يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

مضان

23.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/51030

⸱

فبراير 24, 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Entomology, Volcani Center, 2Institute of Plant Sciences and Genetics in Agriculture, Robert H. Smith Faculty of Agriculture, Food and Environment, Hebrew University of Jerusalem, 3Department of Applied Sciences, Institute for Adriatic Crops and Karst Reclamation, 4The Institute of Plant Sciences, Volcani Center

في هذه المقالة

ملخص

نحن هنا وصف بسيط مضان التهجين في الموضع (FISH) طريقة لتوطين الفيروسات والبكتيريا في أنسجة الحشرات والنبات. ويمكن تمديد هذا البروتوكول لتصور مرنا في جبل بأكمله والمقاطع المجهرية.

الملخص

مضان التهجين في الموقع (FISH) في هو الاسم الذي يطلق على مجموعة متنوعة من التقنيات التي تستخدم عادة لتصور النصوص الجينات في الخلايا حقيقية النواة ويمكن تعديل أخرى لتصور المكونات الأخرى في الخلية مثل العدوى الناجمة عن فيروسات والبكتيريا. توطين المكاني والتصور من الفيروسات والبكتيريا أثناء عملية العدوى هو خطوة أساسية أن يكمل التعبير التنميط التجارب مثل ميكروأرس وRNAseq استجابة لمحفزات مختلفة. فهم التهابات الزمانية المكانية مع هذه العوامل تكمل التجارب البيولوجية التي تهدف إلى فهم تفاعلها مع المكونات الخلوية. العديد من التقنيات لتصور الفيروسات والبكتيريا مثل نظم الجين المراسل أو أساليب المناعى هي مضيعة للوقت، وبعض تقتصر على العمل مع الكائنات نموذج وتنطوي منهجيات معقدة. FISH الذي يستهدف الأنواع الحمض النووي الريبي DNA أو في الخلية هو لي سهلة نسبيا وسريعةثود لدراسة توطين الزمانية المكانية من الجينات ولأغراض التشخيص. هذا الأسلوب يمكن أن تكون قوية وسهلة نسبيا لتنفيذ عندما تستخدم البروتوكولات التهجين قصيرة، تحقيقات شراؤها تجاريا، والتي هي ليست مكلفة. هذا هو قوي ولا سيما عندما إعداد العينات، والتثبيت، والتهجين، والتصور المجهرية لا تنطوي الخطوات المعقدة. نحن هنا وصف بروتوكول للتوطين البكتيريا والفيروسات في أنسجة الحشرات والنبات. وتستند هذه الطريقة على إعداد بسيطة، التثبيت، وتهجين يتصاعد كله الحشرات وأجهزة تشريح أو أقسام المصنع المصنوعة يدويا، مع 20 زوجا قاعدة تحقيقات الحمض النووي قصيرة مترافق إلى الأصباغ الفلورية على هم 5 'أو 3' ينتهي. وقد تم تطبيق هذا البروتوكول بنجاح لعدد من أنسجة الحشرات والنباتات، ويمكن استخدامها لتحليل التعبير عن mRNAs وأو الأنواع الحمض النووي الريبي DNA أو أخرى في الخلية.

المقدمة

عند دراسة التفاعلات بين الفيروسات النباتية ومسببات الأمراض الأخرى مع المضيفين النباتية المصابة، فمن المهم أن تصور مسببات الأمراض والأحماض النووية الخاصة بها في الموقع، بغض النظر عما إذا كانت تتسبب في آثار سلبية على مضيفيهم. وهذا هو الأكثر أهمية عند دراسة حركة الممرض داخل وبين الخلايا النباتية. في توطين الموضع من المنتجات الجينات من مسببات المرض هو الخطوة الأساسية التي يكمل نهج أخرى لدراسة عملية المرضية. العديد من مسببات الأمراض النباتية، وخاصة الفيروسات، وتنتقل عن طريق الحشرات، بعد أن التفاعلات المعقدة والحميمة مع ناقلاتها. توطين هذه الفيروسات في ناقلاتها المهم لدراسة مسار انتقال، ومواقع التفاعل ممكن داخل النواقل. وساعد انتقال بعض الفيروسات النباتية تنقلها الحشرات، عن طريق البكتيريا الموجودة داخل endosymbiotic هذه الحشرات. لدراسة أفضل من انتقال هذه الفيروسات النباتية بذ ناقلات بهم، بل هو أيضا ضروري لتصور البكتيريا endosymbiotic بشكل عام، والذين يشاركون في انتقال الفيروس، على وجه الخصوص. وبالتالي المطلوب Colocalization من الفيروسات والبكتيريا endosymbiotic للتحقيق في العلاقات الممكنة بين هذه الكائنات الحية داخل المضيفة الحشرات. وبصرف النظر عن انتقال الفيروس والبكتيريا endosymbiotic تؤثر عدة جوانب بيولوجيا الحشرات الناقلة للأمراض، وبالتالي توطين المكاني لهذه البكتيريا داخل الحشرات هي من الفائدة المرتفعة وأهميتها.

الطماطم ورقة صفراء حليقة فيروس (TYLCV) (Begomovirus، Geminiviridae) هو مرض فيروسي المعقدة أهم من الطماطم المزروعة في جميع أنحاء العالم 1-4. TYLCV هو فيروس محدودة اللحاء وتنقلها حصريا من قبل الذبابة البيضاء Bemisia الذبابة البيضاء 5،6. وقد تم اقتراح نموذج يصف إزفاء من begomoviruses في ناقلاتها الذبابة البيضاء 6-9. وعبرت حاجزين محددة بنشاط الدرجي هذا الإرسال circulative: المعي المتوسط ​​/ الدملمف والحواجز الغدة الدملمف / اللعابية. هو الافتراض هذه العملية إحالته إلى أن بوساطة مستقبلات مجهولة التي تعترف قفيصة الفيروس. ويعتقد TYLCV لعبور B. يمتص المعي المتوسط ​​6،10 الذبابة البيضاء، وذلك من خلال الغدة اللعابية الابتدائي 6 قبل أن يتم حقنه في المصنع. في الدملمف الذبابة البيضاء، يتفاعل مع بروتين TYLCV GroEL التي تنتجها الحشرات الثانوية endosymbiotic بكتيريا Hamiltonella. يضمن هذا التفاعل النقل الآمن للTYLCV في الدملمف، ويحميها من هجوم من قبل النظام المناعي الحشرات 11. Hamiltonella وPortiera، ومعايش جواني الابتدائي من الذباب الأبيض، ويعيش في bacteriocytes، خلايا الحشرات وجدت في الدملمف وendosymbiotic منزل البكتيريا 11. B. الذبابة البيضاء تؤوي البكتيريا endosymbiotic إضافية بما في ذلك الريكتسية، Arsenophonus، الولبخية، وفريتشعصام، والتي يمكن أن تكون مترجمة داخل bacteriocytes أو خارجها، ولها تأثيرات متنوعة على البيولوجيا الحشرة 12.

وقد حاول العديد من التقارير لدراسة توطين TYLCV في النباتات والذباب الأبيض باستخدام بروتوكولات تستغرق وقتا طويلا ومكلفة مثل نقل المجهر الإلكتروني (TEM)، والأجسام المضادة والحمض النووي الريبي في الموقع في قسم سميكة المجهرية 10،13، وصفت دراسة حديثة للتوطين من الفيروسات النباتية داخل المصنع وناقلات مضيفيهم باستخدام بروتوكول بسيطة 14. نحن هنا وصف بروتوكول بسيطة لتوطين TYLCV في B. تشريح الذبابة البيضاء midguts والغدد اللعابية، وأقسام المحضرة من النباتات TYLCV المصابة. وصفنا كذلك توطين Portiera، ومعايش جواني الرئيسي للB. الذبابة البيضاء، وendosymbionts الثانوية في Hamitonella، الريكتسية وArsenophonus. ويستند هذا البروتوكول على استخدام الحمض النووي تحقيقات قصيرة، أنوfluorescently المسمى على هم 'نهاية 5، وهجن خصيصا لتسلسل تكميلية في تسلسل الجينات الفيروسية أو البكتيرية. تجهيز عينة من السهل نسبيا وإشارة حصلنا عليها محددة للغاية. بروتوكول وصف يمكن استخدامها لتوطين الفيروسات والبكتيريا ومسببات الأمراض الأخرى في المضيفين النبات والحيوان والحشرات، ويمكن وأن تستخدم أيضا للتوطين مرنا في أي نسيج معين.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. التحضيرات العامة الذبابة البيضاء، النبات، وفيروسات لتحليل FISH

  1. الخلفية B وس الذباب الأبيض نمط حيوي على شتلات القطن (القطن المكسيكي L. السيرة الذاتية. اكالا) والحفاظ على داخل أقفاص واقية من الحشرات وغرف النمو تحت الظروف القياسية من 25 ± 2 درجة مئوية، والرطوبة النسبية 60٪، وضوء 14 ساعة / 10 ساعة الإضاءة المظلمة.
  2. أداء PCR لاختبار الإصابة بفيروس endosymbionts باستخدام بادئات معايش جواني محددة كما هو موضح سابقا 15-19.
  3. شراء شتلات الطماطم (مغد اسكولينتوم السيرة الذاتية. بفتيك) من الحضانة تجارية أو بذور الطماطم النبات.
  4. المحافظة تحت نفس الظروف المذكورة أعلاه حتى تربية النباتات تصل إلى مرحلة الحقيقية أوراق الأربعة، سن الأكثر ملاءمة لبوساطة الذبابة البيضاء تلقيح TYLCV 15 (انظر القسم 4.1 أدناه).

2. التعامل مع الحشرات، تثبيت، دقق تصميم والتهجين، والتصور لإندوالمتكافل FISH

  1. جمع 10 الذباب الأبيض الكبار بحلول تطلع من نباتات القطن، أو اختيار 10 3 أو 4 الثالثة عشر حوريات الطور من أوراق القطن.
  2. تزج فورا في تثبيتي كاروني في (حمض كلوروفورم الايثانول الجليدية الخليك، 06:03:01، المجلد / المجلد) داخل أنابيب إيبندورف. إصلاح لمدة 2 ساعة ليلة وضحاها (ويفضل بين عشية وضحاها).
  3. تماما إزالة تثبيتي، ويزيل اللون في 6٪ H 2 O 2 في الإيثانول لمدة 2 ساعة.
  4. الحفاظ على العينات في الايثانول المطلق لعدة أيام إلى عدة أسابيع في درجة حرارة الغرفة، أو انتقل إلى الخطوة التالية.
  5. تحقيقات تصميم الاشعال الحمض النووي عكس مكملة على أساس الجينات 16S الرنا الريباسي من كل البكتيريا. لتصميم تحقيقات، تأخذ في الحسبان الاعتبارات نفسها لتصميم بادئات PCR. استخدام تحقيقات نيوكليوتيدات دقيقة BTP1 5'-Cy5-TGTCAGTGTCAGCCCAGAAG-3 '، RB1 5'-CY3-TCCACGTCGCCGTCTTGC-3'، BTH 5'-CY3-CCAGATTCCCAGACTTTACTCA-3 'وArs2 5'-CY3-TCATGACCACAACCTCCAAA-3 'لاستهداف محددة من Portiera، الريكتسية، Hamilonella، وArsenophonus، على التوالي.
  6. هجن عينات بين عشية وضحاها في الظلام في المنطقة العازلة التهجين (20 ملي تريس، حمض الهيدروكلوريك، ودرجة الحموضة 8.0، 0.9 M كلوريد الصوديوم، 0.01٪ [بالوزن / المجلد] كبريتات الصوديوم دوديسيل، و 30٪ [المجلد / المجلد] الفورماميد) تحتوي على 10 بمول التحقيق الفلورسنت لكل مل . الجمع بين التحقيق أكثر من واحد مع الأصباغ الفلورية مختلفة إذا لزم الأمر. استخدام الذباب الأبيض غير مصاب ببكتيريا المستهدفة وعينات لا مسبار الضوابط سلبية.
  7. جبل العينات كلها، على شريحة المجهر، في التهجين العازلة الواردة مع مانع السائل، وتغطي مع انزلاق الغطاء، وختم بطلاء الأظافر، وعرض تحت المجهر مضان أو متحد البؤر.

3. الذبابة البيضاء تشريح الجهاز، تثبيت، التهجين، والتصور للTYLCV FISH

  1. جمع الذباب الأبيض الكبار تربى بشكل مستمر على نباتات الطماطم TYLCV المصابة بواسطة الطموح وانوsthetize عن التعرض لمنشفة ورقية مشربة مع الأسيتون. فضح الذباب الأبيض فقط لمدة 1-2 دقيقة عن التعرض طويلا لالأسيتون يمكن إصلاح الأنسجة الذباب الأبيض. استخدام الذباب الأبيض nonviruliferous تربى على نباتات الطماطم غير مصاب ولا عينات التحقيق لضوابط محددة لتأكيد التهجين.
  2. الذباب الأبيض على جبل المجهر الاكتئاب الشرائح للتشريح الجهاز باستخدام مجهر ستيريو.
  3. سحب بعيدا الرأس حشرة من قبل الصدر وتشريح الغدد اللعابية في برنامج تلفزيوني 1X تستكمل مع 1٪ طولويدين صمة عار الأزرق لأفضل التصور، نظرا لصغر حجمها. تسمح امتصاص وصمة عار لمدة 2-3 دقيقة.
  4. سحب الحشرات وبصرف النظر في هذا المنعطف بين الصدر والبطن لمراقبة وطرد خارج المعى المتوسط. طرد محتويات البطن عن طريق دفع مع ملقط على الطرف البطن.
  5. بلطف إزالة برنامج تلفزيوني وطولويدين الأزرق من تشريح ناجحة وإضافة بلطف 300 ميكرولتر من تثبيتي كاروني لإصلاح الأجهزة لمدة 5 دقائق.
  6. Aدد تثبيتي من جانب واحد من البئر الاكتئاب وليس من أعلى لمنع حركة غير المنضبط للأجهزة تشريح. مرة واحدة لمس تثبيتي، فإن أجهزة التمسك الزجاج، وطوال العملية فإنها لن تتحرك.
  7. إزالة تثبيتي، وإضافة 500 ميكرولتر من العازلة التهجين تستكمل مع 10 بمول من الحمض النووي التحقيق الفلورسنت Cy5-5'-GGAACATCAGGGCTTCGATA-3 '، التي هي مكملة لسلسلة البروتين في TYLCV معطف الجينات.
  8. هجن بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة في الظلام التي يحتضنها الشريحة مع العينة داخل غرفة رطبة صغيرة تتألف من مربع صغير من البلاستيك مع ورقة منشفة مبللة في القاع.
  9. بعد التهجين، والتقاط أجهزة بأداة تشريح غرامة وبسرعة نقلها إلى شريحة المجهر الطازجة التي تحتوي على 30 ميكرولتر من العازلة التهجين جديدة تستكمل مع دابي (0.1 ملغ / مل في برنامج تلفزيوني 1X) والواردة مع مانع السائل.
  10. تغطية العينات مع انزلاق الغطاء، وختم الطرافةح البولندية الأظافر وعرض تحت المجهر مضان أو متحد البؤر.

4. التعامل مع النبات، وباليد باجتزاء، التثبيت، وتهجين لTYLCV FISH

  1. تطعيم شتلات الطماطم مع TYLCV باستخدام ناقل الفيروس بوساطة الذبابة البيضاء التلقيح. ويمكن الكشف عن الفيروس باستخدام هذا الأسلوب FISH في محطات بلا أعراض أسبوع واحد بعد التطعيم. أعراض المرض نموذجية مرئية ثلاثة أسابيع بعد التلقيح. استخدام نباتات الطماطم غير مصاب ولا عينات التحقيق لضوابط محددة لتأكيد التهجين.
  2. استخدام شفرة حلاقة حادة النسيجي لإعداد المقاطع الطويلة 2-4 سم قطع اليد الطولي أو العرضي الطماطم السيقان والأوراق.
  3. في أنابيب إيبندورف، وتحديد المقاطع في تثبيتي كاروني ل2 ساعة بين عشية وضحاها لفي درجة حرارة الغرفة.
  4. إزالة تثبيتي، والحفاظ على المقاطع في الايثانول المطلق لعدة أيام إلى عدة أسابيع في درجة حرارة الغرفة، أو انتقل إلى الخطوة التالية.
  5. غسل المقاطعثلاث مرات، 1 دقيقة لكل منهما، في المنطقة العازلة التهجين.
  6. هجن المقاطع مع 500 ميكرولتر من العازلة التهجين تستكمل مع 10 بمول من نيوكليوتيدات دقيقة التحقيق الفلورسنت CY3-5'-GGAACATCAGGGCTTCGATA-3 'التي هي مكملة لسلسلة البروتين في TYLCV معطف الجينات.
  7. غسل أقسام ثلاث مرات، 1 دقيقة لكل منهما، في المنطقة العازلة التهجين.
  8. جبل قطاعات كاملة في المنطقة العازلة التهجين تستكمل مع دابي (0.1 ملغ / مل في برنامج تلفزيوني 1X) والواردة مع مانع السائل، مع تغطية ساترة، وختم بطلاء الأظافر وعرض تحت المجهر مضان أو متحد البؤر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

ويرد النظام درس في هذه المخطوطة في الشكل (1) وتشمل مصنع المصابة مع TYLCV، الكبار وحورية من الذبابة البيضاء B. الذبابة البيضاء، والتشريح الداخلي من الذبابة البيضاء التي تبين مسار إزفاء TYLCV في الحشرات. الشكل 2 يوضح FISH مزدوجة في الذبابة البيضاء الكبار لالمتكافل الأولية Portiera والمتكافل الثانوية يظهر Arsenophonus. الشكل 3 FISH مزدوجة لPortiera وHamiltonella، و ويبين الشكل 4 FI...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

بروتوكول الموصوفة هنا لتوطين فيروس مصنع في مصنعها المضيف وناقلات الامراض والحشرات، والبكتيريا endosymbiotic في المضيف الذبابة البيضاء محددة، ويمكن تكييفها لتوطين الفيروسات الأخرى في النباتات وحتى في الأنسجة الحيوانية. وعلاوة على ذلك، فإن بروتوكول يمكن استخدامها لتوطين البكتيريا المسببة للأمراض وendosymbiotic والكائنات الدقيقة الأخرى في النظم النباتية والحيوانية. الأساليب المذكورة تعتمد على مفهوم بسيط من التهجين بين قصيرة، fluorescently المسمى DNA-نيوكليوتيدات دقيقة التحقيق والحمض ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

وأيد البحوث في المختبر بواسطة غانم منحة بحثية لا. 908-42.12/2006 من المؤسسة الألمانية الإسرائيلية (GIF)، منح لا. IS-4062-07 من إسرائيل، الولايات المتحدة الثنائية للصندوق للبحوث الزراعية والتنمية (BARD)، ومنحة بحثية لا. 884/07 من مؤسسة العلوم اسرائيل (ISF) إلى MG

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
موسمى الفلورسنت  مجساتMetabion20 bp HPLC منقىالتسلسل الذي صممه العميل
تولويدين الأزرقسيجما-ألدريتش89640
كبريتات الصوديوم دوديسيلسيجما-ألدريتشL3771علم الأحياء الجزيئي الصف
فورماميدسيجما-ألدريتشF9037درجة البيولوجيا الجزيئية
Tris-HClسيجما-ألدريتشT5941درجة البيولوجيا الجزيئية
حمض الخليك الجليديسيجما ألدريتش320099الجزيئية الصف
السوائلتيد بيلا Inc.هاتف: 22309
البيولوجيا مانع

المراجع

  1. Czosnek, H., Laterrot, H. A worldwide survey of Tomato yellow leaf curl viruses. Arch. Virol. 142, 1391-1406 (1997).
  2. Ling, K. S., Simmons, A. M., Hassell, R. L., Keinath, A. P., Polston, J. E. First report of Tomato Yellow Leaf Curl Virus in South Carolina. Plant Dis. 90, 379 (2006).
  3. Polston, J. E., McGovern, R. J., Brown, L. G. Introduction of Tomato yellow leaf curl virus in Florida and implications for the spread of this and other geminiviruses of tomato. Plant Dis. 83, 984-988 (1999).
  4. Polston, J. E., Rosebrock, T. R., Sherwood, T., Creswell, T., Shoemaker, P. J. Appearance of Tomato yellow leaf curl virus in North Carolina. Plant Dis. 86, 73 (2002).
  5. Frohlich, D. R., Torres-Jerez, I., Bedford, I. D., Markham, P. G., Brown, J. K. A phylogeographical analysis of the Bemisia tabaci species complex based on mitochondrial DNA markers. Mol. Ecol. 8, 1683-1691 (2002).
  6. Ghanim, M., Morin, S., Czosnek, H. Rate of Tomato yellow leaf curl virus translocation in the circulative transmission pathway of its vector, the whitefly Bemisia tabaci. Phytopathology. 91, 188-196 (2001).
  7. Ghanim, M., Rosell, R. C., Campbell, L. R., Czosnek, H., Brown, J. K., Ullman, D. E. Digestive salivary and reproductive organs of Bemisia tabaci (Gennadius) Hemiptera: Aleyrodidae) B type. J. Morphol. 248, 22-40 (2001).
  8. Hunter, W. B., Hiebert, E., Webb, S. E., Tsai, J. K., Polston, J. E. Location of geminiviruses in the whitefly Bemisia tabaci (Homoptera: Aleyrodidae). Plant Dis. 82, 1147-1151 (1998).
  9. Rosell, R. C., Torres-Jerez, I., Brown, J. K. Temporal pathway of geminivirus in whitefly extracts, saliva, hemolymph and honeydew. Phytopathology. 89, 239-246 (1999).
  10. Czosnek, H., Ghanim, M., Ghanim, M. The circulative pathway of begomoviruses in the whitefly vector Bemisia tabaci—insights from studies with Tomato yellow leaf curl virus. Ann. Appl. Biol. 140, 215-231 (2002).
  11. Gottlieb, Y., et al. The transmission efficiency of Tomato yellow leaf curl virusby the whitefly Bemisiatabaciis correlated with the presence of aspecificsymbiotic bacterium species. J. Virol. 84, 9310-9317 (2010).
  12. Brumin, M., Levy, M., Ghanim, M. Transovarial transmission of Rickettsia spp. and organ-specific infection of the whitefly Bemisia tabaci. Appl. Environ. Microbiol. 78, 5565-5574 (2012).
  13. Ghanim, M., Medina, V. Localization of Tomato yellow leaf curl virus in its whitefly vector Bemisia tabaci. In Tomato Yellow Leaf Curl Virus Disease, Management, Molecular Biology, Breeding for Resistance. Czosnek, H. , Springer. New York. 175-187 (2007).
  14. Ghanim, M., Brumin, M., Popovski, S. A simple, rapid and inexpensive method for localization of Tomato yellow leaf curl virus and Potato leafroll virus in plant and insect vectors. J. Virol. Methods. 159, 311-314 (2009).
  15. Gotz, M., et al. Implication of Bemisia tabaci heat shock protein 70 in Begomovirus-whitefly interactions. J. Virol. 86, 13241-13252 (2012).
  16. Nirgianaki, A., et al. Wolbachia infections of the whitefly Bemisia tabaci. Curr. Microbiol. 47, 93-101 (2003).
  17. Baumann, P. Biology of bacteriocyte-associated endosymbionts of plant sap-sucking insects. Ann. Rev. Microbiol. 59, 155-189 (2005).
  18. Gottlieb, Y., et al. Identification and localization of a Rickettsia sp. in Bemisia tabaci (Homoptera) Aleyrodidae). App. Environ. Microbiol. 72, 3646-3652 (2006).
  19. Li, Z. X., Lin, H. Z., Guo, X. P. Prevalence of Wolbachia infection in Bemisia tabaci. Curr. Microbiol. 54, 467-471 (2007).
  20. Skaljac, M., Zanic, K., Hrncic, S., Radonjic, S., Perovic, T., Ghanim, M. Diversity and localization of bacterial symbionts in three whitefly species (Hemiptera: Aleyrodidae) from the east coast of the Adriatic. Bull. Entomol. Res. 103, 48-59 (2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

مضان
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.