إلى الربط غير محددة.
  6. غسل الخلايا بإضافة 1-2 ml/10 7 خلايا العازلة تنقية وأجهزة الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 10 دقيقة. إزالة الخلايا وطاف resuspend في 500 ميكرولتر من العازلة تنقية. انتقل إلى الفصل المغناطيسي أو خطوة التنقية.

5. بوrification

  1. وضع العمود MS في المجال المغناطيسي للفاصل MACS.
  2. شطف العمود مع 500 ميكرولتر من العازلة تنقية.
  3. تنطبق على تعليق خلية العمود. تحميل عدد مناسب من الخلايا إلى العمود MS عن ارتفاع عدد الخلايا قد تسد العمود. تحذير: كل عمود MS يمكن أن تستوعب أكبر عدد ممكن من 2 × 10 7 خلايا، وذلك لعدد الخلايا أعلى، واستخدام أكثر من الأعمدة.
  4. جمع وتجاهل التدفق من خلال الخلايا التي تحتوي على أونلبلد.
  5. غسل العمود مع 500 ميكرولتر من العازلة تنقية ثلاث مرات. خلال خطوات الغسيل، تأكد من أن خزان العمود فارغة قبل إضافة اللاحقة مأخوذة العازلة تنقية.
  6. إزالة عمود من فاصل MACS ووضعه على أنبوب فالكون 15 مل.
  7. ويتم تزويد المكبس مع عمود MS. ماصة 1 مل من العازلة تنقية على عمود MS وعلى الفور طرد الخلايا المسمى مغناطيسيا عن طريق دفع المكبس بقوة في العمود.
  8. لوحة سلليرة سورية على طبق ثقافة 35 مم precoated مع الكولاجين من النوع 1 وتنمو الخلايا في ECCM في حاضنة تعيين إلى 37 درجة مئوية مع 95٪ O 2 و 5٪ CO 2.
  9. تغيير المتوسطة كل أربعة أيام. استخدام PVECs للتجارب أو ثقافة فرعية بعد 10-12 يوما عندما طبق هو متموجة.

6. ثقافة فرعية من PV ECS

  1. إزالة ECCM وشطف أحادي الطبقة من PVECS مع 1-2 مل من برنامج تلفزيوني العقيمة.
  2. بلطف إضافة 1.5 مل من 0.25٪ التربسين EDTA-حل لتغطية أحادي الطبقة الخلية.
  3. العودة الطبق إلى الحاضنة. في غضون 5-7 دقائق، وفصل الخلايا من سطح الطبق.
  4. بعد أن فصل الخلايا، إضافة على الفور حجم مساو من مثبط التربسين ويسحن عدة مرات.
  5. نقل الخلايا إلى أنبوب العقيمة 15 مل فالكون. أجهزة الطرد المركزي في أنبوب في 500 x ج لمدة 5 دقائق.
  6. إزالة طاف و resuspend بيليه في 1 مل من prewarmed ECCM.
  7. بذر خلايا لتوسيع الثقافة، والتراسل الفوريالشيخوخة أو فحوصات أخرى.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يظهر توصيف المظهري من PVECs من يوم 1-12 خلال المرحلة على النقيض المجهر الضوئي (الشكل 2). الخلايا تعلق على طبق في يوم 1 عرض التشكل سمة من انقسام الخلايا (الشكل 2A). بين 5-8 أيام، PVECs الانتقال من المرصوفة بالحجارة لالمغزل التشكل على شكل نموذجي للخلايا البطانية وأقرب إلى الجسم الحي في الدولة (أرقام 2B و 2C). بعد يوم 12 ثقافة PVEC يحقق التقاء الكامل (الشكل 2D). PVECs يمكن subcultured بسهولة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في PVEC هي أكثر أهمية من الناحية الفسيولوجية من الخلايا البطانية الكبار الدماغ وECS من مصادر الأنسجة الأخرى للدراسات تركز على التفاعلات الوعائية العصبية وأيضا لديها الإمكانات العلاجية. لإعداد PVEC، فمن بداية حاسمة مع تشريح للعمل بسرعة لتحقيق الجدوى جيدة منذ الخلايا الميتة قد ربط nonspecifically لبلي CD31. بالإضافة إلى ذلك، إذا لم يتحقق تعليق خلية واحدة قبل الخطوة وضع العلامات المغناطيسي، وهذا سوف يؤدي إلى استكشاف الأخطاء وإصلاحها منذ كتل الخلايا سوف تسد العمود. ميزة هذا الأسلوب هو...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

أعلن عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

وأيد هذا العمل من قبل التحالف الوطني لأبحاث الفصام والاكتئاب (NARSAD) جائزة الباحث الشاب والمعاهد الوطنية للصحة منح R01NS073635 لAV.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
DNase ISigmaD-4527  ;
الكولاجين ، محلول النوع 1 من ذيل الفئران   ؛سيجماC3867  ؛
DPBSالجودة البيولوجية114057-131 
EDTAفيشر العلميM4055 
BSASigmaA2058 
MS العمودMiltenyi Biotech130-042-201 
CD31 microbeadsMiltenyi Biotech130-097-418 
MACSMiltenyi Biotech130-042-102 
ماك متعدد الحاملMiltenyi Biotech130-042-303 
مصفاة الخلية 70 & micro; مدكتوراه في العلوم البيولوجية352350 
محلول مضاد حيوي ومضاد للفطرياتSigmaA5955  ؛
FBSSigmaF4135 
كولاجيناز/ديسبازروش10269638001 
DMEM Lonza12-604F 
35 ملم صحن ثقافةBD Bioscience353001 
15 مل أنبوب فالكون  BD Bioscience352097 
50 مل أنبوب فالكونBD Bioscience352098 
مجموعة ECCMBioscience355054Kit تشمل مكمل نمو الخلايا البطانية ، EGF ، ومثبط فول الصويا
لنمو الخلايا البطانية (ECGS) BDBioscience354006 
تطبيقات خليةRBECGMR819-500  ؛
DMEM F12  لايفتكنولوجيز 10565-018 
GlutaMAXLife Technologies305050-061 
الأنسجة الصف المياهتقنيات الحياة15230162 
0.25٪ TrypsinLife Technologies15050 
مثبط فول الصويا التربسينBD Bioscience5425 
MatrigelBD Bioscience354234 
Qtracker 655 مجموعة وضع العلامات على الخلاياLife TechnologiesQ25021 
غشاء البلازما CellLight- RFP ، BacMam 2.0Life TechnologiesC10608  ؛
البيوتينيل إيسولكتين B4 الجسم المضادسيجماL2140  ؛
عامل مكافحة فون ويلبراندسيجماF3520  ؛
Anti-CD31 / PECAM-1BD Pharmingen550274 
وسائط تركيب VECTASHIELD الصلبة معمختبراتH-1500  ؛
الكيتامينبتلر شاين توريد صحة44028 
مختبراتزيلازين1009 
مجهرمجسم موتيكSMZ-168  ;
مقياس الدمFisher Scientific267110 
المجهر المقلوبأوليمبوس CK-40CK-40 
مجهر الفلورسنتأوليمبوس FSX-100FSX-100 
ملقط دقيقRoboz SurgicalInstrument 7 inox 
مقص دقيقRoboz Surgical InstrumentRS5611  ؛
فاصل BD زراعة DAPI Vector لويد دقيق

المراجع

  1. Shen, Q., S, G., et al. Endothelial cells stimulate self-renewal and expand neurogenesis of neural stem cells. Science. 304, 1338-1340 (2004).
  2. Milner, R. A novel three-dimensional system to study interactions between endothelial cells and neural cells of the developing central nervous system. BMC Neurosci. 8, 3 (2007).
  3. Rauch, M. F., Michaud, M., Xu, H., Madri, J. A., Lavik, E. B. Co-culture of primary neural progenitor and endothelial cells in a macroporous gel promotes stable vascular networks in vivo. 19, 1469-1485 (2008).
  4. Vasudevan, A., Long, J. E., Crandall, J. E., Rubenstein, J. L., Bhide, P. G. Compartment-specific transcription factors orchestrate angiogenesis gradients in the embryonic brain. Nat. Neurosci. 11, 429-439 (2008).
  5. Vasudevan, A., Bhide, P. G. Angiogenesis in the embryonic CNS: a new twist on an old tale. Cell Adh. Migr. 2, 167-169 (2008).
  6. Won, C. K., et al. Autonomous vascular networks synchronize GABA neuron migration in the embryonic forebrain. Nat. Commun. 4, 2149-2162 (2013).
  7. Dong, Q. G., et al. A general strategy for isolation of endothelial cells from murine tissues. Characterization of two endothelial cell lines from the murine lung and subcutaneous sponge implants. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 17, 1599-1604 (1997).
  8. Erblich, B., Zhu, L., Etgen, A. M., Dobrenis, K., Pollard, J. W. Absence of colony stimulation factor-1 receptor results in loss of microglia, disrupted brain development and olfactory deficits. PLoS One. 6, (2011).
  9. Wichterle, H., Garcia-Verdugo, J. M., Herrera, D. G., Alvarez-Buylla, A. Young neurons from medial ganglionic eminence disperse in adult and embryonic brain. 2, 461-466 (1999).
  10. Snapyan, M., et al. Vasculature guides migrating neuronal precursors in the adult mammalian forebrain via brain-derived neurotrophic factor signaling. J. Neurosci. 29, 4172-4188 (2009).
  11. Whitman, M. C., Fan, W., Rela, L., Rodriguez-Gil, D. J., Greer, C. A. Blood vessels form a migratory scaffold in the rostral migratory stream. J. Comp. Neurol. 516, 94-104 (2009).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

CD31
العزلة والثقافة من الخلايا البطانية من الجنينية الدماغ المقدم
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.