$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
السكن الحيوان والقتل الرحيم: تم إيواء جميع الحيوانات المستخدمة في هذه المظاهرة في ظل ظروف خالية من مسببات الأمراض وفقا للمبادئ التوجيهية للجنة المؤسسي رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) والمعهد الوطني للصحة (NIH).
توفير الحيوانات مع معيار يصعب بيليه تشاو الفئران وعفوي المياه. الموت ببطء الحيوانات عبر وسيلة من خطوتين من الاختناق ثاني أكسيد الكربون، بضع الصدر الثنائية وفقا للبروتوكول قياسي من سان فرانسيسكو كما وافقت عليها IACUC. أداء اختبار النشاط الحيوي في غضون 24 ساعة من التضحية الحيوانية لتجنب تدهور الأنسجة.
1. إعداد وتشريح الفأر أو الفك الأسفل الفك
- إزالة الفك السفلي الفئران بقطع بلطف الأنسجة والأنسجة العضلية الغشائي المرفقات مع الحفاظ على الفك السفلي بأكمله، بما في ذلك عملية المنقاري وعملية لقمي (الشكل 1) 15.
- hemimandibles منفصلة بالسيارةقطع efully النسيج الليفي من الارتفاق الفك السفلي بشفرة المشرط.
ملاحظة: العمليات التاجية واللقمة، والفرع من الفك السفلي (الشكل 1) ينبغي إزالتها إذا انها تعرقل جسديا اختبار النشاط الحيوي من المولي الثانية 2. - قطع القواطع من دون تعريض غرفة اللب حتى لا تعوق التحميل من الرحى.
2. تحضير العينة لفي الموقع ضاغطة تحميل (الشكل 2)
- شل العينة على كعب الصلب باستخدام المواد التي هي أشد بكثير من العينة التجريبية قبل تحميله في الجهاز التحميل الموقع (الشكل 2A) في.
ملاحظة: تم استخدام ميثاأكريلات (PMMA) لشل حركة العينة في هذه الدراسة والزائدة، إن وجدت، وإزالتها باستخدام المستكشف الأسنان. - محاذاة سطح الإطباق من المولي (ق) من الفائدة بالتوازي مع القرص العينة فؤاد المعادن باستخدام حافة مستقيمة في كل منطائرات (أي إنسي-القاصي والشدق اللغات).
- إنشاء حوض بأداة حادة المحيطة الأضراس.
ملاحظة: يجب أن هذا الفضاء بمثابة "خندق" لاحتواء السائل الزائد والحفاظ على ترطيب الأنسجة أثناء التحميل في الموقع. - إعداد سطح الأسنان لبناء لمتحدة المركز (الشكل 2B) أو غريب الأطوار (الشكل 2C) التحميل باستخدام مركب الأسنان. حفر سطح الأسنان في المصالح مع 35٪ هلام حامض الفوسفوريك على سطح الإطباق لمدة 15 ثانية.
- شطف منمش جيدا بالماء منزوع الأيونات وتجفيف السطح باستخدام حقنة الهواء / الماء أو اسطوانة الهواء المضغوط. مع المستكشف، وانتشار قطرة من عامل الربط في الشرفات المفتوحة في طبقة رقيقة. علاج مركب مع ضوء علاج الأسنان.
ملاحظة: يجب أن يتم تنفيذ جميع الخطوات التي تنطوي على المركبة دون الضوء المباشر من مصباح. ان مثل هذه الظروف غير مرغوب فيه تسريع عملية البلمرة، وقد يزيد عدد الجياعد منع تحديد المكان المناسب للمركب. إضاءة الغرفة هو مقبول. - إزالة عامل الربط الزائدة من الأسنان المجاورة مع مشرط الغرامة أو شفرة حلاقة.
- وضع مركب الأسنان flowable على السطح بعد إعداد السطح وانتشاره في الأخاديد من المولي (ق) من الفائدة باستخدام المستكشف الأسنان.
- كشف مركب لعلاج الأسنان الخفيفة لمدة 30 ثانية.
- العفن وتراكم الإطباق من حوالي 3-4 مم باستخدام الراتنج المركب الأسنان، من الطائرة الإطباق من المولي (ق) من الفائدة وعلاج ضوء لمدة 30 ثانية.
- الحد الأعلى للتراكم مركب إلى سطح مستو مواز لتمكين نظام التحميل متناسقة عبر جميع العينات باستخدام حافة مستقيمة وقطعة عالية السرعة اليد.
ملاحظة: أثناء اختبار النشاط الحيوي، يجب أن يتم تخزين العينات الأخرى في تريس فوسفات حل مخزنة (TBS) مع 50 ملغ / مل البنسلين، الستربتوميسين و15.
3. تحميل الانجراف جهاز وصلابة، مادة الملكية التفريق القدرة، تحميل الموقع من الليفية المشتركة في
- تأمين العينة مع تراكم مركب على سندان مرحلة التحميل، واختبار للتحميل موحدة كما هو مبين في الشكل 2B.
- وضع ورقة يعبرون عنه على سطح المركب تليها تحميل العينة إلى حمولة محدودة للتحقق من مركزية أو غريب الأطوار التحميل (أرقام 2B و 2C).
- وضع Kimwipe غارقة TBS حول العينة لضمان عينة الماء. جعل الحوض الصغير حول العينة وملء مع TBS للحفاظ على الجهاز رطب أثناء التصوير.
- حمل الذروة ومعدل الإدخال النزوح في البرنامج Deben لضغط الرحى لحمل الذروة المرجوة بمعدل النزوح التالية الشلل في نصف الفك.
ملاحظة: يجب أن تتضمن قراءات نموذجية حمولة الرجعية كما يتم ضغط المواد مع مرور الوقت (حساسية تحميل محول = 0.1N). من الحمل لمرة والنزوح الوقت، ينبغي الحصول على منحنى الحمل التشريد للمواد مضغوطة 16-18. باستخدام البيانات التي تم جمعها من دورات التحميل، ويمكن أيضا أن تحدد الخصائص المختلفة للمشترك. ينبغي أن يحسب صلابة من المشترك من خلال اتخاذ المنحدر من الجزء خطي (حوالي الماضي 30٪ من البيانات) للمرحلة التحميل من الحمل مقابل منحنى الإزاحة 19.
4. تلطيخ من الأنسجة لينة، وPDL، مع حمض الفسفوتنغستيك (منطقة التجارة التفضيلية)
ملاحظة: لتعزيز الأشعة السينية التوهين المقابل، فإن PDL ينبغي ملطخة 5٪ لمنطقة التجارة التفضيلية حل 20.
- الردم منطقة التجارة التفضيلية حل تلطيخ إلى 1.8 مل نظيفة الزجاج carpule ووضع carpule تحميلها في حقنة.
- حقن محلول ببطء (5 دقيقة / carpule) في PDL الفضاء من الأسنان المجاورة لمنع الضرر الهيكلي للأنسجة اللثة المحيطة المولي من الفائدة.
ملاحظة: يجب أن الخطوات المذكورة أعلاه بيتم حقن ه المتكررة حتى حوالي 5 carpules كامل (9 مل) من الحل، وسمحت في التدفق إلى الأنسجة المحيطة بها. ويمكن أيضا أن العينات تكون غارقة بين عشية وضحاها هيأهم في حل PTA المتبقية (8 ساعات).
5. أوصت إعدادات المسح الضوئي μ-XCT
أداء م XCT مع إعدادات المسح التالية:
| التكبير الهدف | 4X، 10X |
| 1،800 الصور |
| الأشعة السينية أنبوب الجهد | 75 KVP (50 KVP منطقة التجارة التفضيلية لعينات الملون) |
| 8 W |
| التعرض التوقيت | ~ 8-25 ثانية * |
| ~ 4 ميكرومتر (الهدف 4X)، ~ 2 ميكرومتر (الهدف 10X) ** |
* وقت التعرض يمكن أن تختلف على أساس الهندسة والكثافة الضوئية للعينة والأشعة السينية أنبوب فوltage.
** بكسل القرار الفعلية تختلف قليلا استنادا إلى تكوين المصدر، عينة، وكاشف.