coculture Amoebal هو نظام زراعة الخلايا باستخدام الأميبات تمسكا تنمو بشكل انتقائي مسببات الأمراض داخل الخلايا قادرة على مقاومة الخلايا البلعمية مثل الأميبات والضامة. وبالتالي فإنه يمثل أداة رئيسية لاكتشاف العوامل المعدية الجديدة. تخصيب Amoebal يسمح اكتشاف الأنواع الجديدة وamoebal من البكتيريا داخل الخلايا الخاصة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
اكتشاف جديد بين الخلايا مسببات الأمراض عن طريق Amoebal Coculture والمناهج Amoebal التخصيب
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
مسببات الأمراض مثل البكتيريا داخل الخلايا، المتفطرات والكائنات الحية مثل الكلاميديا يصعب عزل لأنهم غالبا ما تنمو بشكل سيئ أو لا على الاطلاق على وسائل الإعلام الانتقائي الذي عادة ما تستخدم لزراعة البكتيريا. لهذا السبب، تم اكتشاف العديد من هذه الجراثيم إلا في الآونة الأخيرة أو في أعقاب تفشي الهامة. غالبا ما ترتبط هذه الجراثيم مع الأميبات، والتي تكون بمثابة خلايا المضيف والسماح للبقاء ونمو البكتيريا. نعتزم هنا لتقديم مظاهرة من اثنين من التقنيات التي تسمح العزلة وتوصيف مسببات الأمراض داخل الخلايا الموجودة في العينات السريرية أو البيئية: وcoculture amoebal وتخصيب amoebal. coculture Amoebal يسمح الانتعاش من البكتيريا داخل الخلايا، فحقن العينة على التحقيق في الحديقة amoebal التي يمكن أن تكون مصابة و lysed من البكتيريا داخل الخلايا الموجودة في العينة. يسمح تخصيب Amoebal استرداد الأميبات موجودة في عينة سريرية أو البيئية. الويمكن أن يؤدي إلى اكتشاف أنواع جديدة amoebal ولكن أيضا من البكتيريا داخل الخلايا الجديدة المتنامية على وجه التحديد في هذه الأميبات. معا، وهذه التقنيات اثنين تساعد على اكتشاف البكتيريا داخل الخلايا الجديدة قادرة على النمو في الأميبات. نظرا لقدرتها على إصابة الأميبات ومقاومة البلعمة، قد هذه البكتيريا داخل الخلايا أيضا الهروب البلعمة التي الضامة، وبالتالي، تكون الممرضة لحقيقيات النوى أعلى.
المقدمة
قبل ظهور التشخيص الجزيئي، والكائنات الدقيقة الموجودة في محاريب البيئية أو في العينات السريرية في كثير من الأحيان الكشف عنها من قبل زراعتها على وسائل الإعلام الانتقائي مختلفة، وذلك أساسا على أجار في أطباق بتري. النمط الظاهري من المستعمرات البكتيرية ونشاطهم الأيضية ثم سمح تصنيف البكتيريا على مستوى الأنواع. ويمكن أيضا أن تستخدم مرق لزيادة حساسية الكشف. ومع ذلك، كل التقنيات لا تسمح الانتعاش من البكتيريا التي تنمو ببطء أو لا على الاطلاق على هذه الوسائط. هذا هو السبب وتستخدم على نطاق واسع النهج الجزيئية في الوقت الحاضر. ومع ذلك، والكشف عن الحمض النووي لا يقدم أي دليل على بقاء البكتيريا. علاوة على ذلك، على العكس من الثقافة، والنهج الج....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. Amoebal Coculture
1.1 إعداد نموذج
- عينة بيئية
- عينات المياه
تحديد عينة المياه (500 مل إلى 1 لتر) من خلال 0.22 ميكرون حجم المسام الغشاء. ثم، ويهز الغشاء في الأميبا المالحة PAS المتوسطة صفحة في (120 ملغ من كلوريد الصوديوم، 4 ملغ من MgSO 4 • 7H 2 O، 4 ملغ من و CaCl 2 • 2H 2 O، 142 ملغ من الصوديوم 2
- عينات المياه
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
باستخدام coculture amoebal وتخصيب amoebal، مجموعة كاملة من البكتيريا البيئية و / أو المسببة للأمراض تم اكتشاف (الجدول 1).
وقد استخدم coculture Amoebal لدينا مجموعة وغيرها لتحليل العينات البيئية، ومحطات معالجة المياه وشبكات توزيع المياه. وهناك مجموعة واسعة من الكائنات الدقيقة يمكن أن تكون معزولة مع هذه التقنية. البكتيريا الأكثر شيوعا التي يعزلها coculture amoebal هي أعضاء في جنس المتفطرة.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
coculture Amoebal وتخصيب amoebal طرق فعالة التي سمحت للعزل العديد من الأنواع البكتيرية وamoebal جديدة. النتائج التي تم الحصول عليها مع هذه الأساليب تؤكد وجود في كل مكان من كلا الأميبات والبكتيريا مقاومة الأميبا في البيئة، وهذا هو الأكثر أهمية في شبكات المياه من صنع الإنسان التي تعتبر أن يسيطر عليها العلاجات الكيميائية مثل الكلور والمعالجة بالأوزون. coculture Amoebal وتخصيب amoebal هي أدوات أساسية لعزل وزراعة هذه الكائنات الحية الدقيقة المحرضة والحصول على سلالات نقية في الثقافة من .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
شكر وتقدير
نشكر العلاقات العامة. برنار لا سكولا للحصول على النصائح التقنية مفيدة ومناقشة مثيرة للاهتمام على coculture amoebal وتخصيب amoebal. نشكر أيضا الدكتور فنسنت توماس لمساعدته في تنفيذ هذه التقنية في مختبرنا.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الجلوكوز أحادي الهيدرات | ميرك ، دارمشتات ، ألمانيا | 108342 | |
| 0.22 & mu ؛ غشاء بحجم المسام | ميرك ميليبور ، دارمشتات ، ألمانيا | SCVPU11RE | |
| الببتون البروتيني | بيكتون ديكنسون ، بحيرات فرانكلين ، نيوجيرسي | 211693 | |
| مستخلص الخميرة | بيكتون ديكنسون ، بحيرات فرانكلين ، نيوجيرسي | 212750 | |
| قوارير زراعة الخلايا | بيكتون ديكنسون ، بحيرات فرانكلين ، نيوجيرسي | 353135 | |
| كوفا | هيكور ، إنديانابوليس ، إنديانا | 87144 | |
| صفائح دقيقة لزراعة الخلايا Corning | Inc ، Corning ، NY | 3524 | |
| مجموعة تلطيخ Diff-Quik | Siemens Healthcare ، ميونيخ ، ألمانيا | 130832 | |
| Ziehl fuchsin | Fluka ، سانت لويس ، ميشيغان | 21820 | |
| فوشين أساسي | سيجما ، سانت لويس ، ميشيغان | 857843 | |
| فينول | سيجما ، سانت لويس ، ميشيغان | P1037 | أكسالات الملكيت الأخضر المسببة للتآكل والمطفرات |
| فلوكا ، سانت لويس ، ميشيغان | 63160 | ||
| محلول بارافورمالديهايد 16٪ | علوم المجهر الإلكتروني ، هاتفيلد ، بنسلفانيا | 15710 | |
| سابونين | سيجما ، سانت لويس ، ميشيغان | 84510 |
المراجع
- Fraser, D. W., et al. Legionnaires' disease: description of an epidemic of pneumonia. New Engl. J. Med. 297, 1189-1197 (1977).
- McDade, J. E., et al. Legionnaires' disease: isolation of a bacterium and demonstration ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
