تسليم خلية داخل عضلة القلب في نماذج الفئران من أمراض القلب والأوعية الدموية، مثل ارتفاع ضغط الدم أو احتشاء عضلة القلب، ويستخدم على نطاق واسع لاختبار الإمكانات العلاجية من أنواع مختلفة من الخلايا في الدراسات التجدد. ولذلك، فإن وصفا مفصلا وتصورا واضحا لهذا الإجراء الجراحي يساعد على تحديد حدود ومزايا خلية التحليلات العلاجية القلب والأوعية الدموية في القوارض الصغيرة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
داخل عضلة القلب توصيل الخليوي: ملاحظات في قلوب الفئران
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وأظهرت دراسات سابقة أن تسليم خلية يعزز تحسين وظيفة القلب عن طريق الإفراج عن السيتوكينات والعوامل التي تزيد من عودة التوعي أنسجة القلب وبقاء الخلية. بالإضافة إلى ذلك، كشفت المزيد من الملاحظات أن الخلايا الجذعية محددة، مثل الخلايا الجذعية القلبية، الخلايا الجذعية الوسيطة وcardiospheres لديهم القدرة على الاندماج داخل عضلة القلب المحيطة عن طريق التفريق في العضلية، خلايا العضلات الملساء والخلايا البطانية.
هنا، نقدم المواد والأساليب لتقديم موثوق الخلايا noncontractile في جدار البطين الأيسر من الفئران immunodepleted. الخطوات البارزة لهذا الإجراء المجهرية تشمل التخدير وحقن تسكين، داخل الرغامى التنبيب، شق لفتح الصدر وكشف القلب والتسليم من الخلايا العقيمة عيار 30 إبرة وحقنة الدقة ميكروليتر.
معالجة الأنسجة التي تتكون من حصاد القلب، embeddiنانوغرام، باجتزاء وأظهرت تلطيخ النسيجية أن حقن الخلايا داخل عضلة القلب أنتج الضرر صغيرة في منطقة النخابية، وكذلك في جدار البطين. تم الإبقاء على الخلايا Noncontractile في جدار عضلة القلب لدى الفئران المناعة وكانت محاطة بطبقة من الأنسجة متليفة، من المحتمل للحماية من الضغط القلب وتحميل الميكانيكية.
المقدمة
وقد تم اختبار مختلف البروتوكولات تسليم خلية في الفئران والجرذان نماذج من أمراض القلب والشرايين وذلك بهدف ترجمة كفاءة وفعالية وسلامة هذا الإجراء التجريبي في المرضى من البشر. في قلوب القوارض الصغيرة، والتسليم خلية داخل عضلة القلب هو الأسلوب الأكثر جدوى من تسليم خلية 1،2، في حين أنه في تقدمي الفئران القلب 3 و 4 إلى الوراء خلية داخل التاجي التسريب يمكن أن تستخدم أيضا. كلتا الطريقتين لها حدود ومزايا. تسليم الخليوي عبر الطريق داخل التاجي مزاياه النظرية على الحقن العضلي المباشر في تعزيز نشر خلية العالمية 3، ولكن كما أن لديها خطر التسبب في انسداد الشريان التاجي 3،5. وترتبط القيود ع....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت جميع الدراسات الحيوانية في الامتثال الدولي (التوجيه 2010/63/EU في البرلمان الأوروبي) والوطنية (وزارة الداخلية في المملكة المتحدة، لعام 1986) اللوائح. الإجراءات المذكورة هنا هي جزء من خطة عملنا تحت رخصة السلطات في المملكة المتحدة والتي لم يتم الاضطلاع بها لغرض التسجيل.
1. إعداد خلايا
يصف هذا البروتوكول إعداد خط خلية معينة (الكلى الجنينية البشرية، وخلايا HEK293) لأغراض العرض التوضيحي. يجب أن توظف بروتوكولات خلية محددة لزراعة والتفريق المحفزة أو الكبار الخلايا الجذعية في الأنساب خلية معينة ف....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
نحن حقن HEK293 الخلايا، والتي يمكن تمييزها من خلايا القلب من قبل التشكل المختلفة (الشكل 1)، مع شكل حصوه مقارنة العضلية ممدود (الشكل 1A). كانت الخلايا أكثر استجابة لمطالب HEK293 صبغ الهيماتوكسيلين (اللون الأزرق) مقارنة العضلية (اللون الوردي)، من المحتمل بسبب زيادة المحتوى النووية الخاصة بهم (الشكل 1A). لمزيد من التمييز حقن الخلايا من الأنسجة المضيفة، وصفت الخلايا HEK293 مع دابي 2 ساعات قبل الحقن. كانت الخلايا المسمى مرئية في أنسجة .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في هذا المخطوط، لقد أظهرنا كيفية إجراء الحقن داخل عضلة القلب من الخلايا في قلوب الفئران. كدليل على هذه المنهجية، وقد استخدمنا HEK293 الخلايا. من المهم التأكيد على أن خلايا HEK293 لا تستخدم في أي دراسة العلاج بالخلايا وبالتالي فإن نتائج هذه المخطوطة ليست مناسبة لترجمة مباشرة إلى نهج العلاجية. ومع ذلك، فإن حقيقة أن الخلايا HEK293 ليست خلايا مقلص ولا تحورها في أنواع الخلايا الأخرى يركز الاهتمام على الجوانب الفنية مثل خصائص الخلايا ليتم تسليمها ومسار التسليم.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
والكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
نشكر معهد مجدي يعقوب (MYI) لدعم التحليل المجهري والمشاريع التي تنطوي على إصلاح القلب، وفنيي ومدير منشأة الحيوانية لدينا. وقد تم دعم هذا العمل من قبل مؤسسة القلب البريطانية (فتقول)، ومنحة مشروع PG/10/019. ويدعم MPS من قبل MYI وفتقول. TP هو التميز زميل فتقول البحوث. NR هو NH & MRC أستراليا زميل.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| المعزل | أنظمة | الاقتباس المطلوب | |
| وسادة التدفئة | حلول التكنولوجيا البيطرية | HE006 | للحيوانات الصغيرة |
| الطبية | الوطنية للخدمة | الطبية ضرورية | |
| هيدروكلوريد الكيتامين هيدروكلوريد | البيطرية | بيطرية | |
| أتيباميزول | الوصفة البيطرية | ||
| إزالة الشعر | المتاجر | ||
| الوصفة البيطرية | Buprenorphine | NVS | |
| Leica MZFLIII مجهر | Leica | Model S6E | مع حامل ذراع متأرجح TS0 |
| Hamamatsu Nanozoomer الماسح الضوئي الرقمي للشرائح | Hamamatsu | RS | |
| مسح المجهر الإلكتروني | Jeol | JSM-6610 | |
| مقص حاد | FST | 14084-09 | |
| Minivent | Harvard Apparatus | 73-0043 | بما في ذلك محول Y صغير (73-0027) وقنية التنبيب (73-2844) |
| ملقط | FST | 11052-10 | |
| نظام التراجع | FST | 18200-20 | Kit للحيوانات حتى 200 جرام |
| 30 جم 12 مم ؛ & frac12 ؛ بوصة | BBraun | A210 | حقنة ميكرولتر صفراء ناعمة |
| ESSLAB | 81201 | تشمل أيضا موزع هاميلتون المتكرر PB 600-1 رقم الكتالوج 83700 | |
| 6-0 خياطة الحرير | Ethicon | W1614T |
المراجع
- Menasche, P., et al. Myoblast transplantation for heart failure. Lancet. 357, 279-280 (2001).
- Taylor, D. A., et al. Regenerating functional myocardium: improved performance after skeletal myoblast transplantation. Nat. Med. 4, 929-933 (199....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
