مقالة منهجية

بسيط وبروتوكول السريع لقياس الدهون في خلايا الطحالب المحايدة عن طريق الإسفار

DOI:

10.3791/51441

⸱

مايو 30, 2014

 ,  ,  , 
1Department of Chemical and Materials Engineering, University of Alberta, 2Department of Chemical and Petroleum Engineering, University of Calgary

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يوصف بروتوكول بسيط لتحديد محتوى الدهن محايدة من خلايا الطحالب باستخدام إجراء تلطيخ النيل الأحمر. هذه التقنية لتوفير الوقت يوفر بديلا للدهون البروتوكولات التقليدية الكمي القائم على الجاذبية. وقد تم تصميمه لتطبيق معين من الأداء رصد العمليات الحيوية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتعتبر الطحالب المرشحين ممتازة لمصادر الوقود المتجددة بسبب قدرات التخزين الدهون الطبيعية. مراقبة قوية من عمليات التخمير الطحالب والكشف عن سلالات الغنية بالنفط الجديد يتطلب بروتوكول سريعة وموثوق بها لتحديد محتوى الدهون داخل الخلايا. الممارسات الحالية تعتمد إلى حد كبير على أساليب الجاذبية لتحديد نسبة الزيت، وضعت التقنيات منذ عقود التي هي مضيعة للوقت وتتطلب كميات عينة كبيرة. في هذه الورقة، يتم تضمينها النيل الأحمر، صبغة الفلورسنت التي تم استخدامها لتحديد وجود هيئات الدهون في أنواع عديدة من الكائنات الحية، إلى بروتوكول بسيطة وسريعة، وموثوقة لقياس المحتوى الدهني محايدة من protothecoides Auxenochlorella، خضراء الطحالب. يستخدم الأسلوب الإيثانول، مذيب خفيف نسبيا، لpermeabilize غشاء الخلية قبل تلطيخ و96 جيدا لوحة صغيرة لزيادة القدرة عينة خلال قياسات كثافة مضان. فقد كان تصميمإد مع تطبيق معين من الأداء رصد العمليات الحيوية. عينات المجففة سابقا أو عينات حية من ثقافة متنامية يمكن أن تستخدم في الفحص.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نظرا لقدرتها على تخزين الدهون تحت بعض الهيئات ظروف الإجهاد، تلقى الطحالب قدرا كبيرا من الاهتمام في السنوات الأخيرة كمصدر للوقود المتجددة المحتملة 1،2. يمكن أن الدهون محايدة تمثل أكثر من 60٪ من الوزن الجاف خلية في ظل ظروف النمو المناسبة 3. بعد صناعة لايوجد بروتوكول موحد بسيطة ونظيفة وسريعة، وموثوق بها ل quantitate المحتوى الدهني للخلايا الطحالب من أجل رصد أداء العمليات الحيوية بشكل صحيح وتحليل الثقافات، وشاشة لسلالات جديدة.

تطوير أسلوب بليغ-داير الجاذبية منذ نحو 50 عاما لا تزال من بين الأساليب الأكثر شيوعا المستخدمة اليوم 4،5. ف....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. عزل الطحالب الكتلة الحيوية الجافة لاستخدامها معايير الإسفار قراءات

  1. إزالة وحدة تخزين عينة من ثقافة الطحالب المتزايدة من شأنها أن توفر ما لا يقل عن 200 ملغ من الكتلة الحيوية الجافة، 400-600 ملغ هو الأفضل.
  2. عينة الطرد المركزي في 4 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة في 10،000 ز س. تجاهل طاف ويغسل بيليه مع حجم مساو من العازلة الفوسفات وضعت لنفس درجة الحموضة وسائل الاعلام النمو.
  3. كرر الخطوة 1.2 ليصبح المجموع 3 خطوات الغسيل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وصفت الخلايا الطحلبية ممثل ملطخة النيل الأحمر صبغ في الشكل 1. الجزأين ألف وباء من الشكل 1 عرض الصور A. protothecoides نمت في النيتروجين الزائد، مما يؤدي إلى تراكم الدهون منخفضة جدا داخل الخلايا. في أجزاء C و D، وعينات من A. وتظهر protothecoides نمت في ظل قيود النيتروجين. تحت إضاءة انتقال، يمكن تصور الهيئات الدهون من الخلايا مع تفتيش دقيق من الشكل 1C، حيث.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يجب أن تكون الطحالب المستخدمة في منحنى القياسية نفس الأنواع المزروعة تحت نفس الظروف التجريبية مثل تلك التي يجري قياسها. تغييرات كبيرة في تكوين وسائل الإعلام، وتقنية زراعة، وبروتوكول تلطيخ يمكن أن تؤثر على شدة القراءة مضان. وقد استخدم استخراج الهكسان (الموصوفة في المادتين 1 و 2) لتحديد محتوى الدهن محايدة من العينات المستخدمة في منحنى القياسية. لقياسات دقيقة كثافة مضان، يجب تحليل جميع العينات في تركيز الكتلة الحيوية نفسها (استخدمت 5 ز / L في هذه الدراسة). ويمكن بعد ذلك محتوى الزيت ت.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فإن الكتاب أود أن أشكر العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث كندا لتوفير الدعم المالي لهذا المشروع.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الوزن
25 مل ماصات يمكن التخلص منهافيشر13-676-10K
لمبة ماصةفيشر13-681-51
40 مل أنابيب الطرد المركزي نالجين تفلونفيشر05-562-16Aتفلون مطلوب لأطباق وزن الهكسان
(بولي بروبيلين)فيشر2-202B
1.5 مل أجهزة طرد مركزي دقيقة أنابيبفيشر05-408-129
أجهزة الطرد المركزيSorvallRC6plus
(فيشر 625D)فيشر13-254-2
قوارير تخزينفيشر0337-4
أجهزة الطرد المركزي الدقيقة (Eppendorf 5415D)فيشر05-40-100
القياس
ملاط البورسلين (كورستيك)فيشر12-961A
مدقة بورسلين (كورستيك)فيشر12-961-5A
40 مل أنابيب الطرد المركزي (FEP)فيشر05-562-16Aيمكن أيضا استخدام أنابيب زجاجية
ماصات زجاجية باستورفيشر13-678-20C
أطباق وزن الألومنيومفيشر08-732-101
الهكسانفيشرH292-4
القياس الكمي الفلوري لمحتوى
قارئ الألواح الفلورية متعدد الآبارأنظمة المختبر الحراريبرنامج
قارئ الصعودالفلوري برامج2.6
لوحة بئر COSTAR 96 ذات قاع دائريفيشر06-443-2
النيل الأحمرسيجماN3013-100MG
الإيثانول (درجة كاشف الكحول)فيشرAC65109-0020
تصوير الخلايا
Leica DMRXA2 (أو ما يعادلها) مجهرLeicaDMRXA2
شرائح المجهرفيشر12-550-15
زلات غطاء المجهرفيشر12-541B
كاميراQimagingRetiga السابقين
برنامج التصويرQimagingQCapture v.1.1.8
الجاف فرن تجفيف الكمي بالوزنيةالزيت الفلوروسكان برامج الصعود الصعود الحراري المختبر الفلورية

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chisti, Y. Biodiesel from microalgae. Biotechnol. Adv. 25, 294-306 (2007).
  2. National Algal Biofuels Technology Roadmap. Energy Efficiency & Renewable Energy. U.S. Department of Energy, Office of Energy Efficiency and....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

96

مقالات ذات صلة