Method Article

عزل وتوصيف وظيفي من الإنسان البطيني العضلية من العينات الجراحية الطازجة

DOI:

10.3791/51116

⸱

April 21st, 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department NeuroFarBa, Division of Pharmacology, University of Florence, 2Department of Clinical and Experimental Medicine, Division of Physiology, University of Florence

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المعرفة الحالية على أساس الخلوية من أمراض القلب تعتمد في الغالب على دراسات على نماذج حيوانية. نحن هنا وصف والتحقق من صحة طريقة جديدة للحصول العضلية قابلة للحياة واحد من عينات جراحية صغيرة من عضلة القلب البطيني الإنسان. myocytes البطين الإنسان يمكن أن تستخدم للدراسات الكهربية واختبار المخدرات.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تخضع العضلية من قلوب المريضة إلى العمليات المعقدة التي تنطوي على إعادة عرض التغيرات في بنية الخلية، الإثارة انكماش اقتران والتيارات أيون الغشاء. ومن المرجح أن تكون مسؤولة عن زيادة خطر محدث اضطراب النظم والتعديلات التي تؤدي إلى ضعف مقلص الانقباضي والانبساطي في مرضى القلب تلك التغييرات. ومع ذلك، فقد تأتي معظم المعلومات على التعديلات وظيفة خلية عضلية في أمراض القلب من النماذج الحيوانية.

نحن هنا وصف والتحقق من صحة بروتوكول لعزل myocytes قابلة للحياة من عينات جراحية صغيرة من عضلة القلب البطيني من المرضى الذين يخضعون لعمليات جراحية في القلب. يوصف البروتوكول بالتفصيل. وذكرت القياسات الكهربية والكالسيوم داخل الخلايا لإثبات جدوى لعدد من القياسات وحيدة الخلية العضلية في البطين الإنسان التي تم الحصول عليها مع هذا الأسلوب.

ذكرت وبروتوكول انهيمكن أن يكون مفيدا لإعادة التحقيقات مستقبل أساس الخلوية والجزيئية من تعديلات وظيفية من قلب الإنسان في وجود أمراض القلب المختلفة. علاوة على ذلك، يمكن استخدام هذا الأسلوب لتحديد أهداف علاجية جديدة على المستوى الخلوي واختبار فعالية مركبات جديدة على العضلية البشرية، مع قيمة متعدية المباشرة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تشريح الخصائص الكهربية لعضلة القلب قد تقدم بشكل ملحوظ بعد تطوير تقنيات لعزل واحد خلية عضلية قلبية. كما بذلت التطورات الأخيرة في فهم القلب الإثارة تقلص اقتران (EC-اقتران) بفضل القدرة على عزل العضلية واحد قابلة للحياة التي تحتفظ كافة الخصائص الفسيولوجية للأنسجة سليمة. ويعمل أساليب التصحيح المشبك بشكل روتيني لدراسة وظيفة وتعديل الدوائية للsarcolemmal القلب التيارات أيون. كما أجريت تسجيلات لديناميات الكالسيوم داخل الخلايا مع كا 2 + الأصباغ الحساسة بانتظام على myocytes القلب واحد من مجموعة متنوعة من النماذج السليمة والمريضة، وتوفير البيانات الحيوية على فسيولوجيا EC-اقتران وكذلك على التغيرات المرضية من داخل الخلايا كا

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على البروتوكولات التجريبية على الأنسجة البشرية من قبل اللجنة الأخلاقية من جامعة مستشفى Careggi (2006/0024713؛ تجدد مايو 2009). أعطى كل مريض الموافقة المسبقة عن مكتوب.

1. حلول وإعداد معدات

ووصف الحلول في الجدول 1. تم العثور على مخطط مبسط لإجراء العزل الخلية في الشكل 1.

حل CP DB KB مرض السل ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كان يعمل الطريقة الموصوفة أعلاه لتوصيف وظيفي من تشوهات العضلية معزولة عن الحاجز بين البطينين من المرضى الذين يعانون من اعتلال عضلة القلب الضخامي (HCM) الذي خضع لعملية استئصال العضلة، مقارنة مع مرضى الفشل الضخامي غير غير الجراحية 21. وتستمد النتائج الواردة في هذا القسم من هذا العمل 21 وترد هنا كمثال للكيفية التي يمكن أن تستخدم هذه التقنية لتوصيف تغيرات في وظيفة خلايا عضلة القلب في ظروف مرض القلب.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وصفناها والتحقق من صحتها وسيلة لعزل myocytes قابلة للحياة من عينات جراحية من عضلة القلب البطيني الإنسان. بدءا من البروتوكولات التي سبق وصفها التي استخدمت بنجاح إلى خلايا معزولة من العينات الجراحية الأذيني، والتقنية للسماح وقد وضعت فصل myocytes واحدة قابلة للحياة المريضة من عضلة القلب البطيني وصقلها. وأظهرت التقارير المبكرة التي عزلة العضلية واحدة من قطع من الأذيني البطيني الأنسجة وضعف انتقائي repolarizing التيارات البوتاسيوم، مما أدى إلى تغير الخصائص الكهربية والاستجابات الفسيولوج.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل من قبل الاتحاد الأوروبي (بكتيريا المشروع 241577 "القلب الكبير" برنامج الإطار الأوروبي 7، CP)، الدولية لوكسمبورغ عمليات Menarini مينارينى (AM)، تيليثون GGP07133 (CP) والعلوم جلعاد (AM).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة (KH2PO4)Sigma-AldrichP9791
كبريتات المغنيسيوم سباعي الهيدرات (MgSO4*7H2O)Sigma-AldrichM1880
HEPESSigma-AldrichH3375
AdenosineSigma-AldrichA9251
D- (+)-GlucoseSigma-AldrichG8270
MannitolSigma-AldrichM4125 < / a >
التورينسيجما ألدريتشT0625
هيدروكسيد البوتاسيوم (KOH)سيجما ألدريتشP5958
كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم )سيجما ألدريتش< أ href = "http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/s7653?lang=it& ؛ المنطقة = تكنولوجيا المعلومات ">S7653 < / a >
كلوريد البوتاسيوم (KCl)سيجما ألدريتش< href = "http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/p9333?lang=it& ؛ region=IT">P9333
فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدة (Na2HPO4)Sigma-AldrichS7907 < / a>
بيكربونات الصوديوم (NaHCO3< / sub>)Sigma-AldrichS6297
بيكربونات البوتاسيوم (KHCO3)Sigma-Aldrich237205< / a>
بيروفات الصوديومسيجما ألدريتشP2256
2,3-Butanedione monoximeSigma-AldrichB0753 < / a>
هيدروكسيد الصوديوم (NaOH)سيجما-ألدريتش< href = "http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/s8045?lang=it& ؛ المنطقة = IT">S8045 < / a>
L-Glutamic acid أحادي البوتاسيوم ملح أحادي الهيدراتSigma-Aldrich49601
حمض البيروفيكسيجما-ألدريتش107360< / a>
3-حمض الهيدروكسي بوتيريكسيجما ألدريتش166898< / a>
الأدينوزين 5 & prime ؛ -ثنائي هيدرات ملح ثنائي الفوسفات ثنائي الفوسفات (K2< / sub>-ATP)سيجما ألدريتش< href = "http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/a8937?lang=it& ؛ region=IT">A8937
CreatineSigma-AldrichC0780
SuccinicAcid Sigma-AldrichS3674 < / a>
الإيثيلين جلايكول مكرر (2-أمينوإيثيل إيثر) -N ، N ، N ، N & Prime ؛ -tetraacetic acid (EGTA)Sigma-AldrichE0396
ألبومين من مصل الأبقارسيجما-ألدريتشA0281< / a>
كلوريد المغنيسيوم (MgCl2)سيجما-ألدريتشM8266
Collagenase من Clostridium histolyticum, Type VSigma-AldrichC9263 < / a>
البروتيناز ، البكتيري ، النوع الرابع والعشرونسيجما-ألدريتشP8038
محلول كلوريد الكالسيوم ، ~ 1 م في H2< / sub>OSigma-Aldrich21115< / a>
محلول كلوريد الكالسيوم 0.1 مسيجما ألدريتش53704
ميثان سولفونات البوتاسيومسيجما-ألدريتش 83000 < / a >
كاشف فلوفورتإنزو علوم الحياةENZ-52015
تركيز الحمل الكهربائي ، 100XLife TechnologiesP10020
نظام التروية السريعWarner InstrumentsVC-77SP
Amphotericin B القابل للذوبانسيجما ألدريتشA9528 < / a>
Multiclamp 700B مكبر للصوت التصحيح المشبكالجزيئية
Digidata 1440Aالجزيئية
pClamp10.0 الجزيئية
مخصصالجهاز مصنوع حسب الطلب في مختبرنا باستخدام أنابيب بلاستيكية ، مصبوب سيلجارد ومحرك ؛ تم وصفه بالتفصيل في الشكل 1C-1D وفي الشكل 7. يمكننا تقديم مزيد من التفاصيل إذا طلب ذلك.
مطاط أسطوانة سيليكون لفرش جهاز الهضمDow CorningSYLGARD & reg; 184
محرك دوار متغير السرعة لجهاز الهضمCrouzetCrouzet 178-4765
قالب للفرش الصبNA.ن.القالب مصنوع خصيصا من قضبان PTFE قياسية قطرها 2.5 سم.
الأجهزة الأجهزة جهاز هضم الأجهزة

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dow, J. W., Harding, N. G., Powell, T. Isolated cardiac myocytes. I. Preparation of adult myocytes and their homology with the intact tissue. Cardiovascular Research. 15, 483-514 (1981).
  2. Dow, J. W., Harding, N. G., Powell, T. Iso....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Human Ventricular CardiomyocytesCardiomyocyte IsolationVentricular MyocardiumEnzymatic DigestionPatch Clamp RecordingAction Potential MeasurementCalcium Transient AnalysisCardioplegic SolutionStromal Vascular FractionCell Suspension

Related Articles