عزل الخلايا الجذعية السرطانية (الخلايا الجذعية السرطانية) مباشرة من الأنسجة البشرية اللازمة لتوصيف البيولوجية. يصف هذا المخطوط منهجية لعزل الخلايا الجذعية السرطانية في البروستاتا من الأنسجة البشرية، مع توفير النصائح حول استكشاف الأخطاء وإصلاحها الخطوات الصعبة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
عزل الخلايا الجذعية للسرطان من العينات البشرية سرطان البروستاتا
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وقد نموذج سرطان الخلايا الجذعية (CSC) النظر إلى حد كبير على مدى العقدين الماضيين. خلال هذا الوقت تم تحديد الخلايا الجذعية السرطانية ومعزولة مباشرة من الأنسجة البشرية ونشر متسلسل في الفئران العوز المناعي، وعادة من خلال وضع العلامات الضد من مجموعات سكانية فرعية من الخلايا وتجزئة من قبل التدفق الخلوي. ومع ذلك، فإن المظاهر السريرية فريدة من سرطان البروستاتا قد حدت كثيرا من دراسة الخلايا الجذعية السرطانية في البروستاتا من عينات الورم الإنسان الطازجة. نحن ذكرت مؤخرا عزل الخلايا الجذعية السرطانية في البروستاتا مباشرة من الأنسجة البشرية بحكم فئة HLA على النمط الظاهري الأول (HLAI) سلبية. ويتم حصاد خلايا سرطان البروستاتا من العينات الجراحية وفصلها ميكانيكيا. يتم إنشاء تعليق خلية وصفت مع HLAI وانسجة الأجسام المضادة مترافق fluorescently. يتم عزل مجموعات سكانية فرعية من الخلايا HLAI سلبية أخيرا باستخدام تدفق عداد الكريات. القيد الرئيسي لهذا البروتوكول هي طبيعة كثير من الأحيان المجهرية ومتعدد البؤر للالسرطان الأولية في عينات البروستاتا. مع ذلك، الخلايا الجذعية السرطانية معزولة البروستاتا الحية هي مناسبة للالتوصيف الجزيئي والتحقق من صحة وظيفية عن طريق زرع في الفئران العوز المناعي.
المقدمة
ويعتبر عدم التجانس Intratumoral أن تكون السمة المميزة للسرطان 1. في الواقع، وقد وصفت عدة آليات من عدم التجانس intratumoral، بما في ذلك الطفرة الجينية والتفاعل مع المكروية. بالإضافة إلى ذلك، قد تحتوي بعض أنواع السرطان التسلسل الهرمي الخلوية مع جزء من السكان من الخلايا الجذعية السرطانية (الخلايا الجذعية السرطانية) التي يسلك خصائص القدرات بدء الورم والتجديد الذاتي في المسلسل المقايسات زرع 2-5. وصفت في البداية في الدم 6، 7 الثدي، والدماغ 8 الأورام الخبيثة، كما تم دراسة الخلايا الجذعية السرطانية في سرطان البروستاتا 9-12 وكذلك أنواع الأورام الأخرى 2-5.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. حصاد وتجهيز الإنسان سرطان البروستاتا الأنسجة من العينات الجراحية
- إعداد اثنين من 50 مل البوليسترين أنابيب مخروطية تحتوي على 15 مل من معهد روزويل بارك التذكاري (RPMI) 1640 مستنبت تستكمل مع 10٪ مصل بقري جنيني (FBS) و 1٪ البنسلين / الستربتوميسين.
- موظفي الخدمة الباثولوجيا حصاد البروستاتا النقيلي العينات الأولية وسرطان البروستاتا وجراحة من الملطفة العينات، على التوالي، في إطار مجلس المراجعة المؤسساتي وافق البروتوكول. ويمكن الحصول على عينات من النقيلي الليمفاوية تشريح العقدة أثناء الجراحة الأو....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الشكل 1. البروستاتا البشرية الحصاد ورم السرطان والتدفق الخلوي مؤامرة توضح فئات معينة من السكان من سرطان البروستاتا الذي يصيب الانسان. (A) ويتم حصاد العقيدات ورم لتوليد تعليق خلية. تأكيد المحتويات الورم من العينة معالجتها باستخدام الهيماتوكسيلين التقليدية ويوزين تلطيخ. يتم استبعاد <.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يصف هذا البروتوكول عزلة الخلايا الجذعية السرطانية من أنسجة سرطان البروستاتا البشرية الطازجة. عدة اعتبارات هامة تؤثر على نتيجة ناجحة من هذا البروتوكول.
استعادة أعداد كبيرة من خلايا سرطان البروستاتا قابلة للحياة تعتمد على تقييم دقيق الإجمالي للعينات الجراحية. في تجربتنا، هو أفضل ضمان عزلة الناجح للخلايا الورمية البروستاتا عندما لاحظ العقيدات الورم العيانية ومعالجتها 10.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
أعلن عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من قبل مؤسسة الحريري ومؤسسة الأسرة TJ مارتل.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| RPMI | Gibco Life Technologies | 11875-093 | |
| مصل الأبقار الجنيني | Gibco Life Technologies | 10437-028 | |
| Penicillin Streptomycin | Gibco Life Technologies | 15140-122 | |
| PBS | Corning Cell Gro | 21-031-CM | |
| 60 مم ، 15 مم طبق زراعة الخلايا | Corning | 3295 | |
| 35 & الصغيره; مصفاة الخلايا m | BD Falcon | 352340 | |
| 50 مل أنبوب مخروطي | Crystalgen | 23-2263 | |
| 15 مل أنبوب مخروطي | Crystalgen | 23-2265 | |
| عازلة تحلل خلايا الدم الحمراء | Sigma | R7757 | |
| HLA الفئة الأولى (W6 / 32) الجسم المضاد PE | Abcam | ab43545 | |
| CD31 FITC الجسم المضاد | eBioscience | 11-0319-42 | |
| CD45 FITC الأجسام المضادة | Abcam | ab27287 | |
| IgG2a< / sub>κ الأجسام المضادة PE | BD Pharminogen | 555574 | |
| IgG1< / sub>& kappa; الأجسام المضادة FITC | BD Pharminogen | 551954 | |
| DAPI | Invitrogen | d3571 | |
| أنابيب البوليسترين 12 مم × 75 مم مع غطاء مصفاة الخلية | BD Falcon | 352235 | |
| Vortex Mixer | Crystalgen | CG-BV1000 | |
| 10٪ عازلة محايدة فورمالين | فيشر | RBBP-0480 |
المراجع
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144, 646-674 (2011).
- Magee, J. A., Piskounova, E., Morrison, S. J. Cancer stem cells: impact, heterogeneity, and uncertainty. Cancer Cell. 21, 283-296 (2012).
- Nguyen, L. V., Vanner, R., Dirks, P., Eaves, C....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
