مقالة منهجية

التصوير خلية غشاء من الإصابات والعمليات التحت خلوية المشاركة في اصلاح

DOI:

10.3791/51106

⸱

مارس 24, 2014

 ,  , 
1Center for Genetic Medicine Research, Children's National Medical Center, 2Department of Integrative Systems Biology, George Washington University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عملية الشفاء من الخلايا جرح ينطوي الاتجار بروتينات معينة ومقصورات التحت خلوية إلى موقع الإصابة غشاء الخلية. يصف هذا البروتوكول فحوصات لرصد هذه العمليات.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قدرة الخلايا المصابة للشفاء هو عملية الخلوية الأساسية، ولكن الآليات الخلوية والجزيئية المشاركة في خلايا الشفاء بجروح ولا يزال الغموض يكتنف. هنا يتم وصف فحوصات لرصد القدرة وحركية للشفاء من إصابة الخلايا المستزرعة التالية مترجمة. يصف البروتوكول الأول نهجا يستند إلى نقطة النهاية في وقت واحد لتقييم قدرة الخلايا إصلاح غشاء من مئات الخلايا. يصف البروتوكول الثاني نهج التصوير في الوقت الحقيقي لمراقبة حركية إصلاح غشاء الخلية في الخلايا الفردية بعد الاصابة المترجمة مع ليزر نابض. كما أصيب خلايا الشفاء ينطوي الاتجار بروتينات معينة ومقصورات التحت خلوية إلى موقع الإصابة، ويصف البروتوكول الثالث استخدام نهج نقطة النهاية أعلاه استنادا إلى تقييم واحد مثل الاتجار الحدث (الليزوزومية إيماس) في مئات من الخلايا في وقت واحد وجرح بروتوكول مشاركة يصف استخدام الليزر النبضي الإصابة جنبا إلى جنب مع صغار TIRFنسخة لرصد ديناميات مقصورات التحت خلوية الفردية في الخلايا المصابة في القرار المكانية والزمانية عالية. في حين تصف بروتوكولات هنا استخدام هذه الأساليب لدراسة العلاقة بين إصلاح غشاء الخلية وإيماس الليزوزومية في خلايا العضلات مثقف، يمكن تطبيقها على هذا النحو لأية خلية أخرى ملتصقة مثقف ومقصورة التحت خلوية من خيار.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يحافظ على غشاء الخلية على سلامة الخلايا من خلال توفير حاجز بين الخلية والبيئة خارج الخلية. A التحفيز الكيميائية والكهربائية والميكانيكية أو التي تتجاوز عتبة فسيولوجية طبيعية وكذلك وجود غزو مسببات الأمراض يمكن لكل نتيجة في إصابة غشاء الخلية وتثير رد فعل الخلوية اللاحقة لإصلاح هذا الضرر. البقاء على قيد الحياة هذه الإصابات لغشاء الخلية، والخلايا تمتلك آلية فعالة للإصلاح. هذه الآلية هي التي تعتمد الكالسيوم وينطوي الاتجار داخل الخلايا من البروتينات مثل annexins وMG53 وغيرها فضلا عن المقصورات التحت خلوية مثل الإندوسومات، الجسيمات الحالة، جولجي والميتوكوندريا الحويصلات المشتقة من غشاء الخلية أصيب 1-7. ومع ذلك، فإن تفاصيل تسلسل الأحداث الجزيئية والتحت خلوية المشاركة في إصلاح غشاء الخلية التالفة لا تزال غير مفهومة تماما.

يمكن فصل استجابة إصلاح الخلية في الأذنلاي والاستجابات في وقت متأخر. الردود في وقت مبكر، والتي تحدث في غضون ثوان إلى دقائق النطاق الزمني، مهمة بشكل كبير في تحديد طبيعة الاستجابات في وقت متأخر مما يؤدي إلى إصلاح الخلية ناجحة أو موت الخلية. وقد ساعدت المقايسات نقطة النهاية على أساس الأكبر تحليل الكيمياء الحيوية والخلوية إثبات تورط العمليات الجزيئية والخلوية في الإصلاح. ولكن، نظرا لعدم التجانس وسرعة الاستجابة إصلاح الخلوية، تفشل المقايسات نقطة النهاية لتقديم التفاصيل الحركية والمكانية للتسلسل الأحداث التي أدت إلى إصلاح. هي مناسبة النهج التي تمكن من إصابة تسيطر غشاء الخلية وتسمح برصد إصلاح غشاء الخلية والاستجابات المرتبطة التحت خلوية في القرار المكانية والزمانية عالية مثالي لمثل هذه الدراسات. هنا، وقد عرضت هذه النهج. اثنين من البروتوكولات وصف النهج لرصد حركية في الوقت الحقيقي من إصلاح غشاء الخلية والردود التحت خلوية المرتبطة بعملية الإصلاح في الخلايا الحية التالية ينج الليزرأوروغواي. كتكملة لهذه المقايسات التصوير الخلية الحية تستند، كما تم وصفها المقايسات نقطة النهاية التي توفر مقياسا على السكان لإصلاح رصد الخلايا الفردية وردود التحت خلوية المرتبطة بها. لإثبات فائدتها وقد استخدمت هذه الأساليب لمراقبة الاتجار وإيماس من الجسيمات الحالة في استجابة لإصابة غشاء الخلية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. التصوير خلية اصلاح غشاء طريق السائبة (الزجاج الخرزة) إصابة

هذا البروتوكول يسمح بمناسبة حدة خلايا المصابين وتلك التي تفشل للشفاء. قياس هؤلاء السكان من الخلايا يتطلب استخدام ثلاثة شروط: 1. اختبار (C1) - يسمح للخلايا لإصلاح في وجود كا 2 +، 2. الرقابة 1 (أي إصابة C2) - يتم تحضين الخلايا في وجود كا 2 +، ولكن لم يصب، و 3. السيطرة 2 (لا إصلاح C3) - يسمح للخلايا لإصلاح في غياب كا 2 +.

  1. تنمو الخلايا ل> 50٪ التقاء على ثلاثة coverslips معقمة وغسل C1 و C2 مرتين مع CIM عند 37 درجة مئوية وC3 مع برنامج تلفزيوني في 37 درجة مئوية و coverslips نقل على السيليكون O-الخواتم.
  2. إضافة 100 ميكرولتر من حل prewarmed ديكستران FITC في CIM على C1 و C2 أو C3 في برنامج تلفزيوني على.
  3. إصابة غشاء البلازما على C1 و C3 من قبل المتداول بلطف 40 الخرز الزجاجي ميلي غرام على مدى ساترة في درجة حرارة الغرفة عن طريق إمالة coverslips يدويا ذهابا وإيابا 6-8 مرات في زاوية من 30 درجة.
    ملاحظة: لإصابة خفيفة، وضمان وتنتشر حبات الزجاج بشكل موحد، وبالتالي التقليل من تكرار وقوع اصابات. لتحسين استنساخ الإصابة بين العينات، وتحمل في الوقت نفسه من الإصابة الزجاج حبة من عينات مختلفة ليتم مقارنتها.
  4. تجنب المزيد من المتداول من الخرز، ونقل جميع coverslips إلى الحاضنة 37 درجة مئوية في ثاني المحيطة 2 والسماح الإصلاح والمضي قدما لمدة 5 دقائق.
  5. دون السماح الخرز لفة، وإزالة الخرز الزجاجي وFITC ديكستران بواسطة الغسيل مع CIM (C1 و C2) أو برنامج تلفزيوني (C3) في 37 درجة مئوية.
  6. مكان coverslips مرة أخرى على خاتم O وإضافة 100 ميكرولتر من prewarmed يسين يمكن حلها حلا TRITC دكستران في CIM على C1 و C2 أو C3 في برنامج تلفزيوني على.
  7. احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق في ثاني المحيطة 2.
  8. غسل coverslips مرتين مع prewarmed CIM وإصلاح مع PFA 4٪ لمدة 10 دقيقة في RT.
  9. يغسل مرتين مع برنامج تلفزيوني واحتضان لمدة 2 دقيقة في RT في هويشت الصبغة.
  10. غسل samplوفاق مرتين مع برنامج تلفزيوني، جبل على شريحة باستخدام وسائل الإعلام وتركيب الخلايا صورة باستخدام مجهر epifluorescence.
  11. استخدام الخلايا من C2 إلى تحديد خلفية حمراء وخضراء وتلطيخ كثافة استخدام هذه القيمة إلى عتبة القنوات الأحمر والأخضر لجميع العينات (C1-C3).
  12. يسجل العدد الكلي للخلايا التي يتم أ) الأخضر (الجرحى وإصلاحه) وب) حمراء أو كليهما الأحمر والأخضر (المصاب، لكنها فشلت في إصلاح) في عينات C1 و C3.
  13. العد> 100 الخضر خلايا لكل حالة وتعبر عن جزء من الخلايا التي فشلت في إصلاح كنسبة مئوية من جميع الخلايا المصابة (الأخضر والأحمر).

2. التصوير المباشر لحركية إصلاح غشاء الخلية بعد الإصابة الليزر

  1. غسل الخلايا مع prewarmed CIM ومن ثم وضع ساترة في CIM مع وزير الخارجية صباغة.
  2. وضع ساترة في حامل في الحاضنة مرحلة أعلى الحفاظ على 37 درجة مئوية.
  3. حدد 1-2 مم 2 المنطقة من غشاء الخلية، وأشرق ل<؛ 10 ميللي ثانية مع ليزر نابض. تخفيف قوة الليزر من خلال البرنامج إلى 40-50٪ من الطاقة الذروة. الطاقة الأمثل يسمح إصابة متسقة، ولكن غير قاتلة، وهذا يجب أن يتحدد عن طريق التجربة والخطأ لكل صك على حدة وخلية الخط المستخدمة.
  4. لرصد إصلاح، صورة كل 10 ثانية في epifluorescence وbrightfield، بدءا قبل الاصابة وتستمر لمدة 3-5 دقيقة بعد الاصابة.
    ملاحظة: للحصول على أي سيطرة إصلاح، كرر الخطوات من 2،1-2،4 مع الخلايا بجروح في برنامج تلفزيوني يحتوي على صبغة FM.
  5. لقياس حركية إصلاح، وقياس FM الخلوية صبغ مضان ورسم التغير في كثافة (ΔF/F0) أثناء التصوير. ينبغي أن متوسط ​​هذه البيانات لأكثر من 10 خلايا في كل حالة وخططوا كما بلغ متوسط ​​قيمة الخلية أو الفرد، حسب الحاجة.

3. التصوير السائبة (الزجاج الخرزة) إصابة المستحثة الليزوزومية الإيماس

وتشمل عينات الخلايا التالية نمت ل> 50٪التقاء: 1. اختبار (C1) - الخلايا يسمح لإصلاح في وجود كا 2 +، 2. الرقابة 1 (C2، لا إصابة) - خلايا لا جرح ولا حضنت مع الأجسام المضادة الأولية، و 3. 2 السيطرة (C3؛ لا اصلاح) - خلايا يسمح لإصلاح في غياب كا 2 +.

  1. غسل coverslips C1 و C2 مرتين مع CIM عند 37 درجة مئوية وC3 مع برنامج تلفزيوني في 37 ° C ونقلها على السيليكون O-الخواتم.
  2. إضافة 100 ميكرولتر من prewarmed يسين يمكن حلها ديكستران TRITC في CIM على C1 و C2 و C3 في برنامج تلفزيوني على.
  3. إصابة غشاء البلازما على C1 و C3 كما في الخطوة 1.3.
  4. تجنب المزيد من المتداول من الخرز، ونقل جميع coverslips إلى الحاضنة 37 درجة مئوية في ثاني المحيطة 2 والسماح الإصلاح والمضي قدما لمدة 5 دقائق.
  5. إزالة الخرز الزجاجي وTRITC دكستران بغسل لل coverslips في متوسطة النمو الباردة، وضمان مرة أخرى لا المتداول من الخرز الزجاجي على الخلايا.
  6. شطف لل coverslips مرتين مع نمو الباردة متوسطة ونقل إلى O-الخواتم.
  7. لC1 و C3، إضافة 100 ميكرولتر من الفئران لمكافحة فأر LAMP1 الأجسام المضادة في وسائل الإعلام كاملة النمو البارد وإضافة الباردة، وسائط النمو الكامل لC2.
  8. للسماح الضد ملزمة coverslips احتضان لمدة 30 دقيقة في 4 درجات مئوية.
  9. غسل coverslips ثلاث مرات مع CIM الباردة وإصلاح كافة coverslips مع PFA 4٪ لمدة 10 دقيقة في RT ثم شطف 3X مع CIM.
  10. احتضان جميع coverslips في 100 ميكرولتر من عرقلة الحل لمدة 15 دقيقة في RT
  11. احتضان جميع coverslips في 100 ميكرولتر اليكسا فلور 488 الضد مكافحة الفئران لمدة 15 دقيقة في 4 درجات مئوية.
  12. يغسل مرتين مع برنامج تلفزيوني واحتضان لمدة 2 دقيقة في RT في هويشت.
  13. غسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني، جبل على شريحة باستخدام وسائل الإعلام وتركيب الصورة باستخدام المجهر epifluorescence.
  14. استخدام الصور من الخلايا C2، تحديد تلطيخ غير محدد الخلفية في المنطقة الحمراء (TRITC دكستران) والأخضر (اليكسا فلور 488 الضد) القنوات واستخدام هذه القيم لتلوين الخلفية عتبة القنوات الأحمر والأخضر لجميع العينات (C1-C3).
  15. استخدام> 100 الأحمر وصفت الخلايا من C1 و C3 لقياس شدة تلطيخ LAMP1 (الأخضر) في الخلايا المصابة. تجربة ناجحة لتلطيخ LAMP1 في الخلايا من C3 سيكون أقل بكثير مما كانت عليه في الخلايا من C1.

4. التصوير الحي للخلية غشاء الإصابات الحفز الاتجار التحت خلوية

  1. تسمية Fluorescently و مقصورة الفائدة عليها بنقل مراسل المناسبة (مثل CD63-GFP لالجسيمات الحالة 8) أو باستخدام الأصباغ الفلورية 9.
  2. لوضع العلامات الجسيمات الحالة مع صبغة الفلورسنت، واحتضان الخلايا المزروعة إلى 50٪ التقاء في وسائل الإعلام التي تحتوي على النمو FITC-ديكستران
  3. تسمح ديكستران أن endocytosed لمدة 2 ساعة (أو أكثر حسب الحاجة لوضع العلامات endosomal كافية مع ديكستران من خط الخلية من الفائدة) في حاضنة CO 2.
  4. غسل الخلايا مع وسائل الاعلام prewarmed النمو واحتضان فيه لمدة 2 ساعة في CO 2 حاضنة للسماح للجميعendocytosed ديكستران لتتراكم في يحلول.
  5. قبل التصوير، وشطف ساترة في prewarmed CIM وجبل في حامل ساترة على الحاضنة المرحلة الأولى في 37 درجة مئوية.
  6. تنفيذ widefield (للحركة في جميع أنحاء الخلية) أو TIRF (الحركة على سطح الخلية وإيماس) التصوير - الخلايا التي ليس لديها مزدحمة FITC ديكستران الجسيمات الحالة وصفت هي مثالية لتصوير الحركة وإيماس من الجسيمات الحالة الفردية.
  7. محاذاة الليزر TIRF المجهر التصوير ل: استخدام 60X أو 100X مع الهدف> 1.45 NA. إعداد زاوية لحادث TIRF شعاع الليزر باستخدام نهج الشركة المصنعة.
  8. إصابة غشاء الخلية عن طريق تشعيع منطقة صغيرة (1-2 مم 2) ل<100 ميللي ثانية، مع ليزر نابض في 40-50٪ التوهين.
  9. لرصد استجابة يحلول إلى الخلية الإصابة، خلايا الصورة في 4-6 لقطة / ثانية لمدة 2 دقيقة على الأقل أو أكثر اعتمادا على ديناميات إيماس في الخلايا من الفائدة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

البروتوكولات وصفها هنا للتصوير خلية واحدة هي القدرة على رصد وحركية إصلاح غشاء الخلية (البروتوكولات 1 و 2) والاتجار التحت خلوية والانصهار من خلال إصلاح الجسيمات الحالة (بروتوكولات 3 و 4).

بروتوكول 1 يظهر الفحص الأكبر الذي يسمح وضع علامات على جميع الخلايا المصابة وتحديد تلك الخلايا المصابة التي فشلت في إصلاح. النتائج في الشكل 1 المعرض أنه في حين أن الخلايا لم يصب (الشكل 1A) لا تزال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إصابة غشاء الخلية في الجسم الحي يحدث نتيجة لمجموعة متنوعة من الضغوطات الفيزيولوجية ولقد تم تطوير العديد من الطرق التجريبية لتقليد هذه. وتشمل هذه إصابة غشاء الخلية من الخلايا الملتصقة عن طريق كشط لهم قبالة صحن أو الركض من خلال الضيقة تتحمل حقنة 9،10. بعد هذه الإصابات شفاء الخلايا في التعليق ولم تلتزم المصفوفة خارج الخلية كما يفعلون عادة في الأنسجة. آخرون، مثل استخدام السموم المسام تشكيل يغير كيميائيا غشاء الخلية عن طريق استخراج الدهون مثل الكوليسترول، وبالتالي ل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح AR055686 وAR060836 وزمالة ما بعد الدكتوراه لم من قبل جمعية الضمور العضلي الفرنسية (AFM). يتم دعم مرفق التصوير الخلوية المستخدمة في هذه الدراسة من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح HD040677.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
HBSSSigmaH1387يستخدم لتحضير CIM (HBSS / 10 ملي مولار هيبس / 2 ملي مولار Ca2 + < / sup> درجة الحموضة 7.4)
HEPESFisherBP410يستخدم لتحضير CIM (HBSS / 10 ملي هيبس / 2 ملي كالسيوم < سوب>2 + < / سوب> درجة الحموضة 7.4)
FITC ديكستران (ليسين قابل للإصلاح)InvitrogenD18202 مجم / مل في CIM أو PBS
الخرز الزجاجيSigmaG8772
TRITC dextran: (ليسين قابل للتثبيت)InvitrogenD18182 مجم / مل في CIM أو PBS
PFA 16٪EMS157104٪ في PBS
HoechstInvitrogenH35701/10 000 في صبغة PBS
FMInvitrogenT31631 & micro ؛ ز /& مايكرو ؛ ل في CIM أو PBS
FITC dextرانSigmaFD40S2 مجم / مل في وسط النمو
LAMP1 & nbsp ؛سانتا كروزsc-199921/300 في وسط النمو
Alexa Fluor 488 الدجاج المضاد للفئران IgGInvitrogenA214701/500 في محلول الحجب
وسائل الإعلام المتصاعدةDakoS3023
CoverslipsFisher12-545-86
قاع زجاجي بتريديشMatTek corporationP35G-1.0-14-C
حلقة سيليكون OBellco1943-33315
حامل CoverslipBellco1943-11111
InvitrogenA-7816
DMEMVWR12001-566
FBSVWRMP1400-500Hيستخدم لوسط النمو: 10٪ FBS ، 1٪ P / S في DMEM
Penicillin / SreptomycinVWR12001-350يستخدم لوسط النمو: 10٪ FBS ، 1٪ P / S في DMEM
مصل الدجاجSigmaC5405مصل الدجاج 5٪ في CIM يستخدم لحجب المحلول أثناء تلطيخ المناعة
PBS (Ca2 + و Mg2 + مجانا)VWR12001-664
مجهر Epifluorescenceأوليمبوس أمريكا ، PAIX81
TIRF مضيء   ؛أوليمبوس أمريكا ، خلية PA^ TIRF (IEC60825-1: 2007) إضاءة
EpifluorescenceSutter Instruments ، Novato CALambda DG-4 (DG-4 30) CCD
Photometrics ، Tucson ، AZEvolve 512 EMCCD & nbsp ؛
الحصول على الصور وبرنامج التحليلIntelligent Imaging Innovations، Inc. دنفر ، COSlidebook 5
Pulsed laserIntelligent Imaging Innovations، Inc. دنفر ، كولورادوAblate (3iL13)
حاضنة المسرح العلويTokaihit ، اليابانINUBG2ASFP-ZILCS
Camera

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bi, G. Q., Alderton, J. M., Steinhardt, R. A. Calcium-regulated exocytosis is required for cell membrane resealing. Cell Biol. 131, 1747-1758 (1995).
  2. Togo, T. Disruption of the plasma membrane stimulates rearrangement of microtubules and lipid traffic toward the wound site. Cell Sci. 119, 2780-2786 (2006).
  3. Miyake, K., McNeil, P. L. Vesicle accumulation and exocytosis at sites of plasma membrane disruption. Cell Biol. 131, 1737-1745 (1995).
  4. Reddy, A., Caler, E. V., Andrews, N. W. Plasma membrane repair is mediated by Ca2+-regulated exocytosis of lysosomes. Cell. 106, 157-169 (2001).
  5. Babiychuk, E. B., Monastyrskaya, K., Potez, S., Draeger, A. Blebbing confers resistance against cell lysis. Death Differ. 18, 80-89 Forthcoming.
  6. Bansal, D., et al. Defective membrane repair in dysferlin-deficient muscular dystrophy. Nature. 423, 168-172 (2003).
  7. Abreu-Blanco, M. T., Verboon, J. M., Parkhurst, S. M. Cell wound repair in Drosophila occurs through three distinct phases of membrane and cytoskeletal remodeling. Cell Biol. 193, 455-464 (2011).
  8. Jaiswal, J. K., Chakrabarti, S., Andrews, N. W., Simon, S. M. Synaptotagmin VII restricts fusion pore expansion during lysosomal exocytosis. PLoS Biol. 2, 1224-1232 (2004).
  9. McNeil, P. L., Clarke, M. F., Miyake, K. Cell wound assays. Protoc. Cell Biol. Chapter 12, (2001).
  10. McNeil, P. L. Direct introduction of molecules into cells. Protoc. Cell Biol. Chapter 20, (2001).
  11. Knight, M. M., Roberts, S. R., Lee, D. A., Bader, D. L. Live cell imaging using confocal microscopy induces intracellular calcium transients and cell death. J. Physiol. Cell Physiol. 284, C1083-C1089 (2003).
  12. McNeil, P. L., Miyake, K., Vogel, S. S. The endomembrane requirement for cell surface repair. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 4592-4597 (2003).
  13. Benink, H. A., Bement, W. M. Concentric zones of active RhoA and Cdc42 around single cell wounds. Cell Biol. 168, 429-439 (2005).
  14. Schmoranzer, J., Goulian, M., Axelrod, D., Simon, S. M. Imaging constitutive exocytosis with total internal reflection fluorescence microscopy. Cell Biol. 149, 23-32 (2000).
  15. Steyer, J. A., Horstmann, H., Transport Almers, W. docking and exocytosis of single secretory granules in live chromaffin cells. 388, 474-478 (1997).
  16. Jaiswal, J. K., Andrews, N. W., Simon, S. M. Membrane proximal lysosomes are the major vesicles responsible for calcium-dependent exocytosis in nonsecretory cells. Cell Biol. 159, 625-635 (2002).
  17. Jaiswal, J. K., Simon, S. M. Ch. 4.12. Current Protocols in Cell Biology. , Wiley and Sons Inc. 4.12.1-4.12.15 (2003).
  18. Johnson, D. S., Jaiswal, J. K., Simon, S. Total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy illuminator for improved imaging of cell surface events. Protoc. Cytom. Chapter 12, (2012).
  19. Jaiswal, J. K., Simon, S. M. Imaging single events at the cell membrane. Chem. Biol. 3, 92-98 (2007).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

FM

مقالات ذات صلة