يوصف الأسلوب الكمي لدراسة الهجرة عفوية من الخلايا في المكروية يقتصر ذات بعد واحد. هذا الأسلوب يستفيد من القنوات microfabricated، ويمكن استخدامها لدراسة هجرة عدد كبير من الخلايا تحت ظروف مختلفة في التجارب واحد.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
دراسة الهجرة خلية في القنوات Microfabricated
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الطريقة الموضحة هنا يسمح دراسة الهجرة الخلية تحت الحبس في بعد واحد. لأنه يقوم على استخدام القنوات microfabricated، التي تفرض النمط الظاهري الاستقطاب إلى الخلايا عن طريق القيود المادية. مرة واحدة داخل القنوات، وخلايا لديها سوى احتمالين: التحرك إلى الأمام أو الخلف. هذه الهجرة مبسطة الذي يقتصر الاتجاهية يسهل التتبع التلقائي للخلايا واستخراج المعلمات الكمي لوصف حركة الخلية. وتشمل هذه مؤشرات قوة الاندفاع الخلية، والتغيرات في الاتجاه، وتوقف أثناء الحركة. Microchannels هي أيضا متوافقة مع استخدام علامات الفلورسنت، وبالتالي فهي مناسبة لدراسة توطين عضيات داخل الخلايا والهياكل أثناء الهجرة الخلية بدقة عالية. أخيرا، والسطح من القنوات يمكن بين functionalized مع ركائز مختلفة، والسماح للسيطرة على خصائص لاصقة من القنوات أو دراسة haptotaxis. وباختصار، فإن نظام حيحرث صفها يهدف إلى تحليل هجرة أعداد الخلايا الكبيرة في الظروف التي يتم التحكم كلا من الهندسة والطبيعة والكيمياء الحيوية للبيئة، وتسهيل تطبيع واستنساخ تجارب مستقلة.
المقدمة
الهجرة هي وظيفة الخلوية المعقدة وهذا أمر مهم لكثير من العمليات الفسيولوجية في الكائنات متعددة الخلايا، بما في ذلك التنمية، الاستجابات المناعية، وتجديد الأنسجة. بالإضافة إلى ذلك، بعض الحالات المرضية مثل غزو الورم والانبثاث تعتمد على خلية حركية 1. لهذه الأسباب، فقد أصبحت الهجرة الخلية حقل رئيسي للدراسة في سياق البحوث الأساسية ومتعدية على حد سواء. في الجسم الحي، وتتميز معظم الأنسجة عن طريق مصفوفة خارج الخلية الغنية وكثافة الخلايا عالية. الهجرة الخلية وبالتالي، في ظل الظروف الفسيولوجية، ويحدث في بيئة محصورة المعقدة. كلاسيكيا، وقد درس الهجرة الخلية على الأرجح لأسباب تاريخية وحدود التقنية في أنظمة 2D المسطحة التي ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة هامة: يفترض هذا البروتوكول الذي القالب الذي يحتوي على شكل لو microchannels المطلوب أحرز بالفعل. مزيد من المعلومات حول إعداد القالب تم نشره بالفعل 10. يفترض هذا البروتوكول أيضا أن الثقافة البلدان النامية نخاع العظم هو معروف.
1. رقاقة تلفيق
- مزيج النفط PDMS وكيل علاج في نسبة الوزن 10:01 في كوب من البلاستيك. خلط كل من المركبات بدقة.
- يلقي المزيج فوق و microchannels تحمل العفن. يجب أن يكون الا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
في كل تجربة وهي مغلفة سطح PDMS مع جزيء تكييفها لمصلحة الدراسة. ويبين الشكل 2 القنوات المغلفة مع جزيء نيون، PLL-G-PEG، قبل وبعد غسل (الخطوة 2.4). هذه التجربة تسمح للسيطرة على تجانس الطلاء في القنوات.
بعد تحميل الخلية، المجهري الفيديو لا يمكن أن يؤديها لمتابعة الهجرة الخلية. ويبين الشكل 3A مثال على العاصمة المهاجرة في microchannels في مناطق ذات كثافة مناسبة لتتبع الخلايا. كلا، الطو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
نحن هنا وصف الجهاز يتكون من microchannels كوسيلة لدراسة خصائص المهاجرة من عدد كبير من الخلايا في تجارب واحد. هذا النظام التجريبي يحاكي القيود البيئية تقتصر جدت في أنسجة الخلايا المهاجرة الذاتية. ومع ذلك، من خلال إجبار الهجرة في بعد واحد، فإنه يسهل تتبع خلية الآلي واستخراج قياسه (الشكل 5). وتبين لنا أيضا أن لدينا جهاز متوافق مع مضان المجهري، وبالتالي يمكن تكييفها لدراسة عضية المواقع خلال مراحل مختلفة من حركية الخلية (الشكل 4).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
والكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
المؤلفين نعترف كثيرا من منصة PICT IBiSA في معهد كوري (CNRS UMR144). وقد تم تمويل هذا العمل من المنح المقدمة من: مجلس البحوث الأوروبي AM.LD (Strapacemi 243103)، والرابطة الوطنية لأجل الديمقراطية بحوث (ANR-09-0027-بيري-PCVI)، ومؤسسة InnaBiosanté (Micemico) الى النائب وAM. LD وERC Strapacemi منحة المحقق الشباب لAM.LD.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Polydimethylsiloxane (PDMS) GE | Silicones | RTV615 | عبوة من قاعدة سيليكون 90٪ وعامل معالجة 10٪ |
| قاطع العينة الأساسية | Ted Pella Int. | Harris Uni-Core | Diameter 2.5 مم |
| طبق زجاجي | القاع WPI | Fluorodish FD 35-100 | |
| منظف بالموجات فوق الصوتية | برانسون بالموجات | برانسون 200 | |
| منظف بلازما | هاريك بلازما | PDC 32 جم | للعينات الصغيرة (35 طبقا). يتوفر أيضا إصدار أكبر |
| من Fibronectin من بلازما البقر | Sigma Aldrich | F0895 | |
| PolyLysine المطعمة PEG (Pll-g-PEG) | Susos | PLL (20) -g [3.5] -PEG (5) Hoechst | |
| 33342 | Sigma Aldrich | B2261 | |
| Y27632 | TOCRIS | 1254 |
المراجع
- Lauffenburger, D. A., Horwitz, A. F. Cell migration: a physically integrated molecular process. Cell. 84 (3), 359-369 (1996).
- Lämmermann, T., et al. Rapid leukocyte migration by integrin-independent flowing and squeezing. Nature. 453 (7191), 51-55 (2008). <....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
