يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

عزل CA1 النووي المخصب الكسور من شرائح الحصين لدراسة تعتمد على نشاط استيراد النووية من رسول البروتينات Synapto النووية

11.6K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/51310

⸱

أغسطس 10, 2014

 ,  ,  ,  , 
1RG Neuroplasticity, Leibniz Institute for Neurobiology, 2Department of Cell Biology, Utrecht University

في هذه المقالة

ملخص

نحن نقدم بروتوكول مفصلة لتحريض التقوية على المدى الطويل في المنطقة CA1 من الحصين والعزلة اللاحقة الكسور التخصيب النووية من منطقة tetanized للشريحة. ويمكن استخدام هذه الطريقة لتحديد النشاط يعتمد استيراد البروتين النووي في النماذج الخلوية التعلم والذاكرة.

الملخص

دراسة نشاط البروتين يعتمد التعبير، إزفاء التحت خلوية، أو الفسفرة ضروري لفهم الآليات الخلوية الكامنة وراء اللدونة متشابك. تحظى بقبول واسع التقوية طويلة الأمد (LTP) والاكتئاب الطويل الأمد (LTD) المستحثة في شرائح الحصين الحادة كنماذج الخلوية التعلم والذاكرة. هناك العديد من الدراسات التي تستخدم التصوير الخلية المناعية أو النهج الحية لتصور النشاط ديناميات البروتين تعتمد. لكن هذه الطرق تعتمد على مدى ملاءمة الأجسام المضادة للمناعية أو overexpression من البروتينات الموسومة مضان في الخلايا العصبية واحدة. Immunoblotting من البروتينات هو طريقة بديلة توفير تأكيد مستقل للنتائج. العامل المحدد الأول في إعداد الكسور التحت خلوية من شرائح قرن آمون tetanized الفردية هو كمية قليلة من المواد. ثانيا، إجراء معالجة أمر بالغ الأهمية لأن التلاعب حتى قصيرة جدا وبسيطة للترتعيشان شرائح قد تتسبب في تنشيط بعض أجهزة الطرد المركزي الإشارات. نحن هنا وصف لسير العمل الأمثل من أجل الحصول على كمية كافية من نسبة التخصيب النووي من النقاء ما يكفي من المنطقة CA1 من شرائح الحصين الحادة من دماغ الفئران. كمثال التمثيلي وتبين لنا أن شكل فسفرته للsynapto النووي البروتين رسول ERK1 / 2 يعقوب translocates بنشاط إلى النواة على تحريض LTP ويمكن الكشف في جزء التخصيب النووي من الخلايا العصبية CA1.

المقدمة

متشابك N-ميثيل مد اسبارتاتي مستقبلات (NMDARs) تلعب دورا حاسما في اللدونة متشابك وبقاء الخلية إشارات حين تفعيل NMDARs extrasynaptic يمكن أن تؤدي إلى تنكس عصبي وموت الخلايا. هذه التغيرات تعتمد على / النشاط المنظم لرقابة مشددة التعبير الجيني يتوقف وبالتالي تتطلب التواصل المستمر بين نقاط الاشتباك العصبي أو التشعبات وتنشيط نواة 7. خطة عمل البحر المتوسط ​​تحركات ERK1 / 2 هي المستجيبات المصب من NMDARs متشابك الإشارات ويشاركون في NMDAR-يسببها تفعيل التعبير الجيني، في حين يشير عبر NMDAR extrasynaptic لا يوجد لديه أو لها تأثير كابح بشكل خاص على ERK1 / 2 النشاط 8،11.

هناك عدد من البروتينات التي ثبت أنها مكوكية بين التشعبات القاصي والنواة. العديد من هذه البروتينات تحتوي على إشارة توطين النووية ويتم نقلها بنشاط على طول microtubuli في داينين ​​وبطريقة تعتمد على importin إلى النواة 6،9. Interestinglذ، بعض هذه رسل عبور فقط إلى النواة في الاستجابة للمؤثرات متشابك محددة. على سبيل المثال، التي يسببها النقل الوراء من دوري AMP عنصر استجابة ملزمة البروتين 2 (CREB2) من خلال LTD الكيميائي ولكن ليس LTP 12. المحلية التي تعتمد على التحفيز NMDAR متشابك يقود التنظيم CREB coactivator النسخي (CRTC1) في النواة، وهي عملية النبات، التي تشارك في اللدونة الحصين على المدى الطويل 4. وقد تبين مؤخرا أن رسول البروتين يعقوب translocates إلى النواة بعد كل وتفعيل NMDAR متشابك وextrasynaptic وينظم CREB النسخ الجيني يعتمد 5. يتم ترميز أصل متشابك أو extrasynaptic للإشارة إلى تعديل ما بعد النقل يعقوب. النشاط متشابك يدفع ERK1 / 2 الفسفرة تعتمد يعقوب في سيرين حاسمة في الموقف 180 (pJacobS 180) الذي هو شرط مسبق لاحق إزفاء إلى النواة في الثقافة الحصين الابتدائية. وعلاوة على ذلك، طن الخلايا العصبية CA1 من شرائح الحصين الحادة pJacobS 180 translocates إلى النواة بعد شافر ضمانات LTP لكن ليس LTD 1،10. pS180 يعقوب يؤدي إلى زيادة التعبير عن الجينات المرتبطة اللدونة وهذا التعبير الجيني يغذي العودة إلى وظيفة متشابك. في تناقض حاد، يعقوب أن translocates إلى النواة بعد لم يتم تفعيل فسفرته NMDARs extrasynaptic في Ser180 و قد تترافق مع مجمع بروتين مختلفة في النواة مما تسبب في "CREB ايقافها" وتراجع من الاتصالات متشابك 10.

أجريت معظم الدراسات المنشورة على استيراد النووي-synapto النووي البروتين رسول في الثقافات الأولية العصبية فصلها. لذا سيكون من المثير للاهتمام أن نرى ما اذا كان يمكن تكرار هذه النتائج في أكثر أهمية من الناحية الفسيولوجية الظروف باستخدام شرائح قرن آمون حيث الربط وظيفة الخلايا العصبية هي أفضل بكثير الحفاظ عليها. هنا نقدم بروتوكول الأمثل لتقييم LTP-ديمعلقة النبات النووي من رسل البروتين immunoblotting. هذا الأسلوب هو أيضا مناسبة لتحليل النشاط الفسفرة تعتمد البروتينات في جزء نووي بدائي. على وجه التحديد، والبروتوكول الحالي يتضمن إعداد الحادة شرائح CA1 الحصين، التعريفي، وتسجيل LTP. بعد ذلك، يتم تشريح المنطقة CA1 مجهريا لعزل المنطقة حفز. ونحن معا وتعديل البروتوكول لعزل النووية التي تقدمها CellLytic النووية استخراج كيت مع التغييرات التي أدخلها تشاو وزملاؤه 17. ويشمل الإجراء الأمثل تحلل من المناطق CA1 تشريح في المخزن منخفض التوتر السماح تورم الخلية وإطلاق نوى. يمكن تحديد تحلل الخلايا وأنويتها مورفولوجيا عن طريق الفحص المجهري. ويتحقق تخصيب اليورانيوم بواسطة الطرد المركزي خطوة قصيرة. Immunoblotting مع تحليل الأجسام المضادة ضد NeuN وNSE2، وعلامات محددة من الكسور النووية أو عصاري خلوي، يشير إلى أن هذا النهج يمكن أن تستخدم بسرعةوبروتوكول استنساخه لعزل هذه الكسور التحت خلوية ودراسة تعديلات ما بعد النقل عطوب جدا مثل البروتين الفسفرة. بالإضافة إلى ذلك، هذا الأسلوب هو مفيد للعينات الأنسجة الصغيرة المستمدة من مناطق CA1 تشريح شرائح قرن آمون، ويمكن استخدامها في تركيبة لالمناعية من شرائح قرن آمون.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. إعداد الحاد الحصين شرائح من دماغ الفئران الكبار

  1. تخدير الفئران مع isoflurane. تنبيه: تنفيذ الإجراء باستخدام exicator مغلق، لا يستنشق الأيزوفلورين. تأكد من أن الحيوان هو تخدير تماما.
  2. قطع رأس الفئران، وسرعان ما عزل الدماغ، وتزج به في precarbonated (95٪ O 2/5٪ CO 2 خليط الغاز) الجليد الباردة حل Gey في (تكوين في ملي: 130 كلوريد الصوديوم، و 4.9 بوكل، 1.5 CaCl 2 · 2H 2 O 0.3 MgSO 4 · 2H 2 O، 11 MgCl 2 · 6H 2 O، 0.23 KH 2 PO 4، 0.8 نا 2 هبو 4 · 7H 2 O، 5 الجلوكوز · H 2 O، 25 HEPES، 22 NaHCO 3، ودرجة الحموضة 7.32) لمدة 30 دقيقة 1،2،10،16.
  3. إزالة المخيخ وجزء من القشرة المخية الأنفية الداخلية. فصل نصفي الكرة الأرضية القشرية مع خفض منتصف السهمي، ثم وضع كل نصف الكرة أسفل على سطحه وسطي. جعل بعد ذلكو50-70 ° قطع (50-70 درجة عرضية) على طول حافة الظهرية كل نصف الكرة 13،14.
  4. الغراء كل نصف الكرة مع سطح قطع طازجة على منصة تشريح للنظام باجتزاء. يجب تغطية منصة بواسطة precarbogenated حل Gey في الجليد الباردة.
  5. قطع 350 ميكرون 50-70 ° شرائح عرضية من الجانب الأمامي إلى الخلفي باستخدام vibratome تعديلها للحد من محور ض التذبذب. سوف تشكيل الحصين، والقشور مرفدي المخية الأنفية الداخلية، فضلا عن القشور التي تقع ظهراني جانبي لالحصين أن تكون جزءا من شرائح المستخدمة في التجارب 13،14.
  6. نقل شرائح الحصين إلى U-شكل والمغمورة نوع الحاضنة واحتضان لمدة لا تقل عن 2 ساعة عند 32 درجة مئوية مع carbogenated السائل النخاعي الاصطناعي (ACSF يحتوي في ملي: 110 كلوريد الصوديوم، و 2.5 بوكل، 2.5 CaCl 2 · 2H 2 O، 1.5 MgSO 4 · 2H 2 O، 1.24 KH 2 PO 4، 10 الجلوكوز · H 2O، 27.4 NaHCO 3، ودرجة الحموضة 7.3) 1،2،10،16.

2. وضعية أقطاب، الاساس تسجيل، وتحريض LTP

  1. نقل شريحة الحصين إلى الغرفة المغمورة نوع تسجيل شنت تحت المجهر. يروي (6-7 مل / دقيقة) مع ACSF carbogenated لا يقل عن 30 دقيقة في 32 درجة مئوية.
  2. إعداد الميكروية الشعرية زجاجية مملوءة ACSF (المقاومة هي غيض MΩ 3-5).
  3. وضع الميكروية زجاجية مملوءة ACSF في الألياف CA1 شافر-ضمانات لتحفيز وفي المشععة CA1 الطبقة لfEPSP تسجيل 1،2،10 (الشكل 2). المسافة بين الأقطاب يجب أن يكون حوالي 300 ميكرون.
  4. استحضار الحقل مثير بعد المشبكي إمكانيات (fEPSPs) من خلال تحفيز ألياف شافر-ضمانات مع نبضات الحالية مستطيلة ثنائية الطور (200 ميللي ثانية / قطبية) في مجموعة من 3-4 V.
  5. أداء أقصى اختبار التحفيز عن طريق قياس INPالعلاقة التحرير والمخرجات وتحدد قوة التحفيز إلى 40٪ من القيم fEPSP المنحدر القصوى التي تم الحصول عليها وابقائها ثابتة طوال التجربة.
  6. بدء تسجيل خط الأساس لمدة 15 دقيقة على الأقل بعد أقصى اختبار التحفيز. قياس الاستجابات لاختبار محفزات كل دقيقة في كافة مراحل التجربة. أداء التسجيلات الأساسية مع التحفيز التردد المنخفض.
  7. تسجيل خط الأساس لمدة 30 دقيقة على الأقل.
  8. لوقت متأخر من LTP تحريض تطبيق عالية التردد 100 هرتز تكزيز تتألف من ثلاثة قطارات التحفيز 1 ثانية عند 100 هرتز مع فاصل زمني intertrain 5 دقائق. لزيادة مجال التحفيز داخل المنطقة CA1 5 ميكرومتر bicuculline يمكن غسلها في 2 دقيقة قبل تكزيز ويجب غسلها على الفور بعد تكزيز الماضية.

3. جمع شرائح بعد تحريض LTP والتقط التجميد

  1. توقف LTP تسجيل 2 دقيقة أو 30 دقيقة بعد ثلاثة قطارات من التحفيز كزازي حمل في وقت متأخر من LTP.
    2. إزالة الأقطاب وسرعة نقل شريحة في الصعود إلى منصة معدنية precold وضعت على الثلج الجاف. كرر الإجراء لشريحة تحكم يوضع في حاضنة على شكل حرف U. تنبيه: استخدام القفازات أثناء العمل مع الثلج الجاف.
  2. جمع كل شريحة في أنبوب 1.5 مل وتخزينها في -80 درجة مئوية.

4. عزل المخصب الكسور النووية من المنطقة CA1 من الحصين

  1. أخذ 1.5 مل أنابيب إيبندورف مع شرائح المجمدة من -80 ° C والاحتفاظ بها على الجليد.
  2. إضافة 0.5 مل من TBS العازلة التي تحتوي على الأنزيم البروتيني الطازجة الباردة (PI) والفوسفاتيز (PS) مثبطات، في أنبوب. احتضان لمدة 2-3 دقيقة ونقل إلى stereomicroscope. تنبيه: استخدام القفازات الواقية ومعطف المختبر بينما كان يعمل مع PI وPS.
  3. تشريح المنطقة الهرمية CA1 من الطبقة الحصين باستخدام اثنين من الإبر. استخدام إبرة واحدة لعقد شريحة تحت stereomicroscope والإبرة الثانية لقطع المنطقة CA1.
  4. جمع CA تشريح1 مناطق من 5 شرائح (لكل مجموعة) في أنبوب جديد 1.5 مل تحتوي على 50 ميكرولتر تحلل العازلة (1X منخفض التوتر تحلل العازلة التي تحتوي في ملي: 10 HEPES، 1.5 MgCl 2، 10 بوكل، ودرجة الحموضة 7.9، مع PI وPS). لاحظ أن هذه الكمية من المواد ستكون كافية لتشغيل immunoblots 2-3.
  5. التجانس الأنسجة التي جمعتها دقيق يصل pipetting لوهبوطا. استخدام ماصة 200 ميكرولتر. احتضان المحللة على الجليد لمدة 5-7 دقيقة للسماح للخلايا لتنتفخ.
  6. تأخذ 2 ميكرولتر من المحللة، وانخفاض على شريحة مجهرية، وتصور تورم الخلايا تحت المجهر حقل مشرق. مع تورم السليم للخلايا تظهر نواة جولة وهياكل سليمة.
  7. جمع 20 ميكرولتر من العينة في أنبوب 1.5 مل جديدة باسم 'جزء جناسة. إضافة 8 ميكرولتر من تغيير طبيعة 4x وSDS عينة العازلة.
  8. الطرد المركزي لست] المتبقية في 11،000 دورة في الدقيقة لمدة 1 دقيقة.
  9. جمع بعناية طاف من أعلى ('جزء عصاري خلوي')، آرansfer في أنبوب جديد وإضافة 20 ميكرولتر من العينة 4X العازلة.
  10. Resuspend وبيليه في 60 ميكرولتر من العازلة منخفض التوتر وإضافة 20 ميكرولتر من 4x وعينة العازلة. ويشار إلى هذا الكسر ك "جزء التخصيب النووي".
  11. جناسة، عصاري خلوي، والكسور التخصيب النووية يمكن تخزينها في -20 درجة مئوية أو -80 درجة مئوية لمدة immunoblotting لاحق.

5. Immunoblotting نصف كمي للSynapto البروتينات النووية

  1. Defreeze العينات وسلقها لمدة 5 دقائق عند 95 درجة مئوية.
  2. تأخذ 5 ميكرولتر من كل جزء وتحديد تركيز البروتين بواسطة amido اختبار أسود أو اختبار BCA.
  3. تحميل كمية مساوية من عينات البروتين من جناسة، والكسور حشوية والنووية المخصب على SDS-PAGE. ينبغي أن توضع عينات من السيطرة وشرائح LTP على نفس هلام للمقارنة المباشرة.
  4. تنفيذ إجراء النشاف الغربي القياسية (يوصى نقل الرطب).
  5. بحث الأغشية مع تي انه الأضداد في الاختيار. في وقت لاحق من نفس البقع (أو نفس العينات بالتوازي) يمكن بحثها مع علامة حشوية - enolase2 الخلايا العصبية محددة (NSE2) وعلامة النووية - NeuN والأجسام المضادة -actin كما تحكم التحميل.

تحليل البيانات 6.

  1. كفاءة LTP الاستقراء يمكن تحليلها بواسطة برنامج Clampfit. تمت مقارنة متوسط ​​المنحدر من التسجيلات الأساسية مع المنحدرات بعد تكزيز باستخدام اتجاهين أنوفا، ف <0.05 اعتبر اختلافا كبيرا. وقد تم تصوير القيم المنحدر fEPSP في المخططات كما يعني ± SEM
  2. لتقدير حجم immunoblots والمسح إما فيلم autoradiographic وتحليل كثافة متكاملة من العصابات البروتين يماغيج أو العصابات مضان مع نظام Licor. يجب تطبيع قيم عصابات مناعيا لمراقبة التحميل والنشاف. للمقارنة بين السيطرة والجماعات LTP على nonparametrical مان ويتني U للتجارب يمكن استخدامها.
اسم المخزن المؤقت كاشف التركيز (ملم) كمية التعليقات / الوصف
Gey في الحل (درجة الحموضة: 7.3 ~ 7.4) كلوريد الصوديوم 130 7.6 ز الترشيح العقيمة
1،000 مل بوكل 4.9 0.37 ز
CaCl 2 · 2H 2 O 1.5 0.22 ز
MgSO 4 · 2H 2 O 0.3 0.0739 غرام
MgCl 2 · 6H 2 O 11 2.24 ز
KH 2 PO 4 0.23 0.0313 غرام
نا 2 هبو 4 · 7H 2 O 0.8 0.2145 غرام
الجلوكوز · H 2 O 5 0.9909 غرام
HEPES 25 5.96 ز
NaHCO 3 22 1.85 ز
ACSF (الرقم الهيدروجيني: 7.3 ~ 7.4) كلوريد الصوديوم 110 6.428 غرام الترشيح العقيمة
1،000 مل بوكل 2.5 0.1865 غرام
CaCl 2 · 2H 2 O 2.5 0.368 غرام
MgSO 4 · 2H 2 O 1.5 0.370 غرام
KH 2 PO 4 1.24 0.169 غرام
الجلوكوز · H 2 O 10 1.9817 غرام
NaHCO 3 27.4 2.3 غرام
1X ناقص التوتر العازلة (درجة الحموضة: 7.9) HEPES 10 0.23 ز
100 مل MgCl 2 · 6H 2 O 1.5 0.0304 غرام
بوكل 10 0.07455 غرام
بطانة الخلايا = "0" CELLSPACING = "0">

الجدول 1. المخازن.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

لقد أظهرنا سابقا أن للsynapto النووي البروتين رسول يعقوب يتراكم في النواة بعد تحريض LTP لكن ليس LTD 1. وعلاوة على ذلك، إزفاء يعقوب بعد التحفيز متشابك يتطلب تفعيل MAPK ERK1 / 2 و الفسفرة يعقوب في Ser180 (الشكل 1). فسفرته يعقوب translocates إلى النواة بطريقة تعتمد على importin ويمكن الحفاظ على الدولة فسفرته على مدى فترات طويلة من الزمن من قبل بالتعاون مع خيوط وسيطة αinternexin 15 (الشكل 1). الدولة-الفوسفات يعقوب مهمة للتعبير عن...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الخطوات المذكورة في البروتوكول فوق إرشادات كيفية تحضير شرائح الحصين الحادة من الشباب أو الكبار الفئران، لحث وسجل LTP، تشريح بسرعة منطقة حفز شريحة، وإعداد جزء التخصيب النووي لدراسة نشاط ديناميات البروتين تعتمد. هذا النهج مستمد من مزيج من عدة أساليب مختلفة تستخدم بشكل مستقل عن بعضها البعض. نحن الأمثل لسير العمل وتوفير التفاصيل الكافية للمبتدئين لإقامة التجارب الخاصة بها لدراسة إعادة توزيع التحت خلوية من البروتينات على تحريض LTP. كمثال علينا أن نبرهن على شكل الراحل LTP الحث على تراكم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم تمويل هذا العمل من قبل DFG (SFB 779 TPB8 ، Kr1879 / 3-1 MRK) ، منحة DIP (MRK) ، الاتحاد الأوروبي FP7 MC-ITN NPlast (MRK) ، مركز علوم الدماغ السلوكية (CBBS ، Sahsen-Anhalt) ، (AK و SB) ، MM حاصلة على زمالة طويلة الأجل من المنظمة الأوروبية للبيولوجيا الجزيئية (EMBO) (EMBO ALTF 884-2011) وماري كوري IEF.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

recodes < / strong>فأر فأر
قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Equipment< / strong>
CED 1401 AD / DA محولCambridge Electronics Design ، المملكة المتحدة
Stereomicroscope< / a>Leica S4E ، ألمانيا
VibrotomeLeica VT1000S ، ألمانيا
محفز النبض المعزولAM الأنظمة ، الولايات المتحدة الأمريكيةموديل 2100
جهاز طرد مركزيحراري علمي
نظام SDS-PAGEBiorad
CoolerJulabo
مجهر المجال الساطعنيكون Eclipse TS100
حاضنة ثقافة الخليةThermo Electron Corporation
MicromanipulatorLuigs & أمبير Neumann ، SM-5 ، ألمانيا
غرفة النشاف ومورد الطاقة الكهربائيةHoefer Scientific Instruments ، سان فرانسيسكو ، كاليفورنيا
غرفة تسجيل من النوع المغمورحسب الطلب
على شكل حرف U وحاضنة من النوع المغمور   ؛حسب الطلب
مقص
مشرط
رقيقة
ماصة
طبق ثقافة بلاستيكي   ؛
حقنة
NaClRothArt.-Nr.3957.1&ge ؛ 99.5٪ ، PA ، ACS ، ISO
KClRothArt.-Nr.6781.1& ge ؛ 99.5٪ ، سنويا ، ACS ، ISO
CaCl 2< / sub> middot ؛ 2H2OMerck1.02382.0500pro analysis
MgSO4· 2H2OMerck5886.05pro analysis
MgCl2· 6H2OAppliChemCAS-NO: 7791-18-6; EC-NO: 2320946للبيولوجيا الجزيئية
KH2PO4Merck12034.025للبيولوجيا الجزيئية
Na2HPO4& middot; 2H2OMerck1.06574.1000
جلوكوز نقي إضافي & middot; H2< / sub>ORothArt.-Nr.6887.1للبيولوجيا الجزيئية
HEPESRothArt.-Nr.9105.4PUFFERAN, & ge ; 99.5٪ سنويا
NaHCO3< / sub>Merc1.06329.1000التحليل الاحترافي
كوكتيل مثبط الإنزيمRoche
PhosphostopRoche
BicucullineTocris Bioscience
IsofluraneBaxter
antibodies < / strong>
الأجسام المضادة الأوليةرقم كتالوجالشركةالأنواع
pJac-s180أرنب Biogenes(مخفف 1: 100)
NeuNMiliporeMAB377(مخفف 1: 1،000) أرنب
إشارات خليةNSE D20H2(مخفف 1: 1،000)
بيتا أكتينسيجماA-5441(مخفف 1: 5،000)
الأجسام المضادة الثانويةرقم كتالوجالشركةالأنواع
IgG HRP المترافقDAKOالماعز المضاد للفأر (1: 5،000)
IgG HRP المترافقNEBالماعز المضاد للأرانب (1: 5،000)
مصنوعة جراحي صغير ملعقة بلاستيكية باستور دورق بنسن < td colspan = "4" >

المراجع

  1. Behnisch, T., et al. Nuclear translocation of Jacob in hippocampal neurons after stimuli inducing long-term potentiation but not long-term depression. PLoS One. 6 (2), e17276(2011).
  2. Cai, F., Frey, J. U., Sanna, P. P., Behnisch, T. Protein degradation by the proteasome is required for synaptic tagging and the heterosynaptic stabilization of hippocampal late-phase long-term potentiation. Neuroscience. 169 (4), 1520-1526 (2010).
  3. Chapman, C. A., Perez, Y., Lacaille, J. C. Effects of GABA(A) inhibition on the expression of long-term potentiation in CA1 pyramidal cells are dependent on tetanization parameters. Hippocampus. 8 (3), 289-298 (1998).
  4. Ch'ng, T. H., Uzgil, B., Lin, P., Avliyakulov, N. K., O'Dell, T. J., Martin, K. C. Activity-dependent transport of the transcriptional coactivator CRTC1 from synapse to nucleus. Cell. 150 (1), 207-221 (2012).
  5. Dieterich, D. C., et al. Caldendrin-Jacob: a protein liaison that couples NMDA receptor signalling to the nucleus. PLoS Biol. 6 (2), e34(2008).
  6. Fainzilber, M., Budnik, V., Segal, R. A., Kreutz, M. R. From synapse to nucleus and back again--communication over distance within neurons. J. Neurosci. 31 (45), 16045-16048 (2011).
  7. Hardingham, G. E., Bading, H. Synaptic versus extrasynaptic NMDA receptor signalling: implications for neurodegenerative disorders. Nat. Rev. Neurosci. 11 (10), 682-696 (2010).
  8. Ivanov, A., et al. Opposing role of synaptic and extrasynaptic NMDA receptors in regulation of the extracellular signal-regulated kinases (ERK) activity in cultured rat hippocampal neurons. J. Physiol. 57, 789-798 (2006).
  9. Jordan, B. A., Kreutz, M. R. Nucleocytoplasmic protein shuttling: the direct route in synapse-to-nucleus signaling. Trends Neurosci. 32 (7), 392-401 (2009).
  10. Karpova, A., et al. Encoding and transducing the synaptic or extrasynaptic origin of NMDA receptor signals to the nucleus. Cell. 152 (5), 1119-1133 (2013).
  11. Kim, M. J., Dunah, A. W., Wang, Y. T., Sheng, M. Differential roles of NR2A- and NR2B-containing NMDA receptors in Ras-ERK signaling and AMPA receptor trafficking. Neuron. 46, 745-760 (2005).
  12. Lai, K. O., Zhao, Y., Ch'ng, T. H., Martin, K. C. Importin-mediated retrograde transport of CREB2 from distal processes to the nucleus in neurons. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (44), 17175-17180 (2008).
  13. Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. LTP in cultured hippocampal-entorhinal cortex slices from young adult (P25-30) rats. J. Neurosci. Methods. 130 (1), 19-32 (2003).
  14. Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. Single cell analysis of activity-dependent cyclic AMP-responsive element-binding protein phosphorylation during long-lasting long-term potentiation in area CA1 of mature rat hippocampal-organotypic cultures. Neuroscience. 131 (3), 601-610 (2005).
  15. Perlson, E., Hanz, S., Ben-Yaakov, K., Segal-Ruder, Y., Seger, R., Fainzilber, M. Vimentin-dependent spatial translocation of an activated MAP kinase in injured nerve. Neuron. 45 (5), 715-726 (2005).
  16. Xiang, Z., et al. Long-term maintenance of mature hippocampal slices in vitro. J. Neurosci. Methods. 98 (2), 145-154 (2000).
  17. Zhao, M., Adams, J. P., Dudek, S. M. Pattern-dependent role of NMDA receptors in actin potential generation: consequences on extracellular signal-regulated kinase activation. J. Neurosci. 25 (30), 7032-7039 (2005).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

CA1 Jacob
عزل CA1 النووي المخصب الكسور من شرائح الحصين لدراسة تعتمد على نشاط استيراد النووية من رسول البروتينات Synapto النووية
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.