متشابك N-ميثيل مد اسبارتاتي مستقبلات (NMDARs) تلعب دورا حاسما في اللدونة متشابك وبقاء الخلية إشارات حين تفعيل NMDARs extrasynaptic يمكن أن تؤدي إلى تنكس عصبي وموت الخلايا. هذه التغيرات تعتمد على / النشاط المنظم لرقابة مشددة التعبير الجيني يتوقف وبالتالي تتطلب التواصل المستمر بين نقاط الاشتباك العصبي أو التشعبات وتنشيط نواة 7. خطة عمل البحر المتوسط تحركات ERK1 / 2 هي المستجيبات المصب من NMDARs متشابك الإشارات ويشاركون في NMDAR-يسببها تفعيل التعبير الجيني، في حين يشير عبر NMDAR extrasynaptic لا يوجد لديه أو لها تأثير كابح بشكل خاص على ERK1 / 2 النشاط 8،11.
هناك عدد من البروتينات التي ثبت أنها مكوكية بين التشعبات القاصي والنواة. العديد من هذه البروتينات تحتوي على إشارة توطين النووية ويتم نقلها بنشاط على طول microtubuli في داينين وبطريقة تعتمد على importin إلى النواة 6،9. Interestinglذ، بعض هذه رسل عبور فقط إلى النواة في الاستجابة للمؤثرات متشابك محددة. على سبيل المثال، التي يسببها النقل الوراء من دوري AMP عنصر استجابة ملزمة البروتين 2 (CREB2) من خلال LTD الكيميائي ولكن ليس LTP 12. المحلية التي تعتمد على التحفيز NMDAR متشابك يقود التنظيم CREB coactivator النسخي (CRTC1) في النواة، وهي عملية النبات، التي تشارك في اللدونة الحصين على المدى الطويل 4. وقد تبين مؤخرا أن رسول البروتين يعقوب translocates إلى النواة بعد كل وتفعيل NMDAR متشابك وextrasynaptic وينظم CREB النسخ الجيني يعتمد 5. يتم ترميز أصل متشابك أو extrasynaptic للإشارة إلى تعديل ما بعد النقل يعقوب. النشاط متشابك يدفع ERK1 / 2 الفسفرة تعتمد يعقوب في سيرين حاسمة في الموقف 180 (pJacobS 180) الذي هو شرط مسبق لاحق إزفاء إلى النواة في الثقافة الحصين الابتدائية. وعلاوة على ذلك، طن الخلايا العصبية CA1 من شرائح الحصين الحادة pJacobS 180 translocates إلى النواة بعد شافر ضمانات LTP لكن ليس LTD 1،10. pS180 يعقوب يؤدي إلى زيادة التعبير عن الجينات المرتبطة اللدونة وهذا التعبير الجيني يغذي العودة إلى وظيفة متشابك. في تناقض حاد، يعقوب أن translocates إلى النواة بعد لم يتم تفعيل فسفرته NMDARs extrasynaptic في Ser180 و قد تترافق مع مجمع بروتين مختلفة في النواة مما تسبب في "CREB ايقافها" وتراجع من الاتصالات متشابك 10.
أجريت معظم الدراسات المنشورة على استيراد النووي-synapto النووي البروتين رسول في الثقافات الأولية العصبية فصلها. لذا سيكون من المثير للاهتمام أن نرى ما اذا كان يمكن تكرار هذه النتائج في أكثر أهمية من الناحية الفسيولوجية الظروف باستخدام شرائح قرن آمون حيث الربط وظيفة الخلايا العصبية هي أفضل بكثير الحفاظ عليها. هنا نقدم بروتوكول الأمثل لتقييم LTP-ديمعلقة النبات النووي من رسل البروتين immunoblotting. هذا الأسلوب هو أيضا مناسبة لتحليل النشاط الفسفرة تعتمد البروتينات في جزء نووي بدائي. على وجه التحديد، والبروتوكول الحالي يتضمن إعداد الحادة شرائح CA1 الحصين، التعريفي، وتسجيل LTP. بعد ذلك، يتم تشريح المنطقة CA1 مجهريا لعزل المنطقة حفز. ونحن معا وتعديل البروتوكول لعزل النووية التي تقدمها CellLytic النووية استخراج كيت مع التغييرات التي أدخلها تشاو وزملاؤه 17. ويشمل الإجراء الأمثل تحلل من المناطق CA1 تشريح في المخزن منخفض التوتر السماح تورم الخلية وإطلاق نوى. يمكن تحديد تحلل الخلايا وأنويتها مورفولوجيا عن طريق الفحص المجهري. ويتحقق تخصيب اليورانيوم بواسطة الطرد المركزي خطوة قصيرة. Immunoblotting مع تحليل الأجسام المضادة ضد NeuN وNSE2، وعلامات محددة من الكسور النووية أو عصاري خلوي، يشير إلى أن هذا النهج يمكن أن تستخدم بسرعةوبروتوكول استنساخه لعزل هذه الكسور التحت خلوية ودراسة تعديلات ما بعد النقل عطوب جدا مثل البروتين الفسفرة. بالإضافة إلى ذلك، هذا الأسلوب هو مفيد للعينات الأنسجة الصغيرة المستمدة من مناطق CA1 تشريح شرائح قرن آمون، ويمكن استخدامها في تركيبة لالمناعية من شرائح قرن آمون.