يمكن أن يتسبب الإنتان التجريبية في الفئران باستخدام ربط الأعور وثقب (CLP) الأسلوب. يتم عرض البروتوكولات الحالية لتقييم الالتهام الذاتي في الجسم الحي في سياق الإنتان CLP التي يسببها هنا: بروتوكول لقياس الالتهام الذاتي باستخدام الفئران (GFP) LC3، وبروتوكول لقياس تشكيل جسيم بلعمي ذاتي بواسطة المجهر الإلكتروني.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الأعور ربط والبزل التي يسببها تعفن الدم نموذجا لدراسة الالتهام الذاتي في الفئران
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يمكن أن يتسبب الإنتان التجريبية في الفئران باستخدام ربط الأعور وثقب (CLP) الأسلوب، الذي يسبب تعفن الدم متعدد المكروبات. هنا، يتم توفير بروتوكول للحث على الإنتان متفاوتة الخطورة في الفئران باستخدام تقنية CLP. الالتهام الذاتي هو استجابة الأنسجة للإجهاد الأساسية وغزو الممرض. وتعرض اثنين من البروتوكولات الحالية لتقييم الالتهام الذاتي في الجسم الحي في سياق الإنتان التجريبية أيضا هنا. (I) يتعرضون الفئران المعدلة وراثيا معربا عن البروتين البروتين مضان أخضر (GFP) LC3 الانصهار لCLP. تعزيز المترجمة من إشارة GFP (نقاط و)، ويعاير إما عن طريق المقايسات المناعية أو متحد البؤر، ويمكن استخدامها للكشف عن تشكيل جسيم بلعمي ذاتي معزز، وبالتالي، وتفعيل غيرت من مسار الالتهام الذاتي. (II) تعزيز فجوة ذاتية البلعمة (جسيم بلعمي ذاتي) تشكيل الأنسجة في منطقة حدة (كعلامة من التحفيز الالتهام الذاتي) يمكن قياسها كميا باستخدام المجهر الإلكتروني. دراسة الاستجابات ذاتية البلعمة لهو تسمم شركات حرجةonent من فهم الآليات التي الأنسجة الاستجابة للعدوى. نتائج البحوث في هذا المجال يمكن أن تسهم في نهاية المطاف نحو فهم الآلية المرضية للتسمم، وهو ما يمثل مشكلة كبيرة في مجال الطب والرعاية الحرجة.
المقدمة
الإنتان، والاستجابة الالتهابية الجهازية للإصابة، يمثل السبب الرئيسي للوفاة في مرضى حاسمة من سوء 1. التهابات داخل البطن، وغالبا ما يؤدي إلى تعفن الدم متعدد المكروبات، تمثل 20٪ من حالات الإنتان، والتي لها معدل وفيات كبيرة تصل إلى 60٪ 2. الوفيات المرتبطة الإنتان النتائج في المقام الأول من اختلال وظيفي متعدد الجهاز مع فشل الجهاز اللاحقة 3،4. وهناك حاجة للمزيد من التحقيق في آلية المسببة للأمراض من هذا المرض على وجه السرعة لتعزيز تطوير علاجات جديدة وأكثر فعالية.
أسلوب ربط الأعور وثقب (CLP) هو إجراء يستخدم بشكل شائع لنمذجة الإنتان
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: وافقت اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام في بريغهام ومستشفى / المنطقة هارفارد كلية الطب المرأة الإجراءات التالية.
1. الأعور ربط والبزل
استخدام الفئران من نفس الخلفية (C57BL / 6)، الذكور، 8-10 أسابيع. الفئران الإناث أكثر من الذكور مقاومة ضد الإنتان الناجم عن الفتك. الفئران الأكبر سنا من 8 أسابيع تحقيق نتائج أقل تغيرا من الفئران الأصغر من حيث البقاء على قيد الحياة بعد CLP. حوالي N = 10 لكل مجموعة الفئران مقارنة ينبغي أن تستخدم لتحليل البقاء على قيد الحياة. N = 3-5 الف....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تجرثم الدم موجود في الفئران في وقت مبكر 6 ساعة بعد CLP التي يسببها تسمم 14. تظهر العلامات السريرية للتسمم (بما في ذلك قشعريرة، تسرع التنفس وضعف النشاط الحركي) حوالي 12 ساعة بعد العملية. تعرض الفئران لCLP تبدأ في الموت عند حوالي 18 في الساعة بعد تحريض التهاب الصفاق. وأكثر شدة الإنتان هو أكثر هو زيادة الفتك 15 في التفاصيل، والدرجة العالية الإنتان يسبب وفيات 100٪ في غضون 2-3 أيام، في حين أن نتائج الإنتان منتصف الصف في معدل وفيات حوالي 60٪ في 7 أيام بعد CLP (ما و.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
والميزة الرئيسية لCLP هو أنه يسمح للباحثين لتحقيق الإنتان من بالقسوة مختلفة (أي من منخفضة إلى متوسطة وعالية الجودة). يتأثر شدة الإنتان الناجم عن طول الأعور ligated (التي هي المحدد الأهم)، وحجم الإبرة المستخدمة للثقب وعدد من الثقوب يؤديها 15. بالإضافة إلى ذلك، يمكن للسلالة الماوس والمساواة بين الجنسين تؤثر على شدة الإنتان؛ عدة سلالات أكثر عرضة من غيرها، والذكور هم عموما أكثر عرضة من الإناث 19،20. العوامل المذكورة أعلاه مجتمعة تحديد وفيات CLP التي يسبب.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
والكتاب ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة إلى إعلان
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح HL108801 P01، R01-HL60234، R01-HL55330، R01-HL079904، إلى AMK تشوي. تلقى S. ريتر الدعم الراتب من معهد أبحاث الجهاز التنفسي لوفليس.....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| GFP-LC3 الفئران المعدلة وراثيا | Riken (اليابان) | RBRC00806 | GFP-LC3 # 53 |
| Xylazine | Henry-Schein | 568-0606 | Xylazine HCl حقن الطبيب البيطري |
| الكيتامين | هنري شاين | 995-2949 | Ketaset Inj 100 مجم / مل |
| EtOH | Fisher | A405-20 | الأنسجة |
| EtOH | Fisher | A407-1 | للتعقيم |
| خيوط جراحية من الحرير 6-0 | Owens & amp طفيفة | 2300-0078OG ، 017624 | |
| بوبرينورفين-حمض الهيدروكلوريك هنري | شاين | 614-5157 | أمبولات بوبرينكس |
| بارافورمالدهيد (37٪) محلول | JT Baker | S898-09 | |
| زيلين | فيشر | X3P-1GAL | |
| الأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة ل GFP | Life Technologies | G10362 | |
| Hoescht | Sigma | 944403 | |
| DAPI | Invitrogen | D1306 | |
| OCT | VWR العلمي | 25608-930 | |
| السودان الأسود | سانتا كروز | sc-203760 | |
| درجة EM الجلوتارالديهايد 2.5٪ في كاكوديلات الصوديوم | علوم المجهر الإلكتروني | 15960 | |
| أكسيد البروبيلين | سيجما | 240397 | |
| أجار 100 راتنج | أجار علمي | R1045 | |
| أنهيدريد دودسينيل سكسينيك | سيجما | 46346 | |
| أنهيدريد ميثيل ناديك | سيجما | 45359 | |
| N-بنزيل ثنائي ميثيل أمين | سيجما | 185582 |
المراجع
- Hotchkiss, R. S., Karl, I. E. The pathology and treatment of sepsis. N. Engl. J. Med. 348, 138-150 (2003).
- Anaya, D. A., Nathens, A. B. Risk factors for severe sepsis in secondary peritonitis. Surg. Infect. 4, 355-362 (2003).
- Bone, R. C., Grodzin, C. J., Balk, R. A.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
