بروتوكول ذكرت هنا يسمح تقييم فعالية العلاج الضوئي (PDT) في خطوط الخلايا وتعظيم الاستفادة من إعدادات PDT قبل تطبيق العلاج في النماذج الحيوانية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
السامة للخلايا فعالية العلاج الضوئي في خلايا عظمية
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
في السنوات الأخيرة، كان هناك صعوبة في إيجاد علاجات أكثر فعالية ضد السرطان مع أقل آثار جانبية جهازية. بالتالي العلاج الضوئي هو نهج جديدة لعلاج أكثر انتقائية الورم.
العلاج الضوئي (PDT) أن يجعل من استخدام الضيائي غير سام (PS)، والتي، على تفعيل مع ضوء طول موجة محددة في وجود الأكسجين، وتولد الجذور الأكسجين التي تثير استجابة السامة للخلايا 1. على الرغم من موافقتها منذ ما يقرب من عشرين عاما من قبل ادارة الاغذية والعقاقير، وتستخدم في الوقت الحاضر PDT فقط لعلاج عدد محدود من أنواع السرطان (الجلد والمثانة) وأمراض nononcological (الصدفية، تقران سافع) 2.
والميزة الرئيسية لاستخدام PDT هو القدرة على إجراء المعالجة المحلية، والذي يمنع الآثار الجانبية الجهازية. وعلاوة على ذلك، فإنه يسمح علاج الأورام في مواقع حساسة (مثلا حول الأعصاب أو الأوعية الدموية). هنا، وهو intraoperatويعتبر تطبيق إيف من PDT في عظمية (OS)، ورم العظام، لاستهداف أقمار الورم الرئيسي خلفها الورم في الأنسجة المحيطة بعد استئصال الورم الجراحية. يهدف العلاج إلى تقليل عدد تكرار وإلى الحد من المخاطر ل(بعد عملية) ورم خبيث.
في هذه الدراسة، فإننا نقدم في المختبر إجراءات PDT لإنشاء إعدادات PDT الأمثل لعلاج فعال من خطوط الخلايا المستخدمة على نطاق واسع OS التي تستخدم لإنتاج الأمراض التي تصيب البشر في نماذج الماوس OS intratibial راسخة. تم فحص امتصاص للPS mTHPC مع وأثار طيفي والضيائية مع ضوء الليزر الإثارة من mTHPC في 652 نانومتر للحث على موت الخلايا المقررة مع WST-1 فحص وفرز الخلايا على قيد الحياة. تقنيات إنشاء تمكننا من تحديد إعدادات PDT الأمثل للدراسات المستقبلية في النماذج الحيوانية. فهي أداة سهلة وسريعة لتقييم فعالية PDT في الجسم الحي.
المقدمة
الدولة اليوم من العلاج فن عظمية (OS)، ورم العظام الأولية، ويشمل مجموعة من المحافظين الجدد العلاج الكيميائي المواد المساعدة والجراحة. وكشف هذا نظام المعالجة زيادة في معدل بقاء المرضى الذين يعانون من مرض المترجمة من حوالي 20٪ قبل استخدام العلاج الكيميائي، لحاليا بين 60-70٪ 3، 4. ومع ذلك، في العقدين الأخيرين، فقد استقر على البقاء الإجمالي من المرضى يعانون من مرض OS المحلية 4، 5. علاوة على ذلك، 30-40٪ من هؤلاء المرضى الانتكاس في غضون 3 سنوات بعد التشخيص والاستمرار المرضى الذين يعانون من المرض المنتشر أن يكون لها بقاء الفقراء من 20-30٪ 4، 6، 7. لتحسين نتائج هؤلاء المرضى، والحاجة إلى تطوير استراتيجيات....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. مقارنة بين امتصاص من mTHPC في أدنى المعنية ودرجة عالية من النقيلي وملتحقا 143B OS خطوط الخليوي
- إعداد خلية ثقافة المتوسط تحتوي على DMEM، هام F12، والحرارة المعطل مصل العجل الجنين في نسبة 4.5:4.5:1.
ملاحظة: تم حل صياغة الليبوسومال من PS mTHPC في الماء عند تركيز النهائي من 1.5 ملغ / مل mTHPC. - لوحة 0.2 × 10 6 خلايا وملتحقا 143B / جيد في 6 لوحات جيدة (يثلث لكل حالة)، والسماح للخلايا الالتزام بين عشية وضحاها.
ملاحظة: عدد لابد من تعد....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
مع تقنيات ذكرت هنا، ونحن التحقيق PDT مقرها mTHPC في خلايا OS الإنسان. أولا، تم التحقيق في الوقت وامتصاص الجرعة تعتمد على mTHPC في ملتحقا النقيلي منخفضة والمنتشر في غاية خطوط الخلايا 143B OS. يمكن تقييم mTHPC امتصاص عن طريق قياس مضان من mTHPC مع معمل مضان (الشكل 2، مستنسخة بإذن من ريدي وآخرون 11). ويوضح الشكل 2A امتصاص mTHPC بطريقة تعتمد الوقت. كثافة مضان لتعليق الخلية يمثل مستويات الخلايا من mTHPC. يوضح الشكل 2B
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
لتحقيق السمسة الأمثل ردا على PDT، لا بد من اختيار الحق وإعدادات ضوء الليزر ومرات الحضانة. الإجراءات الموصوفة هنا هي متسقة وفعالة لتحديد امتصاص PS وقياس السمية الخلوية PDT يتسبب في المختبر. باستخدام موجات الامتصاص النوعي للPS mTHPC، يمكن تحديد امتصاص PS الخلوية بطريقة مباشرة، ويمكن تفعيل PS لتوليد أنواع الأكسجين التفاعلية السامة للخلايا.
باستخدام هذا الإعداد في المختبر، وجميع المعلمات مثل تركيز P.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب تعلن أي مصالح أو تضارب المصالح المالية المتنافسة.
شكر وتقدير
فإن الكتاب أود أن أشكر biolitec بحوث محدودة (جينا، ألمانيا) لتتكرم تزويدنا صياغة الليبوسومال mTHPC، مع شكر خاص لسوزانا GRAFE وأرنو Wiehe لمساعدتهم والخبرة التقنية. نحن أيضا نود أن نشكر كيرستين ريدي، الذي ولدت على جزء كبير من النتائج وكان coresponsible لنشره 11.
وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من Schweizerischer VEREIN Balgrist، جامعة زيوريخ، وزيوريخ Krebsliga فضلا عن منحة من والتر L. ومؤسسة جوانا وولف، زيوريخ، سويسرا ومنحة من EuroNanoMed ERA-NET / الجبهة الوطنية الصومالية السويسرية المؤسسة الوطنية للعلوم 31NM30-131004/1. وأيد هذا العمل أيضا من قبل H....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| DMEM | PAA GmbH ، فرايبورغ ، ألمانيا | E15-883 | |
| HAM F12 | PAA GmbH ، فرايبورغ ، ألمانيا | E15-817 | |
| مصل ربلة الساق الجنينية المعطلة | بالحرارة GIBCO ، بازل ، سويسرا | 10500-064 | |
| mTHPC | biolitec Research GmbH ، جينا ، ألمانيا | لأن هذه التركيبة الشحمية تنشأ من R & D لا يوجد رقم كتالوج متاح في الوقت الحالي. مخزون: 1.5 مجم / مل ؛ متوفر في خليط 9: 1 من ثنائي بالميتويل فوسفاتيديل كولين (DPPC) وثنائي بالميتويل فوسفاتيديل جلسرين (DPPG ؛ نقاء >99٪) | |
| قارئ لوحة Spectramax Gemini XS | الأجهزة الجزيئية ، Sunnyvale ، CA | ID # 861 | |
| مجهر Zeiss Observer.Z1 | Axio Observer ، Axio Vision الإصدار 4.6.3 SP1 ، جينا ألمانيا | ||
| Ceralas PDT 652 نانومتر ليزر | biolitec AG ، جينا ، ألمانيا | LD652nm2W400u | |
| كاشف التيترازوليوم القابل للذوبان في الماء (WST) | Roche Diagnostics AG ، روتكروز ، سويسرا | 1644807 |
المراجع
- Juarranz, A., Jaen, P., Sanz-Rodriguez, F., Cuevas, J., Gonzalez, S. Photodynamic therapy of cancer. Basic principles and applications. Clin. Transl. Oncol. 10, 148-154 (2008).
- Agostinis, P., et al. Photodynamic therapy of cancer: an update. CA Cancer. 61, 250-281 (....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
